血必净注射液与注射用七叶皂苷钠、注射用血塞通配伍稳定性研究

于 洋，蒋春亮，黎先军，张桂萍

(天津红日药业股份有限公司，天津 301700)

血必净注射液是由国内著名中西医急救专家王今达教授在我国经典古方血府逐瘀汤的基础上，以红花、丹参、赤芍、川芎、当归五味中药提取制剂而成的中药注射剂。其主要有效成分有羟基红花黄色素A、芍药苷、氧化芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯和丹酚酸B等[1-3]。血必净注射液具有较强的化瘀解毒功能，用于温热类疾病，症见发热、喘促、心悸、烦躁等瘀毒互结证；适用于因感染诱发的全身炎症反应综合征；也可配合治疗多器官功能失常综合征的脏器功能受损期[4，5]。血必净注射液在骨科治疗领域也有较多应用，治疗作用明显。在治疗骨科创伤时，可缩短愈合时间，减少创伤并发症；治疗严重四肢骨折时，可明显缩短发热、肿胀、疼痛及瘀斑等临床表现的持续时间，促进肢体功能恢复，可有效地恢复患者早期的凝血功能障碍，稳定凝血与纤溶系统的动态平衡[6，7]。

注射用七叶皂苷钠的主要成分是从七叶树科植物天师栗的种子娑罗子中提取的三萜皂苷的钠盐,具有抗炎、抗渗出、消水肿以及抗氧自由基等神经保护作用。在临床上, 应用七叶皂苷治疗各种原因引起的脑水肿以及伴发的脑神经功能性失调, 此外在创伤、骨折、烧伤、术后肿胀以及慢性静脉功能性障碍等相关疾病方面也有较为广泛的适应证[8]。注射用血塞通主要成分为三七总皂苷，具有活血祛瘀、扩张血管、改善血液循环、抗心律失常等作用，用于瘀血阻络、中风偏瘫、胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症，是临床常用的治疗心脑血管病药物[9]，同时在骨科也多有应用[10]。

血必净注射液在骨科治疗中常会与其他骨科用药交替输入体内，短时间混合的配伍情况未知，本试验选取骨科常用输液药物注射用七叶皂苷钠、注射用血塞通与血必净注射液配伍后进行物理、化学稳定性考查，研究血必净注射液与两者的配伍稳定性，为临床安全合理应用药物提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 GWJ-16微粒检测仪(天大天发科技有限公司)，STY-1A渗透压测定仪(天大天发科技有限公司)，YB-2型澄明度检测仪(天大天发科技有限公司)，pH计(METTLER TOLEDO)，高效液相色谱仪(WATERS e2695)。

1.2试药 血必净注射液(天津红日药业股份有限公司，批号1410131)；注射用七叶皂苷钠(无锡凯夫制药有限公司，批号14091101)；注射用血塞通(哈尔滨珍宝制药有限公司，批号E140832a4)；10%葡萄糖注射液(四川科伦药业股份有限公司，批号B14021201-1)；羟基红花黄色素A对照品(中国食品药品检定研究院，批号111637-201310)；芍药苷(中国食品药品检定研究院，批号110736-201438)。甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher Scientific),冰醋酸、磷酸二氢钾、磷酸为优级纯，水为纯化水。

2 方法和结果

2.1配伍溶液制备 根据三种药品使用说明书，本试验全部采用临床药品使用中各药品单次给药最大浓度进行试验，样品全部在层流超净台中模拟临床给药过程进行配制。

2.1.1参比溶液配制 取血必净注射液、注射用七叶皂苷钠和注射用血塞通作为参比溶液。取注射用七叶皂苷钠10 mg、注射用血塞通400 mg，分别与溶媒为10%葡萄糖注射液250 ml混匀，制成七叶皂苷钠10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液。

2.1.2样品溶液配制 取七叶皂苷钠10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液各100 ml分别与血必净注射液100 ml混合。

2.2检测频次及项目 见表1。

表1 检测项目

2.3可见异物检测 在室温条件下，按表1取各个时间点的配伍药液适量，澄明度仪下观察0～8 h内配伍药液的可见异物变化情况。结果配伍后药液均为棕黄色透明液体，澄明度仪下观察0～8 h内可见异物均无明显变化。

2.4pH测定 在室温条件下，按表1取各个时间点配伍药液，测定其pH，每个样本连续测定3次，取平均值。配伍溶液pH值在两参比溶液pH之间，在对应两种药品pH值标准范围内，并在 0～8 h内数值RSD分别为0.41%和0.44%，配伍后两种药液pH值范围合理且观察期间稳定，结果见表2及表3。

