细胞蜡块联合免疫组化技术在提高肺癌胸水细胞学阳性检出率及提供分型诊断方面的应用价值分析

吴冬梅 吴艳霞 袁振兴 王志强 郭润民

1.广东医科大学附属医院病理诊断与研究中心，广东湛江 524001；2.广东医科大学附属医院临床医学研究中心，广东湛江 524001；3.广东医科大学附属医院心血管内科，广东湛江 524001

肺癌是我国最常见的癌症[1]，约15%的肺癌患者在初诊时已存在胸腔积液， 约50%的患者在疾病进展过程中出现胸腔积液[2]。目前，我国对于恶性胸腔积液的精确诊断技术尚未成熟， 鉴别良、恶性胸腔积液依然存在争议[3]。近年来我院开展的胸水液基细胞学检查在胸水标本的制片质量和制片满意度方面优于传统涂片细胞学，对恶性胸腹水的诊断阳性率略高于传统细胞学检查，但差异无统计学意义[4]。为了解决这一问题，我院采用液基细胞学检查结合改良细胞蜡块技术，并进一步做免疫组化检查，取得了理想结果[5-7]。为观察细胞蜡块结合免疫组化技术在提高肺癌胸水细胞学阳性检出率以及提供分析诊断方面的应用价值，我院进行了相关研究，现报道如下。

表1　两种细胞学检查对肺癌诊断的灵敏性和特异性比较

1　资料与方法

1.1　一般资料

收集我院2015年10月～2017年12月经活检确诊肺癌患者胸水58例进行研究。其中男41例，女17例，年龄28～88岁，平均（56.33±12.33）岁。

1.2　方法

1.2.1研究方法 所有胸水标本分别进行薄层液基细胞学沉降式制片和制备成细胞蜡块后结合免疫组织化学染色两种方法进行检查。

薄层液基细胞学沉降式制片：取新鲜胸水标本100mL放置到保存液中，摇匀，取50mL使用1500r/min的离心机离心5min，弃掉上清液，加入5mL细胞固定液，摇匀，以1500r/min速度离心5min，弃掉上清液，加入1mL缓冲液，摇匀，取其中800μL在沉降仓内静置20min，弃除沉降液，加1mL冲洗液冲洗2次，1mL缓冲液2次，使用苏木素染液1mL染色，放置90s，倒掉，再次使用1mL冲洗液和1mL缓冲液冲洗2次，使用伊红染液1mL染色10s，再次冲洗2次，取出玻片，使用无水乙醇2min，二甲苯2min后封片。

制备细胞蜡块并使用免疫组化染色法：薄层液基细胞学沉降式制片后剩余胸水样本加入保存液，在4℃冰箱静置至细胞完全沉淀，弃除上清液，以2000r/min速度离心5min，取沉淀加入5mL福尔马林溶液震荡后以2000r/min速度离心5min，取沉淀，加入10mL 95%乙醇脱水，以2000r/min离心5min，在擦镜纸包裹下放入取材盒，脱水3h后常规包埋，切片。使用MaxVision二步法对细胞蜡块进行免疫组化染色。将蜡块切成厚度为3μm的蜡片，防脱玻片裱片，使用二甲苯进行脱蜡，常规梯度乙醇至水，高压修复，以3%H2O2室温下放置10min，一抗37℃孵育60min，二抗37℃15min，使用DAB显色。

1.2.2分析指标[3]以活检标本病理诊断为金标准，观察两种制片方法诊断的灵敏度和特异度。以及比较制片染色效果情况，观察细胞蜡块结合免疫组化结果对于肺癌分析诊断的准确率。灵敏度=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%。特异度=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%。

1.3　统计学分析

采用统计学软件SPSS19.0版对数据进行统计分析，计量资料采用（）表示，采用t检验，计数资料采用百分数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　两种细胞学检查对肺癌诊断的灵敏性和特异性比较

