MMT法检测消瘤汤对胃癌细胞凋亡的影响

文亦磊 黄克强 黄羽

（广西中医药大学第一附属医院病理科 广西 南宁 530023）

消瘤汤是由党参、半枝莲、白英等中药配伍组成的有效抗肿瘤复方制剂，通过其固本培元、解毒利湿、健脾益气等功效发挥多层次、多方位的调整作用，对肿瘤有较好的治疗及辅助治疗效果[1]。张莉、逄艳等人的研究显示[2-3]，消瘤汤能够通过天然抗肿瘤成分或免疫调节作用直接或间接抑制乳腺癌及肺癌细胞的增殖。本研究使用MTT法观察消瘤汤促进胃癌细胞株SGC7901凋亡的情况，为后续深入研究其抗肿瘤分子机制和信号通路打下基础。

1.材料与方法

1.1 药物

按照1995年国家药典标准采用党参、半枝莲、白花蛇舌草、白英、龙葵等制备消瘤汤（浓度3.5g/ml），实验前再根据需要将其稀释调整为10μg/ml（低剂量）、50μg/ml（中剂量）、100μg/ml（高剂量），5℃环境下保存。

1.2 细胞与细胞培养

SGC7901胃癌细胞株购自上海生命科学研究院细胞资源中心。细胞常规培养（1640培养基+37℃+5% CO2），实验细胞均处于对数生长期。

1.3 主要试剂及设备

MTT（北京华越洋）；胰蛋白酶（北京华越洋）；无锡华卫酶标仪；湘智低温离心机；无锡一净超净工作台；上海跃进恒温培养箱。

1.4 实验方法

取出处于对数期生长的SGC7901细胞，使用胰蛋白酶收集细胞。将收集到的细胞进行浓度调整，调整为1×105个/ml，在3块96孔板上进行细胞接种，每块96孔板上都分4组（低剂量组、中剂量组、高剂量组、对照组），每组接种8个孔，每孔接种细胞约1×104个。待细胞贴壁生长后，弃去上清液，其中3个组加入不同浓度的含培养基的消瘤汤：10μg/ml（低剂量组）、50μg/ml（中剂量组）、100μg/ml（高剂量组），第4组对照组只加入培养基。3块96孔板在相同环境下分别培养24、48、72 h，然后加入20μl MTT溶液(5mg/ml)，再孵育4h，在实验过程中，通过二甲基亚砜和振荡器的处理，最后在酶标仪上进行测试570nm的吸光值。胃癌细胞生长抑制率=（对照组平均吸光值-不同浓度组平均吸光值）/对照组平均吸光值×100%。

1.5 统计学分析

本次研究中，针对数据的统计处理，应用SPSS软件进行统计学分析，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

实验中可以发现消瘤汤的确具备抑制胃癌细胞增殖、促进其凋亡的作用，这主要是在3个不同浓度的消瘤汤药物组中，在3个不同的时间段内，消瘤汤都对胃癌细胞产生了一定的抑制作用。其中，消瘤汤在高剂量（100μg/ml）条件下作用72h，对胃癌细胞抑制效果最明显，P＜0.05，有统计学意义，详细内容如下分析：

研究中消瘤汤高剂量组、消瘤汤中剂量组、消瘤汤低剂量组以及对照组的培养时间分别为24h，48h，72h，且都是8例数据，通过研究可知：

首先，培养24小时后，消瘤汤高剂量组吸光度为1.491±0.176，抑制率为5.75%，t值△为0.899，P值△＞0.05；

消瘤汤中剂量组吸光度为1.513±0.234，抑制率为4.36%，t值△为0.600，P值△＞0.05；

消瘤汤低剂量组吸光度为1.518±0.196，抑制率为4.04%，t值△为0.605，P值△＞0.05；

对照组吸光度为1.582±0.226；

其次，培养48小时后，消瘤汤高剂量组吸光度为1.452±0.189，抑制率为9.31%，t值△为1.544，P值△＞0.05；

消瘤汤中剂量组吸光度为1.471±0.221，抑制率为8.12%，t值△为1.242，P值△＞0.05；

消瘤汤低剂量组吸光度为1.499±0.236，抑制率为6.34%，t值△为0.939，P值△＞0.05；

对照组吸光度为1.601±0.197；

第三，培养72小时后，消瘤汤高剂量组吸光度为1.423±0.196，抑制率为11.72%，t值△为2.040，P值△＜0.05；

消瘤汤中剂量组吸光度为1.459±0.187，抑制率为9.49%，t值△为1.694，P值△＞0.05；

消瘤汤低剂量组吸光度为1.482±0.213 ，抑制率为8.06%，t值△为1.337，P值△＞0.05；

对照组吸光度为1.612±0.174。

△与对照组比较，72h中的消瘤汤高剂量组的吸光度存在差异性，具备研究意义。

3.讨论

消瘤汤由党参、半枝莲、白花蛇舌草、白英、龙葵等药物配伍而成，具有补气养阴、去毒利湿等功效，之前的一些研究显示，消瘤汤在乳腺癌、肺癌等肿瘤中能发挥抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡的作用。本研究提示消瘤汤亦能通过其复方药物中的天然抗肿瘤成分对胃癌SGC7901细胞发挥抑制作用。其中消瘤汤高剂量组在作用72h后，对胃癌细胞的抑制效果最明显，但消瘤汤是通过何种信号通路和哪些关键基因蛋白发挥其促进胃癌细胞凋亡的作用，尚待进一步研究。

[1]丁艳蕊，张喆，刘建国，孙勇，朱锐.消瘤汤对实验性肝癌大鼠肝脏血管内皮生长因子表达的影响[J].中西医结合研究，2009，1(3):133-136.

[2]张莉，张仲海，徐勤，杨赶梅，张子理，甘洁文.扶正消瘤汤对乳腺癌患者生存质量及免疫功能影响临床研究[J].实用中医药杂志，2008，24(8)：482-483.

[3]逄艳，赵美蓉，李学军.消瘤汤降低中晚期非小细胞肺癌化疗不良反应的临床观察[J].山东中医杂志，2011，30(6)：383-384.