“以俞调枢”法对Cajal间质细胞缺失模型大鼠胃肠动力学主要指标的影响

陈峭，谢胜，周晓玲，税典奎，覃婧，侯秋科，颜春艳，刘珊，刘礼剑，覃凤传，刘莹，梁梦月

本文创新点：

（1）本研究初步阐明了“以俞调枢”法可能通过调节血液中脑肠肽来达到促进胃动力的目的，为进一步拓宽该技术的临床应用提供了科学理论依据。（2）“以俞调枢”法是通过何种途径调节脑肠肽的变化，仍有待进一步深入研究。

“以俞调枢”法是指以足太阳膀胱经背俞指针疗法调理脏腑气机升降之枢纽的中医外治疗法［1］，该疗法能够明显改善患者胃肠道动力，对胃食管反流病［2］、功能性消化不良［3］、肠易激综合征［4］、慢传输型便秘［5］等胃肠动力障碍相关性疾病均具有良好的临床疗效。“以俞调枢”法是如何影响胃肠道动力学的改变呢。本研究拟通过观察“以俞调枢”法干预Cajal间质细胞（ICC）缺失模型大鼠后其胃肠动力学主要指标的变化情况，探索该疗法改善胃肠动力学可能的作用机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 2016年1—12月，选取清洁级SD大鼠120只，体质量（200±20）g，雌雄各半。SD大鼠由广西医科大学动物实验中心提供（动物许可证号SCXK桂2014-0002），普通饲料适应性喂养2周。

1.2 试剂仪器与主要试剂 抗干细胞因子受体单克隆抗体（Anti-Mouse CD117 Purified）、乌拉坦，胃动素、胃泌素、血管活性肠肽、生长抑素放射免疫药盒、抑肽酶、乙二胺四乙酸二钠等（由南京东极生物科技有限公司提供）。

1.3 营养性半固体糊的制备 取羧甲基纤维素钠10 g溶于蒸馏水250 ml中，加入奶粉16 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，搅拌均匀，配制成约300 g的黑色半固体糊状物300 ml，冰箱4 ℃冷藏，用时恢复至室温。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及干预方法 将SD大鼠随机分为造模组60只和空白组60只。造模组再随机分为模型对照亚组30只和模型治疗亚组30只，空白组再随机分为空白对照亚组30只和空白治疗亚组30只。

空白对照亚组，每日固定22 min，不实施背俞指针治疗，连续14 d；空白治疗亚组，每日固定22 min，并实施背俞指针治疗，连续14 d；模型对照亚组，每日固定22 min，不实施背俞指针治疗，连续14 d；模型治疗亚组，每日固定22 min，并实施背俞指针治疗，连续14 d。

1.4.2 造模及给药

1.4.2.1 ICC缺失模型大鼠的制备 造模组参照JANSSEN等［6］方法制备ICC缺失模型，经腹腔隔天注射抗c-Kit单克隆抗体（ACK2）100 μg，共5次。期间观察大鼠的精神活动、饮食情况、粪便性质和体质量改变等。同时，根据《实验针灸学实验指导》［7］的要求，采用8%硫化钠溶液对大鼠背部督脉和腹部任脉循行路线进行脱毛处理（宽度2.5～3.5 cm）。

1.4.2.2 取穴和指针方法 选取双侧足太阳膀胱经肺俞、心俞、膈俞、肝俞、脾俞及肾俞（穴位的定位根据中国针灸学会实验针灸研究会指定的动物针灸穴位图谱［8］）进行治疗：以拇指指腹在每个穴位按照先点按1 min，后按揉2 min的手法操作，3 min/穴，共18 min，实际操作时间约22 min（包含操作过程中大鼠逃避而未能实施操作时间约4 min）。相同穴位按由左至右顺序，不同穴位按由下而上顺序。推拿手法参数测定仪进行监测，推拿手法参数：刺激量以大鼠无挣扎为度，根据以往经验，按揉垂直力度3.5～4.5 N，点压垂直力度5～7 N。操作频率为120～160次/min，1次/d，疗程为2周。

