慢性鼻—鼻窦炎鼻息肉患者内镜手术前后VEGF、Eotaxin、黏蛋白MUC5AC表达的临床意义

张莹 王建波 陈建东

[摘要] 目的 探究慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者内镜手术前后嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）、黏蛋白MUC5AC、血管内皮生长因子（VEGF）的表达变化及临床意义。 方法 选取2013年2月～2016年12月上海市奉贤区中心医院62例慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉内镜手术患者为观察组，并选取同期因鼻中隔偏曲住院行鼻中隔矫正术患者62例为对照组。观察两组HE染色情况，观察比较两组手术前后嗜酸性粒细胞浸润、Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF表达情况。 结果 观察组术后嗜酸性粒细胞明显少于术前，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。与对照组比较，观察组手术前后嗜酸性粒细胞计数均较高，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。观察组术后Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF表达面积百分率明顯低于术前，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。与对照组比较，观察组手术前后Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF表达面积百分率均较高，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。 结论 慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者鼻黏膜组织Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF均表现为过度表达，可能与病情变化有关。

[关键词] 慢性鼻-鼻窦炎；鼻息肉内镜手术；嗜酸性粒细胞趋化因子；血管内皮生长因子

[中图分类号] R765 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）09（c）-0090-04

[Abstract] Objective To investigate the level change and clinical significance of the expressions of eosinophils chemokines （Eotaxin）， mucin MUC5AC and vascular endothelial growth factor （VEGF） in patients with chronic rhinosinusitis and nasal polyps before and after endoscopic surgery. Methods From February 2013 to December 2016 in Shanghai Fengxian District Central Hospital， the 62 cases with chronic sinusitis and nasal polyps treated with endoscopic surgery were selected as the observation group， and 62 cases of hospitalized patients with deviation of nasal septum treated with septum rectifying operntion were selected as the control group. The HE staining result， the infiltration of eosinophils， the expressions of Eotaxin， mucin MUC5AC and VEGF were observed and compared between the two groups before and after operation. Results The eosinophil count in the observation group was significantly less than that before operation， and the difference was statistically significant （P < 0.01）. Compared with the control group， the eosinophil count was higher in the observation group before and after operation， and the difference was statistically significant （P < 0.01）. The expression percentage of Eotaxin， mucin MUC5AC and VEGF was significantly lower in the observation group than those before operation， and the differences were statistically significant （P < 0.01）. Compared with the control group， the percentages of Eotaxin， mucin， MUC5AC and VEGF expression were higher in the observation group before and after the operation， and the differences were statistically significant （P < 0.01）. Conclusion The Eotaxin， mucin， MUC5AC and VEGF in the chronic rhinosinusitis and nasal polyps patient are over expressed， and they are closely related to the changes of disease condition.

[Key words] Chronic rhinosinusitis； Endoscopic surgery of nasal polyps； Eotaxin； VEGF

慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉为鼻科临床常见病之一，成人患病率高达1.5%，复发率约为40%[1]。近年来，采用功能性内窥镜手术治疗鼻息肉患者不断增加，虽然一次性治愈率得到了明显提高，但术后部分患者仍存在复发现象[2-3]。鼻内镜术后鼻腔转归过程漫长，且转归过程中易产生黏膜水肿、肉芽、纤维结缔组织、囊泡，影响术腔上皮化进程[4-6]。因此，鼻内镜术后上皮化优劣对手术疗效具有重要意义。术后黏膜上皮创伤修复包括基质沉积、炎性反应、血凝块形成及组织重塑等，是一个高度协调过程，多种细胞、生长因子参与其中[7]。血管内皮生长因子（VEGF）为最强血管通透因子，在组织修复及血管再生过程中具有重要作用。嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）属于CC家族，与嗜酸性粒细胞趋化有关，主要作用为负责嗜酸性粒细胞渗入至过敏炎性部位。黏蛋白MUC5AC是一種呼吸道黏蛋白，在慢性鼻-鼻窦炎患者黏膜和鼻息肉中处于高表达状态。本研究选取62例慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者，探究慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者内镜手术前后VEGF、Eotaxin、黏蛋白MUC5AC表达的临床意义。报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年2月～2016年12月于上海市奉贤区中心医院（以下简称“我院”）行慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉内镜手术患者62例为观察组，其中女30例，男32例；年龄26～67岁，平均（43.42±11.65）岁。纳入标准：均为初次手术；所有患者均符合慢性鼻-鼻窦炎的诊断标准[8]，且术后均经病理证实；入院时均接受血常规检查，明确嗜酸性粒细胞计数；均知情同意。排除标准：合并糖尿病、高血压等慢性疾病者；合并哮喘、变应性鼻炎等变态反应性疾病者；近期有呼吸道感染性疾病者；近4周接受过激素、抗生素治疗者；阿司匹林耐受不良者。本研究经我院医学伦理委员会审核同意。