表2 各参比溶液pH值

表3 配伍后药液pH值变化

2.5不溶性微粒测定 在室温条件下，按表1取各个时间点配伍药液，用不溶性微粒检测仪测定≥10 μm及≥25 μm的微粒数。配伍药液不溶性微粒值在0～8 h均符合《中国药典》2015年版光阻法项100 ml以下注射剂规定，波动范围狭窄，药液不溶性微粒状态稳定，结果见表4、图1和图2。

表4 各对照溶液不溶性微粒个数 个/10 ml

2.6渗透压测定 在室温条件下，按表1取各个时间点配伍药液，用渗透压测定仪测定渗透压。配伍后药液0～8 h内渗透压值在两参比溶液之间，RSD分别为0.23%和0.57%，配伍药液观察期间渗透压稳定，结果见表5。

图1 配伍后药液不溶性微粒变化(≥10 μm)

图2 配伍后药液不溶性微粒变化(≥25 μm)

药液渗透压(mOsmol/kg)0h4h8hRSD(%)血必净注射液330---七叶皂苷钠10%葡萄糖溶液538---血塞通10%葡萄糖溶液538---血必净与七叶皂苷钠4414394400．23血必净与血塞通4394444410．57

2.7羟基红花黄色素A含量测定

2.7.1色谱条件 色谱柱：Waters symmetry 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(8∶92)为流动相；检测波长402 nm，进样量10 μl，流速1 ml/min，柱温35 ℃，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算不低于5 000。

2.7.2溶液制备

2.7.2.1对照品溶液的制备 取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，50%甲醇稀释制成0.04 mg/ml溶液。

2.7.2.2供试品溶液制备 取“2.1.2”项下两种溶液各10 ml，加水稀释至100 ml，摇匀，即得供试品溶液。

2.7.2.3空白对照溶液制备 取“2.1.1”项下七叶皂苷钠10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液作为空白对照溶液；分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各10 μl，按“2.7.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图3。

2.7.3线性关系考查 取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，50%甲醇稀释制成0.2 mg/ml贮备溶液。再取适量贮备液逐级稀释至系列浓度，各取10 μl进样分析。以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，求得回归方程为Y=3×107X-20 043(r=0.999 6)，羟基红花黄色素A在0.01～0.10 mg/ml范围内线性关系良好。

1.羟基红花黄色素A

2.7.4精密度试验 取羟基红花黄色素A对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，对照品峰面积的RSD为0.32%，表明仪器精密度良好。

2.7.5重复性试验 取“2.1.2”项下两种溶液，按“2.7.2.2”项下方法分别制备两种供试品溶液各6份，按“2.7.1”项下色谱条件进样分析，记录羟基红花黄色素A的峰面积，计算RSD分别为0.51%和0.78%,表明重复性良好。

2.7.6加样回收率试验 取按“2.7.2.2”项下方法制备的供试品溶液各20 ml,分别加入2 ml羟基红花黄色素A对照品贮备溶液，加水定容至25 ml，各制备6份，进行分析，计算七叶皂苷钠10%葡萄糖血必净溶液平均回收率为99.60%，RSD为0.39%；计算血塞通10%葡萄糖血必净溶液平均回收率为99.57%，RSD为0.26%。表明测定方法加样回收率符合要求。

2.7.7稳定性研究 分别取“2.7.2.2”项下的两种溶液，按“2.7.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图4和图5。从图4和图5中可以看出，配伍后药液0～8 h内羟基红花黄色素A的出峰时间无明显变化，含量检测结果无明显变化。表明配伍药液0～8 h内羟基红花黄色素A含量稳定。含量结果见表6。

图4 血必净与七叶皂苷钠配伍后各时间点羟基红花黄色素A高效液相图谱

图5 血必净与血塞通配伍后各时间点羟基红花黄色素A高效液相图谱

药液羟基红花黄色素含量(mg/ml)0h4h8hRSD(%)血必净注射液0．32440．32660．32940．77血必净与七叶皂苷钠0．16250．16160．15960．92血必净与血塞通0．16190．15910．15731．45

2.8芍药苷含量测定

2.8.1色谱条件 Waters symmetry 色谱柱(250 mm×4.6 mm 5 μm)；以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.5)为流动相；检测波长230 nm，进样量10 μl，流速1 ml/min，柱温40 ℃，理论板数按芍药苷峰计算应不低于1 500。

2.8.2溶液制备

2.8.2.1对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，50%甲醇稀释制成0.1 mg/ml溶液。

