气相色谱内标法测定白酒中甲醇含量的确认及应用

狄红梅，李艳敏，张立严

（北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒厂，北京 101301）

甲醇是白酒在发酵过程中产生的，为原料和辅料中果胶质内甲基酯分解而成。白酒中的甲醇一方面可以结合有机酸生成酯类，形成不同的酒香，另一方面甲醇自身具有较高的毒性，它在人体内积蓄，即使少量的甲醇也可以引起慢性中毒、头痛恶心、视力模糊，5～10 mL即可造成失明，对神经系统尤其是视神经损害严重。我国是酒类消费大国，特别是白酒消费量居世界之首，因此严格控制白酒中甲醇的含量，保护人民群众的生命安全是一项十分重要的工作。所以，甲醇含量是酒类产品卫生监督检测的主要指标之一。因此国家对甲醇的含量做出了严格的规定，为了保证食品安全，必须建立精确有效的甲醇含量测定方法。GB 5009.266—2016《食品安全国家标准食品中甲醇的测定》，甲醇的检测方法为气相色谱毛细管柱内标法[1-4]，本实验采用的是气相色谱内标法测定甲醇的含量,测得甲醇的结果准确，稳定性好，同时能够快速分离白酒中的其他不同风味成分，最终获得一种简单、快捷，同时具有较高的灵敏度和较好分离效果的新的检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器和试剂

样品：酒厂生产的成品酒酒样1#。

试剂：甲醇（99.5%），叔戊醇（99.5%），无水乙醇（99.9%），超纯水。

仪器设备：Agilent7890B气相色谱仪（配备7693液体自动进样器）；FID检测器；色谱柱，CPWax 57 CB 20～200℃（225℃），50 m×250 μm×0.2 μm；万分之一电子天平。

1.2 实验方法

1.2.1 仪器参数条件

程序升温条件：初温40℃，保持1 min，以4.0℃/min升到130℃，以20℃/min升到200℃，保持5 min。

优化后升温条件：初温35℃，保持3 min，以1.0℃/min升到50℃，以20℃/min升到200℃，保持5 min。

检测器温度：250℃。进样口温度：250℃。

载气流量：1.0 mL/min。进样量：1.0 μL。分流比：20∶1。

1.2.2 实验试剂配制

乙醇溶液（40%vol）：量取400 mL乙醇，用超纯水定容至1000 mL，混匀。

甲醇储备液配制：准确称取甲醇（99.50%）0.4992 g，用40%vol乙醇溶液定容至100 mL容量瓶中，摇匀备用。

叔戊醇（内标）溶液的配制：准确称取叔戊醇（99.50%）1.9993 g，用40%vol乙醇定容至100 mL容量瓶中，摇匀备用。

1.2.3 标准曲线的制作

1.2.3.1 国标中甲醇的标准曲线配制步骤

分别吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、5.0 mL甲醇储备液于5个25 mL容量瓶中，用40%vol乙醇定容至刻度，摇匀备用，各级别浓度见表1。

表1 甲醇的各级别浓度 (mg/L)

然后从5个不同浓度的容量瓶中各吸出10 mL样液，再加入0.1 mL叔戊醇内标溶液，各样品加入的内标浓度为198.93 mg/L，摇匀后进样分析。

1.2.3.2 优化程序升温条件测定甲醇含量的标准曲线

配制包括甲醇在内的12种风味物质混标，从现有的混标储备液中吸出10 mL，1∶2梯度稀释，共计8个浓度级别，最后加入浓度为198.93 mg/L的叔戊醇内标0.1 mL进样分析并绘制标准曲线，各级别浓度见表2。

表2 混标中甲醇的各级别浓度 (mg/L)

本标准曲线是以甲醇的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制的，得到甲醇的相关系数r为0.99997，单位是mg/L，见图1。

2 结果与分析

甲醇回收率样品的制备。

酒样浓度：酒厂成品酒样1#连续进样6次，测定甲醇的含量为酒样浓度。

加标酒样浓度：从甲醇储备液中吸取0.5 mL用本厂成品酒样1#定容至50 mL，摇匀，吸出5 mL加30 μL内标连续进样6次。

表3 国标方法测得甲醇含量的精密度与回收率

表4 优化程序升温条件甲醇的精密度与回收率

图1 12种混标中甲醇的标准曲线图

精密度：根据GB 5009.266—2016《食品安全国家标准食品中甲醇的测定》中的要求，在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过其算数平均值的10%。

2.1 国标方法测得的甲醇含量精密度与回收率

根据国标中的程序升温条件测得的甲醇含量以及加标回收的情况见表3。

2.2 优化程序升温条件甲醇的精密度与回收率

根据实际生产情况和检测要求，优化程序升温条件测得的甲醇含量见表4。

3 结果与讨论

对于白酒中甲醇含量检测方法的研究对比，按照GB 5009.266—2016《食品安全国家标准食品中甲醇的测定》中所要求的仪器设备条件、标准溶液的配制等进行的实验，测得的成品酒样1#的甲醇含量的平均值为50.8 mg/L，含量的精密度为5.57%，回收率为99.28%，回收率的精密度为0.74%。但根据实际生产需求，运用国标中的程序升温条件不能将白酒中其他香味成分很好地分离，所以需要改变柱箱的升温程序，来确保每个组分都能完全分离。配制包括甲醇在内的风味物质混标，程序升温条件为初温35℃，保持3 min，以1.0℃/min升到50℃，以20℃/min升到200℃，保持5 min的条件下进样分析，制作标准曲线。用该方法测成品酒样1#的甲醇含量为51.9 mg/L，含量的精密度为2.72%，回收率为100.08%，回收率的精密度为2.42%。从以上实验结果可以看出，两种方法测得的成品酒样1#的甲醇含量分别为50.8 mg/L和51.9 mg/L，精密度为2.12%，符合精密度要求。

根据实际生产情况和检测需要，改变程序升温条件运用气相色谱内标法测定甲醇的含量与国标中测定甲醇含量的方法所检测出的甲醇含量的精密度为2.12%，能够满足国标中的精密度要求，所以运用优化升温条件的方法测定白酒中甲醇含量的方法重现性好，回收率好，精密度高，操作简单，灵敏度高，能够提高工作效率，对我厂甲醇的检测和白酒产品质量的控制提供技术指导，对维护白酒安全具有一定的促进作用。

[1]国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准食品中甲醇的测定：GB 5009.266—2016[S].北京：中国标准出版社,2017.

[2]李燕,张燕,张书文.气相色谱法同时测定白酒中的特征香气成分[J].化学分析计量,2008,17(6)：59-61.

[3]仲靖雨,陈智生.毛细管柱色谱法同时测定白酒中的醇、酯[J].化学分析计量,2008,17(3)：42-44.

[4]李永生,齐娇娜,高秀峰.酒中甲醇测定方法的研究进展[J].酿酒科技,2006(1)：84-89.