另选取同期鼻中隔偏曲住院患者62例为对照组，其中女25例，男37例；年龄25～68岁，平均（44.15±11.26）岁。纳入标准：均为初次手术；满足崔永华等[9]主编的《耳鼻咽喉·头颈外科疾病诊疗指南》中鼻内镜检查标准和鼻部CT检查相关标准。排除标准：合并变应性鼻炎、自身免疫性疾病、哮喘者；合并急性呼吸道感染者；术前4周内接受相关激素、抗生素治疗者。两组临床资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 鼠抗人Eotaxin单克隆抗体、鼠抗人黏蛋白MUC5AC单克隆抗体、兔抗人VEGF单克隆抗体，均购自美国sigma公司，即用型SABC免疫组织化学试剂盒，由美国Santa cuze公司提供。

1.2.2 标本采集与保存 观察组：术中施行鼻息肉切除术，采集鼻息肉标本，以0.9%氯化钠溶液清洗后，应用干纱布吸干水分，固定于多聚甲醛中，24 h后转入磷酸缓冲盐溶液中作为术前组；术后门诊随访期间，鼻腔以生理盐水冲洗，清理囊泡、肉芽组织、粘连，于术后第6周复查时冲洗鼻腔后，鼻内镜下钳夹息肉样黏膜组织和/或囊泡、肉芽组织作为术后组。对照组：鼻中隔矫正术中行下鼻甲黏膜部分切除术，采集下鼻甲黏膜标本。

1.2.3 HE染色 三组标本均以石蜡包埋，蜡块修整后应用切片机切为连续切片（5 μm厚）备用；脱水、脱蜡后，常规HE染色切片，仔细观察嗜酸性粒细胞，其细胞浆伴有粉红色颗粒、细胞核为分叶核或双核，细胞质较为丰富判定为阳性；黏膜固有层中嗜酸性粒细胞浸润情况于低倍镜下观察，选择数目较多区域（8个），高倍镜下确认嗜酸性粒细胞数量，取8个高倍镜视野下平均值。

1.2.4 免疫组化染色 VEGF、Eotaxin、黏蛋白MUC5AC均进行免疫组织化学染色，观察三组VEGF、Eotaxin、黏蛋白MUC5AC表达情况，Eotaxin测定以鼠抗人Eotaxin单克隆抗体为一抗，黏蛋白MUC5AC以鼠抗人黏蛋白MUC5AC单克隆抗体为一抗，VEGF测定以兔抗人VEGF单克隆抗体为一抗，测定步骤严格遵循试剂盒说明书进行。细胞浆或细胞膜伴有棕黄色染色则判定为VEGF或Eotaxin或黏蛋白MUC5AC阳性细胞；在低倍镜下选取每张免疫组化染色切面上8个阳性细胞较多区域，并于高倍镜下计算每个视野内阳性细胞面积占该视野各区域细胞面积百分比，取平均值。阅片过程均由同一名具有副高级别以上的病理科医师完成。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0统计分析软件进行数据处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P < 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE染色情况

观察组术前鼻息肉标本上皮下组织水肿，且基底膜增厚明显形成透明膜层，腺体、杯状细胞增生，黏膜上皮下、腺体周围可见大量嗜酸性粒细胞浸润；术后鼻黏膜组织轻度水肿，腺体及杯状细胞增生减轻，嗜酸性粒细胞明显减少。对照组鼻黏膜未水肿，细胞排列较为整齐，可见少量炎症细胞。

2.2 嗜酸性粒细胞浸润情况

观察组术后嗜酸性粒细胞明显少于本组术前，差异有高度统计学意义（t = 3.317，P = 0.000）。与对照组比较，观察组手术前后嗜酸性粒细胞均较高，差异有高度统计学意义（t = 13.916、15.863，P = 0.000、0.000）。见表1。

2.3 Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF表达情况

观察组术后Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF表达面积百分率明显少于本组术前，差异有高度统计学意义（t = 17.490、5.315、10.872，P = 0.000、0.000、0.000）。与对照组比较，观察组手术前后Eotaxin（t = 32.229、19.062，P = 0.000、0.000）、黏蛋白MUC5AC（t = 14.377、9.089，P = 0.000、0.000）、VEGF表达面积百分率（t = 36.929、28.136，P = 0.000、0.000）均较高，差异有高度统计学意义。见表2。

