人附睾蛋白4和糖类抗原125在子宫内膜癌组织中的表达

周开梅，袁森辅，吴 晶，沈祥林

(1.宜宾市第一人民医院病理科，四川 宜宾 644000；2.宜宾市第一人民医院妇科，四川 宜宾 644000)

子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)是原发于子宫内膜的一种上皮性恶性肿瘤，可发生于各年龄段女性，尤以围绝经期和绝经后女性居多。由于EC早期诊断率较低，导致大部分患者预后不良，病死率较高。因此，提高EC早期诊断的敏感性和准确性是改善患者预后的重要措施[1]。肿瘤标志物检测是肿瘤患者的一项重要检查，对肿瘤诊断、病情评估、个体化治疗及预后判断均有较大的意义[2]。糖类抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)是目前EC检查常用的肿瘤标志物，约11%～33%的EC患者血清CA125水平升高[3]。人附睾蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年来研究发现的一种新型肿瘤标志物，是迄今为止最敏感最准确的EC标志物[4]。目前，对于CA125和HE4的研究多聚焦在血清水平，关于二者在肿瘤组织中表达的研究较少[5-6]。本研究采用免疫组织化学法检测EC组织及癌旁组织中HE4和CA125的表达，旨在从分子水平探讨二者与EC发生和发展的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2015年12月至2016年12月宜宾市第一人民医院妇科收治的EC患者35例，年龄36～72(48.4±9.1)岁，<60岁26例，≥60岁9例；病理类型：子宫内膜样腺癌21例，透明细胞癌5例，浆液性乳头样腺癌9例；国际妇产科联盟(federation international of gynecology and obstetrics，FIGO)分期[7]：Ⅰ期6例，Ⅱ期9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例；组织分化程度：低分化6例，中分化12例，高分化17例；肿瘤直径：<2 cm者18例，≥2 cm者17例；肌层浸润深度：<1/2者17例，≥1/2者18例；有淋巴结转移19例，无淋巴结转移16例。所有患者术后经病理学检查确诊为EC，术前未接受过放射治疗、化学治疗及激素治疗。

1.2主要试剂与仪器鼠抗人CA125单克隆抗体、鼠抗人HE4单克隆抗体及碱性磷酸酶标记的链霉亲和素-生物素法检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；HH-ZKS4电热恒温水浴箱(上海科升仪器有限公司)，BD-200光学显微镜(深圳博士达光学仪器有限公司)。

1.3免疫组织化学法检测EC组织及癌旁组织中HE4和CA125表达术中留取新鲜EC组织和癌旁组织，使用40 g·L-1多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，展片，烤片；常规脱蜡和水化；正常羊血清工作液封闭，室温下孵育10～20 min；弃去封闭液，勿洗；滴加一定比例稀释后的一抗(鼠抗人CA125单克隆抗体、鼠抗人HE4单克隆抗体)，4 ℃孵育过夜；磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)洗3次，每次3 min；滴加适量(10～30 μL)生物素标记二抗工作液，37 ℃孵育10～15 min；PBS洗3次，每次 3 min；滴加适量(10～30 μL)碱性磷酸酶标记的链霉卵白素，37 ℃孵育10～15 min；PBS洗3次，每次3 min；滴加碱性磷酸酶显色剂30～50 μL，室温下显色30 min。显微镜下观察，待阳性部位出现红色标记物时，用PBS洗涤3次，每次3 min；滴加细胞核复染液30～50 μL，5～10 s后自来水洗涤；水溶性封片剂封片，镜检。

1.4结果判定HE4主要定位于细胞质，阳性表达为肿瘤细胞细胞质内出现棕黄色颗粒或团块，CA125主要定位于细胞膜，阳性表达为细胞膜被染成棕黄色。每个病例选5张切片，光学显微镜400倍视野下，每张切片随机选取10个视野，根据瘤细胞显色程度及显色细胞比例进行评分。显色程度评分：不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。显色细胞比例评分：显色细胞占1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，>80%为4分。综合评分=显色程度评分×显色细胞比例评分，综合评分：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～6分为中等阳性(++)，>6分为强阳性(+++)。阳性率=(弱阳性+中等阳性+强阳性)/总例数×100%。所有病理切片均由3位病理科医师轮流阅片评定。

1.5统计学处理应用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计学分析。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1EC组织及癌旁组织中HE4和CA125的表达结果见图1、图2和表1。HE4、CA125阳性表达呈棕黄色或棕褐色颗粒，呈点、片状分布于子宫内膜细胞的细胞膜及细胞质；EC组织中HE4和CA125阳性表达率显著高于癌旁组织，差异均有统计学意义(χ2=35.831、25.533，P<0.05)。

A：CA125在EC组织中的阳性表达；B：CA125在EC组织中的阴性表达；C：CA125在癌旁组织中的阳性表达；D：CA125在癌旁组织中的阴性表达。

图1EC组织及癌旁组织中CA125的表达

Fig.1ExpressionofCA125inECandparacanceroustissues

A：HE4在EC组织中的阳性表达；B：HE4在EC组织中的阴性表达；C：HE4在癌旁组织中的阳性表达；D：HE4在癌旁组织中的阴性表达。

图2EC组织及癌旁组织中HE4的表达

Fig.2ExpressionofHE4inECandparacanceroustissues

表1EC组织及癌旁组织中HE4和CA125表达比较

Tab.1ComparisonoftheexpressionofHE4andCA125inECandparacanceroustissues

组织类型nHE4表达-/例+/例++/例+++/例阳性率/%CA125-/例+/例++/例+++/例阳性率/%癌旁组织353140011.43050014.3EC组织3565131182.9a9612874.3a

