民族药牛尾巴菜的化学成分研究

贵阳中医学院药学院，贵州 贵阳 550025

鼠刺属(Itea)植物隶属虎耳草科(Saxifragaceae)鼠刺亚科(Iteoideae)，在我国分布较多，有17种及1变种[1]。同时，鼠刺属植物相对病害少，适应性强，易于扦插繁殖，部分物种诸如矩叶鼠刺I.oblonga、滇鼠刺I.yunnanensis等已实现了大范围种植，资源丰富[2]。此外，多种鼠刺属植物作为民族药在民间广泛使用，诸如矩叶鼠刺I.oblonga和滇鼠刺I.yunnanensis的根、叶、花可滋补强壮、止咳、消肿；腺鼠刺I.glutinosa的根、花可续筋接骨、润肺止咳[3]。因此，鼠刺属药用植物极具开发价值。然而，到目前为止，仅对部分鼠刺属植物的化学成分进行了初步研究，从中分离鉴定单体成分才20余个[4-8]。针对该属药用植物的化学成分研究亟待开展。

牛尾巴菜，学名为冬青叶鼠刺(I.ilicifoliaOliv.)，具有清热止咳、滋补肝肾之功效，可治疗劳虚咳嗽、咽喉干痛和目赤等疾病[3]。目前，仅对其化学成分展开过初步研究，从中发现一类具有显著抗氧化活性的2-芳基苯并[b]呋喃类成分[7]。为进一步阐明牛尾巴菜的化学成分组成，本项目再次对牛尾巴菜枝叶的化学成分进行了研究，从中分离并鉴定6个化合物：二十八烷醇(1)、三十一烷(2)、5,4′-二羟基-7,8-二甲氧基黄酮(3)、邻苯二甲酸二正丁酯(4)、D-阿洛醇(5)和β-谷甾醇(6)。除化合物3以外，其它均为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

INOVA 400 MHz核磁共振波谱仪(美国Varian公司，TMS为内标)；Bruker Compact质谱仪(德国Bruker公司)；安捷伦5973质谱仪(美国安捷伦公司)；Sephadex LH-20凝胶(GE Healthcare Bio-Sciences AB公司)；柱层析硅胶和GF254薄层层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)；RE-5210A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHZ-DIII循环水式多用真空泵(巩义市科华仪器设备有限公司)；10%硫酸乙醇显色剂；所有溶剂均为工业级，使用前均经过蒸馏处理。

试验用药材于2017年11月采自贵州龙里县，经昆明猎植中草药销售有限公司贺文清先生鉴定为虎耳草科鼠刺属冬青叶鼠刺(Iteailicifolia)的枝叶。样品标本(201711)存于贵阳中医学院苗医药重点实验室。

2 提取与分离

取干燥的牛尾巴菜枝叶粗粉10.0 kg，常温下以80 L 95% EtOH浸提3次，每次7 d。完毕，过滤，合并滤液，减压条件下回收乙醇后得总浸膏450 g。将总浸膏分散于2 L水中，依次以乙酸乙酯(2 L×3)、正丁醇(2 L×3)进行萃取，减压条件下分别回收溶剂后得乙酸乙酯部位(E，85 g)和正丁醇部位(B，140 g)。

乙酸乙酯部位经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱(1∶0→0∶1)后得8个亚组分E1-E8。组分E1的石油醚/乙酸乙酯(5∶1)溶液放置后析出白色针状结晶，即化合物6(43 mg)。组分E3(11.6 g)经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯(15∶1；5∶1；3∶1)梯度洗脱得到9个亚组分E3A-E3I。其中，组分E3B的石油醚/乙酸乙酯(15∶1)溶液放置后析出白色颗粒状固体，即化合物1(21 mg)；组分E3C经二氯甲烷/甲醇(1∶1)溶解后重结晶得白色片状物，即化合物2(47 mg)。组分E5(6.8 g)经硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯(3∶1)等度洗脱得8个亚组分E5A-E5H组分。组分E5F(2.4 g)反复经硅胶柱层析后得淡黄色粉末，即化合物3(8 mg)。组分E6(2.8 g)经凝胶柱层析，以二氯甲烷/甲醇(1∶1)洗脱得到6个亚组分E6A-E6F。组分E6C先后经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇 90∶1)和制备薄层层析(石油醚/乙酸乙酯 2∶1)得到化合物4(5 mg)。E7的乙醇溶液放置后析出白色晶体，即化合物5(35 mg)。

3 结构鉴定

3.1 化合物1 白色颗粒状固体；EI-MS∶m/z392 [M-H2O]+, 364, 181, 167, 153, 139, 125, 111, 97 (100), 83, 69, 57；1H NMR (400 MHz, CDCl3)∶δ3.64 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-1), 1.56 (2H, m, H-2), 1.25 (50H, m, 25×CH2), 0.88 (3H, t, J = 6.7 Hz, H-28)；13C-NMR(100MHz, CDCl3)∶δ63.3(C-1), 33.0 (C-2), 32.1、29.9、29.8、29.6、29.5 (C-4～C-26), 25,9 (C-3), 22.9(C-27), 14.3(C-28)。以上数据与文献报道[9]的数据基本一致，故鉴定为二十八烷醇。