1.5 观察指标及测定标准

1.5.1 胃内残留率及小肠推进率的测定 取材前给予大鼠黑色半固体糊状物10 ml/kg灌胃处理，30 min后用20%乌拉坦10 ml/kg腹腔麻醉。开腹，结扎胃贲门和幽门，取胃，用滤纸吸干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后擦干，称净重。胃全重与胃净重之差即为胃内残留物质量，以胃内残留物与所灌黑色半固体糊状物质量的百分比为胃内残留率。同时迅速取出小肠，轻轻剥离后直铺于白纸上，测量幽门至回盲肠部全长及幽门至黑色半固体糊状物前沿的距离。以幽门至黑色半固体糊状物前沿的距离与幽门至回盲部全长的百分比为小肠推进率。

1.5.2 胃动素、胃泌素、血管活性肠肽和生长抑素的测定将治疗前后各组大鼠血浆、血清标本在测定前混匀，4 ℃1 500 r/min离心15 min，离心半径12 cm，取上清液采用放射免疫分析法按说明书在每个测定管中依次加入不同稀释浓度的对照品、待测样品及抗体，4 ℃温育24～48 h，加入125I标记的相应抗原，继续4 ℃温育24～48 h后，每管加免疫沉淀剂0.5～0.6 ml，充分混匀，室温放置20 min后，4 ℃ 3 500 r/min离心20 min，离心半径12 cm，吸弃上清液，测定各沉淀管的放射性计数，并分别按胃动素、胃泌素、血管活性肠肽、生长抑素酶联免疫试剂盒的计算方法求出相应待测血浆、血清样本的样本值。

1.6 统计学方法 应用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。计量资料以（x ±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠胃内残留率和小肠推进率比较 4组大鼠胃内残留率和小肠推进率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型对照亚组大鼠胃内残留率高于空白对照亚组，小肠推进率低于空白对照亚组，差异有统计学意义（P＜0.05）；模型治疗亚组大鼠胃内残留率、小肠推进率与空白对照亚组、空白治疗亚组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；模型治疗亚组大鼠胃内残留率低于模型对照亚组，小肠推进率高于模型对照亚组，差异有统计学意义（P＜0.05，见表1）。

2.2 各组大鼠胃动素、胃泌素比较 4组大鼠胃动素、胃泌素比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型对照亚组大鼠胃动素、胃泌素低于空白对照亚组、模型治疗亚组，差异有统计学意义（P＜0.05）；空白对照亚组、空白治疗亚组大鼠胃动素、胃泌素与模型治疗亚组比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表2）。

2.3 各组大鼠血管活性肠肽、生长抑素比较 4各组大鼠血管活性肠肽、生长抑素比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型对照亚组大鼠血管活性肠肽、生长抑素高于空白对照亚组、模型治疗亚组大鼠，差异有统计学意义（P＜0.05）；空白对照亚组、空白治疗亚组大鼠血管活性肠肽、生长抑素与模型治疗亚组比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表3）。

3 讨论

胃肠动力障碍主要是指各种病因引起胃肠道平滑肌细胞运动功能发生障碍的病理过程，常见于胃食管反流病、功能性消化不良、肠易激综合征、慢传输型便秘等胃肠动力性疾病，也可见于其他系统疾病如糖尿病胃轻瘫、急性重症胰腺炎及术后炎性肠麻痹等［6］。研究发现，随着生活节奏的加快、人们精神压力的加大，胃肠动力障碍相关性疾病的发病率剧增，且造成相当高的医疗费用，已成为现代社会中一个主要的医疗保健问题［9］。临床中有60%～80%的消化道疾病患者最终被确诊为胃肠动力障碍相关性疾病［10］。而当前在发达国家每年平均用于研发促胃肠动力药物的耗资高达数十亿美元，已有甲氧氯普胺、多潘立酮、西沙比利、莫沙比利、格拉司琼、替加色罗及伊托必利等药物相继应用于临床［11-12］。但临床使用表明，这些促胃肠动力西药的疗效尚欠理想，并且还存在中枢神经系统、血液循环系统及其他不良反应［12］。而我国目前还没有开发出理想且具有自主知识产权的胃肠动力药物。因此，探索一种行之有效的改善胃肠动力的治疗方案具有重大的社会意义和经济学价值。

表1 各组大鼠胃内残留率和小肠推进率比较（x±s，%）Table 1 Comparison of the incidence of gastric residue and small intestinal motility rate between the 4 subgroups of rats