注：与癌旁组织比较aP<0.05。

2.2HE4与CA125表达与EC临床病理特征的关系结果见表2。Ⅲ、Ⅳ期EC组织中HE4、CA125阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期EC组织，中、低分化EC组织中HE4、CA125阳性表达率显著高于高分化EC组织，肌层浸润深度≥1/2的EC组织中HE4、CA125阳性表达率显著高于肌层浸润深度<1/2的EC组织，发生淋巴结转移的EC组织中HE4阳性表达率显著高于无淋巴结转移的EC组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。EC组织中HE4、CA125的表达与患者年龄、肿瘤大小及病理类型无显著相关性(P>0.05)，EC组织中CA125的表达与淋巴结转移无显著相关性(P>0.05)。

表2HE4与CA125表达与EC患者临床病理特征的关系

Tab.2RelationshipbetweentheexpressionofHE4andCA125andclinicopathologicalfeaturesofECpatients

临床病理特征nHE4-/例+/例++/例+++/例阳性率/%χ2PCA125-/例+/例++/例+++/例阳性率/%χ2P年龄 <60岁265510680.80.3100.806758673.10.0001.000 ≥60岁9103588.9214277.8FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ期15644160.09.6550.003744053.34.2660.039 Ⅲ～Ⅳ期2001910100.0228890.0组织分化程度 高分化17653364.77.6670.008754158.84.1370.042 中、低分化1800108100.0218788.9肿瘤大小 <2cm18446477.80.6730.658746161.13.3670.121 ≥2cm17217788.2226788.2肌层浸润深度 <1/217633564.77.6670.008825252.97.8840.007 ≥1/21802106100.0147694.4淋巴结转移 无16635262.58.5990.005535368.80.4730.700 有190289100.0437578.9病理类型 腺癌21319885.7547576.2 透明细胞癌50131100.02.8160.245212060.00.6320.729 浆液性乳头样腺癌9331266.7213377.8

2.3EC组织中HE4与CA125表达的关系Spearman相关分析显示，EC组织中HE4表达与CA125表达呈显著正相关(r=0.608，P<0.05)。

3 讨论

EC是女性生殖系统恶性肿瘤之一，占全部妇科恶性肿瘤的20%～30%，其发病率仅次于乳腺癌，并且近年来其发病率呈逐年上升趋势[8]。据统计，约70%的EC患者可在疾病早期获得诊断，预后良好，而晚期及复发患者通常预后较差，病死率较高[9]。因此，提高EC早期诊断率对改善患者预后具有重要意义。目前，EC的诊断主要依靠影像学检查和分段诊刮术，但在早期诊断的敏感性、特异性等方面仍存在不足。肿瘤标志物检测作为一项无创性检查项目，在肿瘤疾病普查、诊断、治疗中得到了广泛的应用[10]。

CA125是一种由体腔上皮细胞分泌的高分子糖蛋白化合物，是最早被公认的理想的血清肿瘤标志物，其水平升高对EC的进展具有指示意义。但由于在多种经上皮细胞病理性转化而来的组织中均可见CA125表达增加，使得CA125单项检测在EC的早期诊断及与良性妇科疾病的鉴别诊断等方面应用受限[11]。HE4是一种蛋白酶抑制剂，主要分布于生殖系统上皮细胞中，在免疫防御及免疫调节等方面具有重要作用。研究表明，HE4具有促进细胞增殖和肿瘤生长、增强肿瘤侵袭能力的生物特性，被认为是EC发展的致瘤或肿瘤促进因素[12]。目前，CA125和HE4的研究主要集中于血清学层面。临床研究显示，EC患者血清CA125和HE4水平均显著高于良性子宫内膜疾病患者及健康女性，表明血清CA125和HE4检测可用于EC的诊断[13-15]。

本研究结果显示，CA125和HE4在EC组织中多为中等至强阳性表达，且阳性表达率均显著高于癌旁组织，提示CA125和HE4高表达与EC的发生有关，HE4可作为高敏感性肿瘤标志物，与CA125联合检测用于EC的辅助诊断。本研究对CA125和HE4表达与EC的临床病理特征进行了观察，结果显示，CA125、HE4均在晚期、深肌层浸润及中、低分化肿瘤组织中呈现高表达，其表达强度显著高于早期、浅肌层浸润及高分化肿瘤组织，EC组织中CA125和HE4的表达均与EC的临床分期、组织分化程度及肌层浸润深度有关，但与患者年龄、肿瘤大小及病理类型无关；这与孙润蛟等[16]的研究结果相一致，但也有研究发现，EC组织中HE4表达与组织分化程度无关[17]。另外，本研究发现，HE4的表达还与淋巴结转移有关，而CA125表达与淋巴结转移无明显相关性，提示联合检测CA125与HE4可能提高EC淋巴结转移发生的预测价值。

综上所述，CA125和HE4可能与EC的发生、发展密切相关，联合检测CA125和HE4对EC的早期诊断及预后评估具有重要意义。

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