1型AIH患者外周血T细胞PD-L1的表达及与肝功能的相关性

熊克宫 柯坤宇 孔金峰 陈丽芳

自身免疫性肝炎（AIH）是一种自身免疫反应所介导的慢性肝损伤，病因和发病机制仍未阐明[1]。程序性死亡因子配体1（PD-L1）通过与其受体相互作用，从而介导负性共刺激信号，与多种自身免疫性疾病密切相关[2]。但目前关于PD-L1表达与1型AIH的相关性研究却报道较少，现研究探讨1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞表面PD-L1表达情况及其与肝功能的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象

我院2014年1月—2017年8月收治的62例1型AIH患者。AIH参考2010年美国肝病学会更新的AIH诊治指南[3]。缓解是指症状消失，血清转氨酶、胆红素及IgG均正常，肝组织正常或无活动性肝硬化。另选取20例健康者为对照组。排除合并其他肝病者。

1.2 PD-L1表达的检测

每例患者采取外周静脉血5 ml，EDTA抗凝，6 h内送检。取100 μl全血分别加入2支试管中，各加入10 μl抗体，其中1支加入小鼠抗人PE-PD-L1、FITC-CD4、FITC-CD8、CD3 PerCP-Cy5.5，另1支加入FITC-IgGl、PE-IgGl。避光室温孵育30 min，加入2 ml红细胞裂解液避光静置10 min，加缓冲液洗涤3次，1%多聚甲醛重悬细胞，立刻上机流式细胞仪检测。以CD3及CD4双阳性圈定为CD4+T淋巴细胞，以CD3及CD8双阳性圈定为CD8+T淋巴细胞，再测定CD4+、CD8+T淋巴细胞PD-L1阳性比例。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 研究对象一般资料

62例1型AIH患者，其中活动期43例，男性4例、女性39例，平均年龄（46.8±12.1）岁；缓解期19例，男2例、女17例，平均年龄（48.3±12.5）岁。活动期组血清转氨酶、胆红素、GGT、ALP、IgG较缓解期组均下降（均P＜0.05），而自身抗体谱及自身抗体滴度之间差异无统计学意义。

2.2 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1表达情况

外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1的表达率均高于对照组，且活动期组、缓解期组及对照组逐渐下降（均P＜0.05）（详见表1）。

2.3 1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1表达与肝功能的相关性

1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-1表达与TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相关（r=0.773、0.851、0.734、0.814，均P＜0.05）。

3 讨论

AIH可能是各种诱发因素、自身抗原、遗传因素和免疫调节之间错综复杂的相互作用而使自身免疫耐受被打破，由自身免疫异常导致的慢性免疫性肝损伤。目前，随着医务人员对AIH的不断认识，我国AIH诊断率呈逐年升高趋势。

PD-L1是B7家族的重要成员，通过与受体PD-1相互作用，参与调控免疫应答过程中效应性T淋巴细胞的凋亡。PD-L阳性细胞能与表达PD-1的T、B淋巴细胞相互作用，降低T、B淋巴细胞免疫效应并抑制其功能，避免外周组织受自身免疫系统的攻击，从而防止疾病的发生发展[4]。国内关于PD-1及其配体的研究主要集中在病毒性肝炎和风湿性疾病[5-6]。亦有研究发现外周血PD-L1是1型AIH有用的诊断指标，且能反应1型AIH患者临床特征。柯坤宇等[7-8]研究表明PD-L1在AIH患者肝组织中表达上调，并与患者临床指标密切相关。由此可见，PD-1/PD-L1介导的免疫功能异常在免疫相关性疾病中的作用已被人们所关注，但PD-L1在AIH中的研究仍较少。

表1 各组外周血T淋巴细胞PD-L1的表达率

研究发现1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1的表达率高于对照组。这与理论上自身免疫性疾病患者PD-1/PD-L1的表达应下调不符，推测T细胞PD-L1虽表达上调，但是表达PD-L1的T细胞的增殖能力反而下降，从而没有达到下调免疫反应及抑制自身免疫的作用，T细胞PD-L1高表达可能是机体的代偿反应。PD-L1在AIH活动期组患者外周血CD4+、CD8+T细胞的表达率高于缓解期组。提示免疫抑制剂治疗可能通过提高表达PD-L1的CD4+、CD8+T细胞的增殖能力，使PD-L1的表达下调而发挥作用。此外，本研究亦发现1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1表达与TBIL、ALT、AST及IgG水平均呈正相关。提示PD-L1可能参与了1型AIH疾病进展。分析原因可能为特异性T细胞功能部分恢复后，机体免疫仍处于紊乱状态，炎性反应加重，肝细胞死亡增加，胆红素代谢障碍，机体为恢复免疫耐受而过度表达PD-L1。

综上所述，1型AIH患者外周血CD4+、CD8+T细胞PD-L1表达率增加，且与肝功能指标密切相关，提示PD-L1参与了1型AIH的发生发展，其具体机制有待今后进一步研究。

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