表2 各组大鼠胃动素、胃泌素比较（x±s，pg/ml）Table 2 Comparison of the mean motilin level and gastrin between the 4 subgroups of rats

表3 各组大鼠血管活性肠肽、生长抑素比较（x±s，pg/ml）Table 3 Comparison of the mean plasma vasoactive peptide level and stmatostatin between the 4 subgroups of rats

“以俞调枢”法治疗胃肠动力障碍有巨大的疗效优势，目前该疗法已在全国150余家医疗机构推广应用，于2009年被推荐为国家级适宜技术推广项目，先后获得2009年度柳州市科技进步奖一等奖，2010年度广西医药卫生适宜技术推广奖二等奖，2010年度广西科技进步三等奖。

背俞穴为脏腑之气转输于背腰部并流注于全身的枢纽区域［13］，与五脏六腑有着直接的联系，故以指针刺激背俞穴能直接调整脏腑功能的盛衰［14］。而胃肠动力障碍相关性疾病多以胃脘痛、胃痞、反酸、便秘等为主要表现，气机升降功能失调为其主要病机。肺为气之主，肾为气之根，脾胃为气机升降的枢纽，肝主疏泄、条畅气机，五脏六腑同气机的正常运行均密切相关。经络是气机升降出入的通路，五脏六腑之气通过十二经脉相互沟通，共同维系人体气机正常的运行［15］。而督脉为阳脉之海，任脉为阴脉之海，唯有任督二脉在走行上与十二经脉相互交通，共同参与了十二经脉的全身气血循行。督升任降，任督二脉的经气运行调和，环周有序，升降有常，这正是脾胃等脏腑气机正常运行的基础［15］。因此，任督二脉经气升降交通不利可能是导致脏腑气机升降失衡的根本原因，并最终导致胃肠道平滑肌运动功能的障碍，而“以俞调枢”法能够通过改善任督二脉经气的运行，进而起到改善胃肠动力的作用。

现代神经胃肠病学研究也表明，胃肠运动受大脑支配和肠神经系统共同支配调控［16］。在生理情况下，胃肠激素（主要是指脑肠肽）可通过中枢神经系统及胃肠平滑肌细胞系统共同调节胃肠的运动。根据不同脑肠肽成分对胃肠道平滑肌细胞的收缩或舒张效应的不同，可将其分为兴奋性脑肠肽和抑制性脑肠肽［17-19］。其中，起兴奋作用的主要脑肠肽为胃动素、胃泌素，起抑制作用的主要脑肠肽为生长抑素、血管活性肠肽［20］。本研究表明，ICC缺失模型大鼠可以复制胃肠动力低下的大鼠模型，影响大鼠的胃肠动力，表现为胃内残留率增加和小肠推进率下降，与相关研究结果一致［21-22］。而“以俞调枢”法能够使ICC缺失模型大鼠胃内残留率显著降低，小肠推进率显著升高，进一步研究表明，ICC缺失模型大鼠胃动素、胃泌素显著下降，血管活性肠肽和生长抑素显著升高，而采用“以俞调枢”法干预后，其胃动素、胃泌素显著升高，血管活性肠肽和生长抑素显著降低。因此，可以推论：“以俞调枢”法能够提供增加胃肠动力低下大鼠血液中的胃动素、胃泌素，同时又可以降低其血液中生长抑素、血管活性肠肽，从而达到改善胃肠动力的作用。

综上所述，“以俞调枢”法具有显著改善胃动力的作用，其机制可能是通过调节血液中脑肠肽来达到促胃肠动力的目的，为进一步拓宽该技术的临床应用提供了科学的理论依据。至于“以俞调枢”法是通过何种途径调节脑肠肽的变化，仍有待进一步深入研究。

作者贡献：陈峭进行了文章的构思与设计，撰写论文；谢胜、税典奎进行科研技术指导和文章的可行性分析；覃婧、侯秋科、颜春艳、刘珊、刘礼剑进行资料收集与数据整理及统计学分析；覃凤传、刘莹、梁梦月进行动物实验操作与指标的检测；周晓玲进行了论文的修订与英文的修订及文章的质量控制及审校。

本文无利益冲突。

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