精芪双参胶囊对心肌缺血再灌注损伤的影响

许艳茹，白 冰，于艳辉，徐 建，唐晓桐，石 菊，周俊佟

（吉林修正药业新药开发有限公司，长春 130012）

精芪双参胶囊由黄芪、丹参、人参、黄精4味中药组方，具有补气养阴，活血化瘀，养心安神之功，用于心脑血管疾病之心悸气短，头晕头痛，倦怠乏力，耳鸣眼花，肢体麻木，失眠健忘等症。其中人参皂苷Rb1、丹酚酸B、黄精多糖等化学成分都有明确的保护心血管作用[1-3]，本文利用相关的动物模型，对精芪双参胶囊进行了抗心肌缺血、耐缺氧及抗血栓等药效学实验研究，为精芪双参胶囊的开发利用提供依据。

1 材料

1.1 动物 ICR小鼠，雌雄各半，6～8周龄，体质量18～22 g；Wistar大鼠，雌雄各半，体质量240～260 g。均购自吉林大学基础医学院实验动物中心。

1.2 药物 精芪双参胶囊，棕色粉末，由吉林长白山药业集团提供，批号：20150829；金纳多片，德国威玛舒培博士药厂，批号：1550611。

1.3 仪器 SMP500-18272-LSIO酶标仪，LD5-2A型低速离心机，ALC-V8动物呼吸机，ALC-MPA动物心电图分析系统，YLS-14B小动物血栓生成仪。

2 方法

2.1 心肌缺血大鼠再灌注实验[4-6]

2.1.1 分组及方法 120只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、阳性药组（银杏叶提取片43.2 mg/kg）、精芪双参低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）组。每组20只。灌胃（10 mL/kg）给药，1次/d，连续7 d。末次药后30 min，用戊巴比妥钠麻醉大鼠后仰位固定于手术台上，仰位固定。于左侧第3 肋间打开胸腔，分离组织，剪开心包，将心脏挤出胸腔。在左心耳下方2 mm处穿线，结扎冠状动脉左前降支，结扎处用小橡皮管填充。结扎60 min后剪断结扎线取出填充的小橡皮管实施再灌注，假手术组除不做结扎外，其余操作与模型组相同。

2.4 统计学方法 数据用SPSS 19.0统计学软件处理，进行t检验，用均数±标准差表示，P＜0.05为有统计学意义。

3 结果

3.1 对心肌缺血大鼠再灌注的影响

3.1.1 对心肌缺血大鼠心电图变化的影响 见表1。

2.1.2 指标测定 再灌注180 min后从腹主动脉取血，3 000 r/min，离心15 min，取血清，用试剂盒检测天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），另一半取血加EDTA·Na2抗凝分离血浆，按试剂盒方法测定前列环素（PGI2）和血栓素（TXA2）水平；取血后取大鼠心脏称湿重，将心室心肌横切4～5片进行N-BT染色，计算心肌梗死面积（MIS）。取出心脏，用4%多聚甲醛液固定，制成石蜡切片，HE染色，光学显微镜下观察。

2.2 小鼠常压耐缺氧实验 将70只小鼠分为空白对照组、金纳多片组，精芪双参胶囊低、中、高（360、1 080、1 800 mg/kg）剂量组，灌胃1次/d，连续7 d，空白对照组给予等容积CMC，末次给药1 h后把小鼠分别置于经容量标定的250 mL广口瓶中，瓶内置一片滤纸和10 g钠石灰以吸收水份和二氧化碳，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间，即存活时间。

2.3 电刺激诱导大鼠体内血栓形成的实验[7]大鼠50只，随机分为空白对照组（给予同体积生理盐水），阳性药阿司匹林组（25 mg/kg），精芪双参低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）剂量组。灌胃给药（10 mL/kg），1次/d，连续7 d，末次给药后1 h，用戊巴比妥钠麻醉，分离右侧颈总动脉，用YLS-14B小动物血栓生成仪测定血栓形成时间（OT值）及血栓长度，以OT值和血栓长度作为判断药效的指标。

表1 对大鼠心脏指数和心电图ST段位移的影响（，n = 10）

表1 对大鼠心脏指数和心电图ST段位移的影响（，n = 10）

注：与模型对照组比较，# P＜0.05，## P＜0.01

组 别 剂量/（mg/kg） SI/% 结扎后ST/mV 再灌注ST/mV空白对照组 - 0.311±0.020 0.08±0.01 0.09±0.03模型对照组 - 0.325±0.021 0.75±0.26 0.18±0.16金纳多片组 43.2 0.309±0.030# 0.54±0.16# 0.19±0.16低剂量组 250 0.319±0.024 0.33±0.21## 0.21±0.19中剂量组 500 0.308±0.028# 0.47±0.28# 0.22±0.27高剂量组 1 000 0.310±0.023# 0.56±0.18# 0.31±0.32

3.1.2 对血浆PGI2、TXA2的影响 见表2。

3.1.3 对大鼠心肌梗死面积的影响 见表3。

3.2 对小鼠常压耐缺氧的影响 见表4。

3.3 对大鼠体内血栓的影响 见表5。

表2 对大鼠血浆PGI2、TXA2的影响（x± s，n = 10）

表3 对大鼠心肌梗死面积的影响（x± s ，n = 10）

表4 对小鼠存活时间的影响（x± s ，n = 10）

表5 对大鼠体内血栓的影响（x± s ，n = 10）

4 讨论

本研究证明模型组大鼠血浆TXA2水平明显升高，TXA2通过抑制腺苷酸环化酶，使血小板和血管平滑肌细胞内cAMP减少，从而促进血小板聚集和局部血管收缩，加重内皮损伤。因此TXA2与前列环素的平衡失调是心肌缺血或心肌坏死的主要原因[8-15]。本研究提示精芪双参胶囊通过降低MIRI大鼠的血浆TXA2水平，增加血浆PGI2 水平及PGI2/TXA2 比值，纠正PGI2 与TXA2 之间的平衡失调，改善内皮细胞功能进而改善血管舒缩功能，解除冠脉痉挛，减少血小板聚集，减少心肌酶的漏出，在一定程度上提高了心肌组织的耐缺血缺氧能力，对缺血心肌起到了保护作用。同时炎症反应可以引起心肌细胞坏死导致心肌细胞凋亡，细胞凋亡参与心肌缺血的过程，并在缺血再灌注诱导的病理过程中发挥重要作用。精芪双参胶囊可能通过抑制心肌细胞凋亡机制缩减I/R后心肌梗死体积，减轻心肌损伤，改善心功能[16-17]。

本实验结果显示，精芪双参胶囊能延长大鼠血栓形成时间并抑制血栓长度，药物可能是通过影响内源性和外源性凝血通路以及凝血系统凝血因子实现抗血栓作用。

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