Pim1蛋白在食管不同病变组织中的表达及临床意义

陈建丽，陈晓文

(1.新乡医学院第三附属医院肿瘤内三科，河南 新乡 453003；2.广东医科大学附属医院肿瘤中心，广东 湛江 524000)

食管癌是全球最致命的疾病之一，其主要病理类型是鳞状细胞癌，这一病理类型在中国食管癌病例中占90%以上[1-2]。有研究表明，Pim1蛋白在包括食管癌在内的多种实体肿瘤中高表达，可促进癌症发生[3]，其高表达预示患者预后不良[4]。Pim1基因调控食管癌细胞的增殖、凋亡，Pim1基因所编码的蛋白在食管癌发生、发展过程中可能起到关键作用。本研究应用免疫组织化学法检测Pim1蛋白在食管各种病变组织中的表达，分析其与食管癌患者临床病理参数的关系，旨在为食管癌的早期诊断及预后判断提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料收集2009年1月至2016年3月在新乡医学院第三附属医院行食管内镜检查男性患者的食管活检组织标本182例，其中正常鳞状上皮组织(距离食管癌组织边缘2 cm以上，经病理证实为正常食管组织)37例，低级别上皮内瘤变组织43例，高级别上皮内瘤变组织31例，食管鳞状细胞癌组织71例。患者年龄41～65岁，所有病例经病理学检查确诊。

1.2主要试剂与仪器Pim1抗体购于英国Abcam公司，兔单抗(工作浓度1150)、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)修复液购于美国SANTA CRUZ公司，免疫组织化学Envision法试剂盒购于丹麦DaKo公司；高压修复锅购于浙江苏泊尔股份有限公司，恒温培养箱购于北京凯元伯乐生物科技有限公司。

1.3免疫组织化学法检测不同食管组织中Pim1蛋白表达食管组织石蜡切片脱蜡、水化，高压微波抗原修复，二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DBA)显色，苏木精染缸中复染2 min，依次放入体积分数70%、80%、90%、100%的乙醇溶液中各5 min进行脱水处理，依次放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ溶液中各5 min进行透明处理，晾干，中性树胶封片，最后将石蜡切片置于通风柜，待封片干燥后显微镜下观察。

1.4结果判定Pim1蛋白定位于细胞核，以细胞核出现黄色颗粒为阳性染色，参考LIU等[4]的判读标准，综合考虑阳性细胞百分比及着色强度半定量判定结果：(1)每例患者随机观察5个高倍视野，在无背景着色条件下，细胞核无着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；(2)阳性细胞所占比例≤1%为0分，1%～25%为1分，25%～50%为2分，50%～75%为3分，75%～100%为4分。以阳性细胞百分比得分与着色强度得分的乘积为总得分，

总得分0～2分为阴性(-)，3～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。设定“-”和“+”为低表达，“++”和“+++”为高表达。

1.5统计学处理应用SPSS 20.0软件进行统计学分析，不同食管组织中的Pim1蛋白表达强度比较采用Kruskal-WallisH检验，不同食管组织中Pim1蛋白阳性表达率比较采用χ2检验，Pim1蛋白阳性表达率与临床病理参数的相关性分析采用χ2检验；检验水准α=0.05。

2 结果

2.1Pim1蛋白在不同食管组织中的表达Pim1蛋白在食管正常鳞状上皮、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和鳞状细胞癌组织中的表达呈逐渐升高趋势(图1)。食管正常鳞状上皮、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和鳞状细胞癌组织中Pim1蛋白高表达率比较差异有统计学意义(χ2=41.877，P<0.05)。食管低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、鳞状细胞癌等组织中Pim1蛋白高表达率显著高于食管正常鳞状上皮(χ2=11.89、14.79、26.70，P<0.05)，食管低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及鳞状细胞癌组织中Pim1蛋白高表达率比较差异均无统计学意义(P>0.05)；见表1。

A：正常鳞状上皮；B：低级别上皮内瘤变；C：高级别上皮内瘤变；D：鳞状细胞癌。

图1不同食管组织中Pim1蛋白表达(免疫组织化学Envision法，×200)

Fig.1ExpressionofPim1proteinindifferentesophagealtissues(immunohistochemicalEnvision，×200)

表1Pim1蛋白在食管不同组织中的表达

Tab.1ExpressionofPim1proteinindifferentesophagealtissues

组织类型nPim1蛋白表达-/例(%)+/例(%)++/例(%)+++/例(%)高表达率/%正常鳞状上皮3723(62.1)5(13.5)8(21.6)1(2.7)24.3低级别上皮内瘤变4310(23.2)6(13.9)18(41.9)9(20.9)62.8a高级别上皮内瘤变312(6.4)7(22.5)19(61.3)3(9.7)70.9a鳞状细胞癌7111(15.5)6(8.5)17(23.9)37(52.1)76.1a

注：与正常鳞状上皮比较aP<0.05。

2.2食管鳞状细胞癌组织中Pim1蛋白表达与临床病理特征的关系结果见表2。Pim1蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)，与患者年龄、组织学分级无关(P>0.05)。

表2Pim1蛋白表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的相关性

Tab.2CorrelationbetweenexpressionofPim1proteinandclinicopathologicalfeaturesinpatientswithesophagealsquamouscellcarcinoma

临床病理特征nPim1蛋白低表达/例高表达/例χ2P年龄 <51岁332490.3750.540 ≥51岁38308组织学分级 Ⅰ、Ⅱ级5139120.0170.896 Ⅲ级20155淋巴结转移 无393455.8790.015 有322012TNM分期 Ⅰ、Ⅱ期231494.3090.038 Ⅲ、Ⅳ期48408

3 讨论

Pim1在多种实体肿瘤中高表达，是一个促癌基因[2]。LIU等[4]研究发现，Pim1在食管鳞状细胞癌中的表达高于食管正常组织，且其高表达预示着预后不良。HAN等[5]研究证实，通过沉默Pim1基因可以抑制食管癌细胞增殖，促进细胞凋亡。本研究发现，食管正常鳞状上皮、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、鳞状细胞癌组织中Pim1蛋白表达呈逐渐升高趋势，提示Pim1在食管癌的发生、发展过程中起促癌基因作用。另外，Pim1蛋白在食管低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、鳞状细胞癌等组织中的表达显著高于食管正常鳞状上皮组织，提示Pim1蛋白可能在食管正常鳞状上皮向上述3种组织转化的过程中起着重要作用。Pim1蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关，提示Pim1表达水平可能是影响食管癌患者TNM分期的重要因素，其高表达促进了淋巴结的浸润，从而进一步影响食管癌患者的预后。

Pim1在食管癌中受miRNA的多重调控[5-6]，而miRNA在食管以外的其他肿瘤中涉及多种转录因子的调控或信号通路的激活[7-9]，类似的机制同样可能在食管癌中存在。Pim1基因影响食管癌发生及进展的机制十分复杂，可能成为食管癌治疗的研究热点。有研究显示，Pim1高表达会降低肿瘤细胞对药物治疗的敏感性[10-11]，目前已有针对Pim1的靶向药物正在研发当中[12]。提示Pim1抑制剂对肿瘤的治疗具有十分重要的意义，Pim1可能成为食管癌治疗的新靶点。

综上所述，Pim1可能成为食管癌早期诊断及预后判断的一个新的分子标志物，有待更大样本量的研究进一步验证。

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