3.2 化合物2 白色片状物；EI-MS∶m/z436[M]+, 408, 393, 379, 以下依次递减14个质量单位, 57 (100), 43；1H NMR (400MHz, CDCl3)∶δ1.25 (58H, m, 29×CH2), 0.88 (6H, t,J= 6.7 Hz, H-1/31)。以上数据与文献报道[10]的数据基本一致，故鉴定该化合物为三十一烷。

3.3 化合物3 淡黄色粉末；ESI-MS∶m/z313.2 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, Pyridine-d5)∶δ8.07 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′/6′), 7.29 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′/5′), 6.93 (1H, s, H-3), 6.67 (1H, s, H-6), 3.97 (3H, s, 7-OCH3), 3.82 (3H, s, 8-OCH3)；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)∶δ12.79 (1H, s, 5-OH), 7.93 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′/6′), 6.95 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3′/5′), 6.83 (1H, s, H-3), 6.57 (1H, s, H-6), 3.91 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (3H, s, 8-OCH3)；13C NMR (100 MHz, Pyridine-d5)∶δ183.3 (C-4), 165.1 (C-2), 163.4 (C-4′), 159.3 (C-7), 158.3 (C-5), 149.8 (C-9), 129.7 (C-8), 129.3 (C-2′/6′), 122.4 (C-1′), 117.3 (C-3′/5′), 105.4 (C-10), 103.8 (C-3), 96.6 (C-6), 61.7 (8-OCH3), 56.6 (7-OCH3)。以上数据与文献报道[11]的数据基本一致，故鉴定为5,4′-二羟基-7,8-二甲氧基黄酮。

3.4 化合物4 淡黄色油状物；ESI-MS∶m/z301.2[M+Na]+；1H NMR (400MHz, MeOH-d4)∶δ7.72 (2H, dd,J= 5.6, 3.4 Hz, H-3/6), 7.62 (2H, dd,J= 5.8, 3.3 Hz, H-4/5), 4.29 (4H, t,J= 6.6 Hz, H-8/8′), 1.72 (4H, m, H-9/9′), 1.46 (4H, h,J= 7.4 Hz, H-10/10′), 0.98 (6H, t,J= 7.4 Hz, H-11/11′)；13C NMR (100 MHz, MeOH-d4)∶δ169.3 (C-7/7′), 133.6 (C-1/2), 132.4 (C-4/5), 129.9 (C-3/6), 66.7 (C-8/8′), 31.7 (C-9/9′), 20.3 (C-10/10′), 14.1 (C-11/11′)。以上数据与文献报道[12]的数据基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二正丁酯。

3.5 化合物5 白色晶体(乙醇)；ESI-MS∶m/z183.2 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, D2O)∶δ3.84 (2H, m, H-2/5), 3.75 (2H, dd,J= 9.8, 3.6 Hz, H-1a/6a), 3.73 (2H, d,J= 3.2 Hz, H-3/4), 3.59 (2H, dd,J= 12.0, 7.2 Hz, H-1a/6a)；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)∶δ4.67 (2H, d,J= 4.8 Hz, C3/4-OH)，4.62 (2H, d,J= 4.8 Hz, C2/5-OH)，4.38 (2H, d,J= 5.6 Hz, C1/6-OH)，3.56 (6H, m, H-1a/6a/2～5)，3.38 (2H, dd, J = 11.1, 5.6 Hz, H-1b/6b)；13C NMR (100MHz, D2O)∶δ73.3 (C-3/4)，73.2(C-2/5)，63.3(C-1/6)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)∶δ73.1 (C-3/4)，72.6 (C-2/5)，62.9 (C-1/6)。以上数据与文献报道[13]的数据基本一致，故鉴定为D-阿洛醇。

3.6 化合物6 无色针状结晶(石油醚/乙酸乙酯 5∶1)；10%硫酸乙醇显紫红色。3种展开剂条件下(石油醚/乙酸乙酯 5∶1；石油醚/二氯甲烷 4∶1；二氯甲烷/甲醇 20∶1)，该化合物与对照品β-谷甾醇的Rf值均保持一致，故确定该化合物为β-谷甾醇。

4 讨论

对牛尾巴菜枝叶的化学成分进行了研究，共分离鉴定单体化合物6个。其中，二十八烷醇(1)具有提高机体耐久力、降低血脂和胆固醇、护肝等功效[14]；D-阿洛醇(4)是转化制备阿洛酮糖的原料[15]，后者具有降血糖、降脂减肥、抗氧化等功效[16]。这为阐明牛尾巴菜的活性成分，并提升其应用价值方面奠定了良好的基础。当然，从中还发现了具有生殖毒性的邻苯二甲酸二正丁酯(4)[17]。因药材浸泡提取过程中采用塑料桶当容器，故该成分是否来源于牛尾巴菜，有待进一步商榷。