LSD1在结肠癌中的表达及其对结肠癌LoVo细胞迁移侵袭的影响

陈 江，陈 荣，黄家亚，李雪松，王子卫

（七星关区人民医院普通外科，贵州 毕节 551700）

研究资料显示，LSD1具有以下作用：（1）抑制结肠癌的转移；（2）抑制结肠癌的侵袭。现阶段来看，赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1会对结肠癌产生相关影响[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年3月～2017年3月我院收治的结肠癌石蜡组织标本61例（35例癌旁组织），所有标本均经病理学确诊为结肠癌者。61例结肠癌石蜡组织标本中有38例男性患者标本、23例女性患者标本；患者年龄在53.3～81.2岁，平均年龄为（67.25±10.15）岁，平均肿瘤直径为（5.25±2.26）cm；疾病类型：30例左半结肠及直肠、31例右半结肠；按照Duke分期中有10例A期、20例B期、15例C期、16例D期。

1.2 方法

1.2.1 细胞与主要试剂

结肠癌LoVo细胞主要来源于中国科学院细胞库，LSD1兔抗人多克隆抗体来源于AXHNN公司，全蛋白提取试剂盒购自南京凯基公司，LSD1-shR-NA质粒由上海制药技术有限公司提供。

1.2.2 免疫组化

切片后，脱蜡水化组织切片，修复抗原后 ，滴入LSD1兔抗体（抗体稀释度为1:200），室温下孵育25min。LSD1细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性（随机选择3个高倍视野，计数300～900个细胞，）染色强度中0分为无染色、1分为浅黄色、2分为棕黄色、3分为棕褐色。阳性细胞计数中1个视野内着色细胞1分为10%以下、2分为10～50%、3分为50～75%、4分为75%以上、0分为阴性。免疫组化结果半定量评分法=染色强度评分×阳性细胞率评分。阴性（-）为0～2分，弱阳性（+）为3分，阳性（++）为4分，（+++）强阳性大于5分。将处于生长期的LoVo细胞接种6孔板，进行瞬时转染，培养3h～5h后更换双抗完全培养基，2d后荧光倒置显微镜观察表达情况。Tanswell迁移（未加入基质胶）和侵袭（未加入基质胶）实验，分为对照组和转染则，培养1d后，拍照细胞计数，每组各选8个视野。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行统计学分析，数值用中位数（M）和间距（Q）表示，计量资料用（±s）表示，结肠癌组织的赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1表达和临床病理采用x2检验，P＜0.05时为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 LSD1在结肠癌组织的阳性表达率

LSD1在结肠癌组织的阳性表达率为68.85%（42/61），35例癌旁组织阳性表达率为40.00%（14/35），数据比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 下调LSD1表达对转染癌LoVo细胞迁移和侵袭影响

LSD1转染组细胞迁移数、侵袭数与对照组细胞迁移数、侵袭数比较有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 下调LSD1表达对转染癌LoVo细胞迁移和侵袭影响（±s）

表1 下调LSD1表达对转染癌LoVo细胞迁移和侵袭影响（±s）

项目 n 细胞迁移数 细胞侵袭数转染组 12 40.587±2.002 33.662±1.841对照组 12 222.14±6.63 222.80±6.30 t 10.26555 18.88888 P＜0.05 ＜0.05

3 讨 论

LSD1属于胺氧化酶家族中的一员，研究资料显示，不同肿瘤细胞的LSD1表达差异所发挥的作用也不相同[2]。本文研究结果显示LSD1转染组细胞迁移数、侵袭数与对照组细胞迁移数、侵袭数比较有统计学意义（P＜0.05），LSD1在结肠癌组织的阳性表达率为68.85%（42/61），35例癌旁组织阳性表达率为40.00%（14/35）。下调赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1表达会在一定程度上抑制LoVo细胞侵袭和迁移能力，赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1在结肠癌组织中呈现高表达，在癌旁组织中呈现低表达[3]。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1在结肠癌转移中通过转染结肠癌LoVo细胞数量，而使其细胞呈现减少趋势.

[1]张元元,付 晓,汪晓莺,等.结肠癌组织LSD1表达对结肠癌LoVo细胞转移潜能影响研究[J].中华肿瘤防治杂志,2014,21(18):1435-1439.

[2]丁 杰,廖国庆,张忠民,等.LSD1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白在结肠癌中的表达及其意义[J].中国普通外科杂志,2014,23(4):462-467.

[3]吴 哲,黄永亮,徐 凯,等.肝再生磷酸酶-3激活核因子-κB信号通路调控结肠癌LoVo细胞血管内皮生长因子的表达[J].中华实验外科杂志,2016,33(8):1993-1995.