王宇阳,任晓暄,郑 瑀,游江南,贾元萍,刘宇超
(北京中医药大学针灸推拿学院,北京 100029)
抑郁症是当今世界主要致残疾病,对社会及家庭造成了巨大的经济负担[1]。抗抑郁药起效慢,超半数患者用药效果不理想,尤其对于轻中度抑郁症患者,抗抑郁药的有效性尚待商榷[2]。非药物疗法受到越来越多的关注,针灸在抑郁症治疗中广受欢迎且临床疗效满意[3-5]。频率是电针刺激的重要参数,不同频率电针能促进中枢不同神经递质释放[6],可能是影响电针抗抑郁效果的重要原因之一。本实验旨在研究不同频率电针刺激对抑郁症模型大鼠行为学及下丘脑5-羟色胺(5-HT)的影响,探究电针治疗抑郁症的最佳频率。
1.1 材料
1.1.1 实验动物 健康雄性 Wistar 大鼠50只,体质量(220±20) g,清洁级,购自北京市兴隆实验动物养殖厂,生产许可证:SCXK-(军)2012-0004。
1.1.2 试剂与仪器 蔗糖(国药集团化学试剂有限公司,分析纯);韩氏(H·A·N·S)LH202型电针仪(北京华卫产业开发公司);5-HT酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(华英生物,批号:201612223);华佗牌针灸针(苏州医疗用品厂有限公司)。
1.2 分组 适应性饲养1周后用开野实验作行为学评分[7]。水平运动和垂直运动总得分低于30分或高于120分的动物予以剔除。50只大鼠按体质量随机分为对照组、模型组、2 Hz组、50 Hz组和100 Hz 组,各10只,空白组每笼饲养5只,其余组单笼饲养。
1.3 模型复制 采用慢性应激结合孤养的方式造模[8],模型组和针刺组动物全部孤养,接受7种不同的应激刺激21 d,每日随机安排以下一种刺激:断水24 h、断食24 h、夹尾3 min、昼夜颠倒、冷水游泳(4 ℃,5 min)、电击足底(30 Hz,5 s)、潮湿垫料,平均每种刺激3次。
1.4 电针方法 造模结束后1周内,电针组接受每日电针治疗1次,共7次。方法:将大鼠用鼠套固定,参照《实验针灸学》[9]选取百会穴和印堂穴。将大鼠用鼠套固定,以30号、1寸毫针针刺,为避免两针之间短路,在针柄上缠绕绝缘胶布并将两针之间用棉球隔开。针柄接韩式电针治疗仪,以针柄微微抖动为宜,电流强度0.1~0.3 mA,连续波形,2 Hz组、50 Hz组和100 Hz组的电针频率分别为2 Hz、50 Hz、100 Hz,留针20 min。模型组用鼠套固定但不针刺。
1.5 行为学检测 于造模前1 d,造模21 d和电针治疗第7天记录各组大鼠体质量,参照文献[10]进行开野实验和糖水消耗量实验。
1.6 下丘脑5-HT检测 第28天治疗后将各组大鼠断首取脑,在冰袋上分离下丘脑,冰冷生理盐水中洗去血液称重,用0.9%预冷的生理盐水做匀浆介质制得10%的组织匀浆(W∶V),于低温冷冻10 000 r/min,离心15 min,取上清液,- 20 ℃保存,严格按照5-HT ELISA试剂盒的说明操作,单位用每毫克湿重组织中含量表示(ng/mg)。
1.7 统计学方法 应用统计学软件SPSS 17.0对原始数据进行统计分析,计量资料以均值±标准差()表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较用LSD法,P<0.05为差别有统计学意义。
2.1 一般状况观察 造模开始前各组大鼠反应灵敏,毛色光泽,食欲正常,大便成形。28 d时模型组大鼠精神萎靡,反应迟钝,毛色晦暗,饮食减少,大便稀溏;造模期间因操作不当,模型组,2 Hz组和100 Hz组各有1只大鼠死亡。
2.2 不同电针频率对CUS大鼠体质量的影响 见表1。