薄层液基细胞学沉降式制片对58例肺癌患者胸水诊断的灵敏度和特异度分别为81.25%、60.00%，明显低于细胞蜡块联合免疫组化染色法的95.83%、90.00%，且差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。薄层液基细胞学沉降式制片得到的图像对比清晰，细胞分别均匀，具有较好的细胞形态，但是对于成团、腺样等结构显示的较少，见图1。细胞蜡块结合免疫组化染色法得到的涂片染色对比清晰，细胞数目更为富集，均匀，细胞排列方式和结构在多数涂片中均能清楚显示，见图2。

2.2　细胞蜡块结合免疫组化结果对于肺癌分析诊断的准确率观察

图1　薄层液基细胞学沉降式制片（HE×400）

图2　细胞蜡块结合免疫组化染色法（HE×400）

48例经病理检查确诊为肺癌的患者，细胞蜡块结合免疫组化染色法检查总准确率为95.83%，其中腺癌的准确率最高，为94.12%。未分化癌检查的准确率最低，2例均未检测，4例标本细胞蜡块结合免疫组化染色法确诊为肺癌，但是无法分型。见表2。

表2　细胞蜡块联合免疫组化结果对于肺癌分析诊断的准确率观察

3　讨论

晚期肺癌患者的主要症状表现包括胸腔积液，对于恶性肿瘤引起的浆膜腔积液，影像学检查由于受积液干扰一般无法准确观察原发灶，也无法通过内镜活检、体外穿刺及手术切除获得组织标本，只能依靠浆膜腔积液细胞病理学检测寻找恶性证据[8]。因此浆膜腔积液细胞病理学诊断可能是这类患者唯一能起到确诊作用的选择[9]。液基细胞学检测技术应用于临床有100余年的历史，在妇科标本的检测中得到广泛应用[10]，并逐渐推广用于浆膜腔积液[10]和尿液[11]脱落细胞学检查。其与普通涂片相比，均匀薄层，细胞结构清晰，背景干净，能清晰的观察细胞三维结构，肺癌诊断率较高，但敏感性和特异性不高[4]。因为经过此种技术制备的细胞失去细胞排列方式和背景细胞，因此对于未分化癌、反应性间皮细胞癌等鉴别准确性较低，也存在免疫组化染色率低，标本不易长期保持等问题[6，12]。而改良的细胞蜡块技术是离心富集标本去除血细胞后，经过福尔马林和95%乙醇先后固定，再进行脱水、石蜡包埋进行制片[5，13]。从本次研究中看，液基细胞学对58例疑似肺癌患者诊断的灵敏度和特异度分别为81.25%、60.00%，明显低于细胞蜡块结合免疫组化染色法的95.83%、90.00%，且差异有统计学意义（P＜0.05），而且细胞蜡块结合免疫组化染色法能够更好的检查出细胞的结构，解决了传统细胞学检查的缺陷。48例经病理检查确诊为肺癌的患者，细胞蜡块结合免疫组化染色法检查总准确率（95.83%），其中腺癌的准确率最高（94.12%），未分化癌检查的准确率最低，2例均未检测[5,9,14]。

采用液基细胞学法与细胞蜡块组织切片法相结合，两者间相互补充能够更好的提升诊断效果，还能够达到组织学活检的目的，能为肿瘤的组织学分型、来源以及个体化治疗提供帮助[15]。晚期肺癌患者有时以体腔积液为首发症状，而传统细胞学检查仅提供恶性肿瘤的诊断，对于原发病灶的寻找并没有帮助， 但细胞蜡块组织切片具有可以反复连续切片的优点，因此应用细胞切片进行的其他辅助检查，可以为寻找原发病灶提供线索，同时能够进行组织分型及分子病理检测.有效指导肿瘤的分子靶向治疗，该方法的应用对于不易获取组织标本的晚期肺癌患者具有更重要的意义[16]。将液基细胞学法与细胞蜡块组织切片法相结合后，作为一种改良的细胞学制片技术，更能提高肺癌组织学分型的符合率。液基细胞学法联合细胞蜡块组织切片法对于难以取得组织活检标本的肺癌（如肿块表面出血坏死、气管镜下看不到肿块等情况）的病理组织分型诊断有着非常重大的意义。

综上所述，细胞蜡块结合免疫组化技术能够明显提高肺癌胸水细胞的阳性检出率，且能够为癌症分型诊断提供可靠依据。

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