羊水细胞培养污染危害及避免污染的策略

马 涔

（苏州大学附属第一医院，江苏 苏州 215006）

产检前的染色体疾病筛查的方法是羊水细胞培养和染色体制备，对于妊娠安全的保证非常关键。羊水检查属于创伤取样，标本制备带有难度，孕妇难以接受二次羊水穿刺，因此羊水细胞的一次性成功培养非常重要[1]。羊水细胞培养具有操作难度大、技术要求高、培养时间长、易被污染等特点，综合性要求高，无菌环境下的培养至关紧要。本文分析了羊水细胞培养污染损害的原因和应对方法，提出避免污染的措施，为临床检验提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

抽取我院在2016年3月～2018年3月进行产前检查的高危孕妇180例进行检验分析，产妇中经产妇50例，初产妇130例，产妇年龄在26～32岁之间，平均（30.5±0.2）岁；孕周在17～25周之间，平均（20.4±0.6）周。产妇的产前诊断指证如下：高风险妊娠、不良生育史、高龄妊娠、B超异常、夫妻中任何一方为染色体平衡易位携带者等。

1.2 检验方法

1.2.1 实验室材料

羊水培养基、15mL一次性无菌离心管、25 mL方形培养瓶、CO2培养箱等。

1.2.2 羊水采集

孕妇取仰卧位，在B超引导下进行定位，用无菌注射器抽取20ml羊水，分别注入一次性无菌离心管中，10 ml/根。

1.2.3 接种培养

将需要送检的羊水细胞进行离心操作，转速为1500r/min，离心后放置在超净台上进行无菌处理，去掉上清液，每个离心管中留取1ml的沉淀细胞[2]。在培养瓶中分装4ml羊水培养基，将沉淀细胞接种在培养瓶中，放置在CO2培养箱中培养，温度设置为37℃。培养7d后取出并在显微镜下观察，传代培养后及时更换新鲜培养液4 mL，继续培养至收获。

1.3 污染后处理方法

羊水污染通常分为细菌污染和霉菌污染。细菌污染易被发现，污染速度较快，表现为培养基活捉，PH值变化，明显影响到正常细胞的生长。发现细菌污染后，取少量培养液进行涂片染色检查，证实菌种后加入适量的抗生素。常见的细菌污染为革兰阳性菌，可进行取样细菌培养和药敏试验。羊水接种后出现污染可应用大剂量广谱抗生素进行抗菌，若12h培养基浑浊未加重可再加入一次。若连续加入3次后抗菌效果不明显则要立即更换抗生素，发现有细胞贴壁时更换新鲜培养基，同样加入抗生素。

2 结 果

本组羊水细胞培养180例中，共成功收获179例，仅有1例由于细菌污染挽救失败，培养成功率为99.44%；本次培养收获时间为（9.2±0.6）d。本次检验中被污染的羊水细胞有10例20瓶，均为同批样本，细菌污染，污染细菌为革兰阳性菌，成堆出现。发现羊水细胞污染后立即更换培养液，并加入青链霉素进行大剂量冲击处理，污染被显著控制。仅有1例羊水细胞经过多次换液后仍生长不良，未达到培养要求。取得孕妇理解后再次抽样检验，培养成功。

3 讨 论

羊水细胞培养从采集到收获需要较长的培养过程，涉及到较多的环节，任何一个环节均可能造成羊水细胞或培养液被污染。羊水细胞的采集带有创伤性，培养的细胞一旦被污染后果严重，轻则导致培养的细胞被废弃，严重可污染培养箱内的其他标本甚至实验室环境，严重影响产前检查和分析工作。发现羊水细胞污染后，首先要进行抗生素冲击挽救，避免再次采集检验。需要注意的是，抗生素虽然能够抗菌，同时也会影响羊水细胞的生长，加之细菌的耐药性等，因此要慎重选择抗生素和冲击剂量。

为了提升羊水细胞培养成功率，降低污染风险，本次研究中提出以下防范策略，可有效应对污染。首先，要营造无菌实验室环境，从源头杜绝污染。导致细菌污染的原因有：实验室不干净、操作不规范、超净台有菌、培养基不合格或其他器具不合格等。检验人员要不断总结操作失误的原因，建立规范、完善的检验制度，确保检验的标准、有序进行，降低污染风险。其次是高标准的环境维护。羊水细胞培养需要较多的无菌培养设备，如超净台、倒置显微镜、培养箱和离心机等，实验技术人员需要进行高标准的检验环境维护，并从正规途径购买实验室产品。其三是遵循无菌检验操作程序，包含试验前后的消毒和试验中的无菌处理等，检验人员的无菌操作直接影响检验结果，也是导致污染的一个重要因素。实验室检验师要提升自身检验责任感和操作技术，严格遵守操作流程，确保检验过程中的无菌操作。最后，采用双线独立平衡培养体系来降低污染风险[3]，详细记录培养过程。

综上，羊水细胞培养污染危害较为严重，可采用抗生素冲击等方式进行挽救，建立规范的检验制度，规范无菌检验流程，双线培养等方式避免细菌污染，提高羊水细胞培养成功率。