2.8.2.2供试品溶液制备 取“2.1.2”项下两种溶液各10 ml，加水稀释至100 ml，摇匀，即得供试品溶液。

2.8.2.3空白对照溶液的制备 取“2.1.1”项下七叶皂苷钠10%葡萄糖溶液和血塞通10%葡萄糖溶液作为空白对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各10 μl，按“2.8.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图6。

1.芍药苷

2.8.3线性关系考查 取芍药苷对照品适量，精密称定，50%甲醇稀释制成1.0 mg/ml贮备溶液。再取适量贮备液逐级稀释至系列浓度，各取10 μl进样分析。以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，求得回归方程为Y=456.12X+0.402 8(r=0.999 2)，结果芍药苷在0.02～0.25 mg/ml范围内线性关系良好。

2.8.4精密度试验 取芍药苷对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，对照品峰面积的RSD为0.47%，表明仪器精密度良好。

2.8.5重复性试验 取“2.1.2”项下两种溶液，按“2.8.2.2”项下方法分别制备两种供试品溶液各6份，按“2.8.1”项下色谱条件进样分析，记录芍药苷的峰面积，计算RSD分别为0.68%和0.64%，表明重复性良好。

2.8.6加样回收率试验 取按“2.8.2.2”项下方法制备的供试品溶液各20 ml,分别加入1 ml芍药苷对照品贮备溶液，加水定容至25 ml，各制备6份，进行分析，计算七叶皂苷钠10%葡萄糖血必净溶液平均回收率为99.11%，RSD为0.44%；血塞通10%葡萄糖血必净溶液平均回收率为99.25%，RSD为0.51%；表明测定方法加样回收率符合要求。

2.8.7稳定性研究 分别取“2.8.2.2”项下两种溶液，按“2.8.1”项下色谱条件进样分析，色谱图见图7和图8。从图7和图8中可以看出，两种配伍药液0～8 h内芍药苷的出峰时间无明显变化，含量检测结果无明显变化。表明配伍药液0～8 h内芍药苷含量稳定。含量结果见表7。

图7 血必净与七叶皂苷钠配伍后各时间点芍药苷高效液相图谱

图8 血必净与血塞通配伍后各时间点芍药苷高效液相图谱

药液芍药苷含量(mg/ml)0h4h8hRSD(%)血必净注射液1．30101．29901．30500．23血必净与七叶皂苷钠芍药苷0．62970．63380．63370．37血必净与血塞通芍药苷0．63090．63160．63320．19

3 讨论

试验结果表明，血必净注射液分别与注射用七叶皂苷钠和注射用血塞通以10%葡萄糖为溶媒单次给药最大浓度进行配伍后，室温放置8 h内，可见异物、pH值、不溶性微粒数、渗透压值稳定，羟基红花黄色素A和芍药苷含量稳定，配伍稳定性良好。

注射用七叶皂苷钠说明书中规定溶媒为10%葡萄糖注射液或氯化钠注射液，注射用血塞通说明书中规定溶媒为5%葡萄糖注射液或10%葡萄糖注射液，本试验选用10%葡萄糖注射液。作者对氯化钠注射液溶解的注射用七叶皂钠以及5%葡萄糖注射液溶解的注射用血塞通与血必净注射液的配伍稳定性也做了相同研究，结论与本文研究结论一致。

本试验采用的是血必净注射液与两种药物临床使用中各自单次给药的最大浓度进行配伍试验，因此推断，本试验结论支持血必净注射液与两种药物临床单次给药低浓度时也能获得良好的配伍稳定性。

《中国药典》2015年版四部0903中“光阻法”[11]测定原理为：当液体中的微粒通过一窄细检测通道时，与液体流向垂直的入射光由于被微粒阻挡而减弱，因此由传感器输出的信号降低，这种信号变化与微粒的截面积大小相关。因气泡的存在使光线发生散射或折射，会干扰检测结果，《中国药典》也规定“不适用于进入传感器时产生气泡的注射剂”。配伍药液为两种液体混合而成，势必会产生一定气泡，按《中国药典》方法“静置2 min脱气泡”效果难以达到，因此在检测过程中可以考虑使用一些脱气的方式，如针对检测不溶性微粒药液进行超声或真空脱气。配伍溶液不溶微粒检测标准，有建议参考不小于100 ml静脉注射液标准，但分析本试验配伍两液均为非大输液，以小于100 ml静脉注射液标准更为合理。

综上所述，血必净注射液与注射用七叶皂苷钠或注射血塞通配伍后0～8 h内物理、化学性质无明显变化，配伍稳定。

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