表1 不同电针频率对CUS大鼠体质量的影响 g
表1 不同电针频率对CUS大鼠体质量的影响 g
组 别 n 0 d 21 d 28 d空白组 10 228.90±60.27 328.20±74.56 363.70±83.28模型组 9 227.56±69.89 297.67±68.43##320.56±86.31 2 Hz组 9 228.00±79.69 299.78±63.43##335.78±79.86 50 Hz组 10 224.20±67.97 298.00±64.61##332.70±81.19 100 Hz组 9 226.56±72.21 299.56±71.11##330.67±79.09
2.3 不同电针频率对CUS大鼠开野实验评分的影响 见表2。
表2 不同电针频率对CUS大鼠开野实验评分的影响(x± s ) 分
2.4 不同电针频率对CUS大鼠糖水消耗量的影响 见表3。
表3 不同电针频率对CUS大鼠糖水消耗量的影响(x± s ) %
2.5 不同电针频率对CUS大鼠下丘脑5-HT的影响 见表4。
表4 不同电针频率对CUS大鼠下丘脑5-HT的影响 ng/mg
表4 不同电针频率对CUS大鼠下丘脑5-HT的影响 ng/mg
注:与空白组比较,## P<0.01;与模型组比较,△ P<0.05,△△ P<0.01;与2 Hz组比较,▲ P<0.05,▲▲ P<0.01
组 别 n 下丘脑5-HT含量空白组 10 12.69±2.00模型组 9 9.56±1.17##2 Hz组 9 14.04±2.03△△50 Hz组 10 11.80±2.16△▲100 Hz组 9 10.61±2.33△▲▲
抑郁症当属中医“癫病”“郁证”范畴,其病变主要在脑,主因情志所伤,痰气郁结,以致蒙蔽心神,神志逆乱而成。百会穴位于巅顶,具醒神开窍、解郁安神之功。印堂穴位于督脉,督脉与足厥阴肝经会于巅顶之上,内与心、肝、脾、肾等脏腑均有联系,有安神定惊、醒脑通窍之功。二穴在针刺治疗抑郁症临床使用频率高,具有良好的改善抑郁状态作用[11]。
CUS是动物模型中公认的抑郁症造模方法[12],本实验采用CUS结合孤养复制抑郁大鼠模型,造模21 d后观察到模型组大鼠体质量、水平和垂直运动评分、糖水消耗量显著下降,证明模型复制成功。
本研究结果表明,电针治疗后,大鼠一般状态较模型组好转,各频率电针组水平运动和垂直运动评分、糖水消耗量均较模型组增多,下丘脑5-HT含量升高[13-15],证明电针能够缓解大鼠抑郁状态。其中与50 Hz组和100 Hz组比较,2 Hz组水平运动和垂直运动评分、糖水消耗量及下丘脑5-HT含量均明显提升,抗抑郁效果更佳。电针治疗后,虽然各频率电针组体质量增幅均大于模型组,以2 Hz组最为明显,但各频率电针组在体质量方面与模型组比较无明显差异。该结果可能受个体差异影响较大,体质量不是评估抑郁状态的稳定指标。针刺过程中,100 Hz组大鼠表现出明显的躁动不安,而2 Hz组普遍较为安静,从另一方面验证了2 Hz抗抑郁效应更佳,在大鼠强迫游泳的试验中也证明了2 Hz能明显缩短游泳不动时间,抗抑郁效应优于100 Hz[16]。
不同电针频率可能影响不同脑区及不同神经递质的产生,其作用机制有待进一步研究[17]。本实验发现50 Hz在体质量、糖水消耗、水平运动及垂直运动评分、下丘脑5-HT等方面改善均优于100 Hz,但差别无统计学意义,电针频率与抗抑郁疗效之间是否存在相关关系有待深入探索。因此,电针能够改善大鼠抑郁状态,2 Hz电针抗抑郁疗效优于50 Hz和100 Hz。
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