3 讨论

慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发病率及复发率均较高，临床研究目前尚未明确其具体发病原因[10]。由于炎性疾病均以局部炎症区域白细胞过度聚集为重要特征，故以嗜酸性粒细胞浸润为主要病理特征的鼻息肉形成，同样为复杂炎症过程。本研究中，慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者术前息肉标本上皮下组织水肿，且基底膜增厚明显形成透明膜层，腺体、杯状细胞增生，黏膜上皮下、腺体周围可见大量嗜酸性粒细胞浸润，术后标本组织的组织形态学以腺泡型与水肿型为主要表现，黏膜上皮形态多样，并存在上皮细胞不同程度脱落，可能是机体针对创伤、慢性炎症进行组织结构重建，可引发疾病重症化、慢性化及难治化。间质内存在多种炎性细胞浸润，如嗜酸性粒细胞等，与鼻息肉组织中炎性细胞类型较为相似。嗜酸性粒细胞聚集、活化可致使生物活性物质大量分泌，如嗜酸性颗粒及其主要碱性蛋白、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白及嗜酸性粒细胞过氧化物酶等，均具有较强细胞毒性，可引发气道炎症及气道上皮细胞损伤等临床症状[11]。本研究中，观察组术后嗜酸性粒细胞浸润程度明显下降，但仍显著高于对照组，提示鼻内镜手术能够减轻慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者鼻腔炎性反应，但术后6周时鼻腔炎性反应仍然存在。

慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉炎症发生、嗜酸性粒细胞募集、黏附及脱颗粒过程中Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF等介质、蛋白发挥重要作用[12-13]。Eotaxin可选择性介导嗜酸性粒细胞，趋化嗜酸性粒细胞作用强烈，加速嗜酸性粒细胞原位激活及募集。正常呼吸道中，Eotaxin多由上皮细胞产生，鼻息肉中已有嗜酸性粒细胞大量生成Eotaxin，进而募集嗜酸性粒细胞，大量聚集于炎症部位，周而复始，不断循环，故鼻息肉中嗜酸性粒细胞过多[14]。研究指出[15]，鼻息肉组织中上皮细胞Eotaxin染色阳性较强，且鼻息肉组织相较于正常鼻黏膜，Eotaxin数量明显较多。本研究发现，观察组术后Eotaxin表达明显下降，但仍显著高于对照组（P < 0.01），提示术后鼻息肉组织Eotaxin表达与嗜酸性粒细胞浸润程度联系密切，可协同其他因子，造成术腔增生组织嗜酸性粒细胞过量，慢性炎症状态持续存在于局部微环境。

MUC5AC作为鼻腔黏液主要成分之一，在慢性鼻-鼻窦炎及正常鼻腔黏膜中均有表达，但鼻息肉发生时，其表达明显上调。研究表明[16]，慢性鼻-鼻窦炎属于高黏液性疾病，该疾病患者鼻黏膜中黏蛋白MUC5AC表达明显升高。本研究结果显示，观察组术后黏蛋白MUC5AC表达明显下降，但仍显著高于对照组（P < 0.01），说明慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者鼻黏膜中黏蛋白MUC5AC表达过高。但其术后黏蛋白MUC5AC表达仍高于正常对照组，可能是由于功能性内窥镜手术以恢复鼻窦黏膜功能、形态为最终目的，但手术首要步骤，术后上皮再生恢复极其重要，但术后易出现囊泡、炎性肉芽等阻碍术腔修复情况，临床治疗中应加以重视。

VEGF在鼻息肉组织存在过度表达现象，有学者推测鼻息肉发生过程中，VEGF对组织过度水肿产生作用较为关键[17-18]。研究表明[19]，鼻息肉组织中浸润炎症细胞及血管内皮细胞表达均较高。本研究显示，观察组术后VEGF表达明显下降，但仍显著高于对照组（P < 0.01），提示慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者VEGF表达过高，功能性内窥镜手术虽可一定程度缓解该过程，但效果并不显著。术后VEGF表达仍高于对照组，可能是由于术后创伤修复过程中，术腔局部环境处于慢性炎症状态，使得上皮化转归过程朝向两个方向发展，分别为复发息肉、正常上皮化，造成术腔出现组织增生、水肿[20-22]。因此，术后随访尤为重要，合理处理，避免不必要、频繁组织撕脱，正确用药对预防术后复发尤为重要。

综上所述，慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉患者Eotaxin、黏蛋白MUC5AC、VEGF均表现为过度表达，可能与病情变化有关。在术后随访过程中，应及时处理囊泡、炎性肉芽等阻碍术腔修复情况，促进创面愈合。

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（收稿日期：2018-05-09 本文编辑：金 虹）