褪黑素在体外受精-胚胎移植中对胚胎的影响*

马 博，张留光，张秀兰

(海南省海口市玛丽医院生殖中心 570203)

褪黑素在体外受精-胚胎移植中对胚胎的影响*

马 博，张留光，张秀兰

(海南省海口市玛丽医院生殖中心 570203)

目的研究在胚胎培养基中添加褪黑素对接受辅助生殖技术治疗的高龄患者胚胎的影响。方法将符合研究条件的患者卵子分为4组，分别置于褪黑素浓度为0 nmol/L(A组)、0.1 nmol/L(B组)、1.0 nmol/L(C组)、10.0 nmol/L(D组)的受精液、卵裂培养液和囊胚培养液中，观察各组正常受精率、可利用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率。结果D组的正常受精率高于其他组，与A组结果比较差异有统计学意义(P<0.05)，C组的可利用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率显著高于A组(P<0.05)。结论较高浓度的褪黑素有利于卵子的受精，特定浓度的褪黑素有利于胚胎的发育。

褪黑激素; 辅助生殖技术;生殖技术,辅助

褪黑素是人类的松果体产生的一种胺类激素，褪黑素通过清除自由基、抗氧化和抑制脂质的过氧化反应保护细胞结构、防止DNA损伤、降低体内过氧化物的含量[1-2]。已有研究显示口服褪黑素可以提高多囊卵巢综合征患者在体外受精-胚胎移植周期中获得成熟卵子的比例，也可以提高卵子和胚胎质量[3]。本研究在培养基中添加褪黑素，观察在此种培养基中反复种植失败患者的卵子受精及胚胎发育情况。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年8月至2016年4月在本院接受辅助生殖技术治疗，采用体外受精联合胚胎移植(IVF)作为授精方式，取卵后成熟卵子数大于或等于12个，女方年龄大于或等于38岁，为首次接受辅助生殖技术治疗的不孕患者进入本项研究，所有患者均知情并签署同意书，共82例，女方年龄38～43岁，平均(40.0±2.1)岁，不孕年限为3～10年，平均(5.4±3.2)年，其中继发性不孕53例，原发性不孕29例。采用常规达菲林方案，前1个月经周期第21天开始调节，肌肉注射达菲林1.00～1.25 mg，月经周期第3～5天查血清卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)值，达标后开始用果纳芬促排卵。超声检查发现1个直径大于或等于18 mm或2个大于或等于16 mm的卵泡，当晚肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)100 000 U，34～36 h后经阴道超声下引导采卵。采卵后第3天行胚胎移植，剩余可行胚胎冷冻保存或行囊胚培养。黄体支持为采卵日开始肌肉注射黄体酮60 mg/d，在移植后14 d检测血β-HCG，移植后30 d行阴道B超检查，以宫腔内见到妊娠囊及胎心搏动为临床妊娠。

1.2方法 在受精培养基、卵裂培养基及囊胚培养基(SAGE系列， 美国)中加入不同量的褪黑素，使其在培养基中的浓度分别为0 nmol/L(A组)、0.1 nmol/L(B组)、1 nmol/L(C组)、10 nmol/L(D组)，取卵后将所获卵子平均放入含不同浓度褪黑素的受精培养基中，并置于37 ℃、含6% CO2、5% O2培养箱中孵育至HCG注射后约39 h行受精操作，受精后16～18 h将受精卵转入对应组的卵裂培养基中并观察受精结果，观察后置于37 ℃、含6% CO2、5% O2培养箱中继续培养，分别在授精后44～46 h及67～69 h观察胚胎卵裂情况，在胚胎生长的第5天及第6天观察囊胚的形成情况。记录各组正常受精率、可利用胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率。优质胚胎在本研究中定义为受精后胚胎细胞数为7～9， 评级为Ⅰ或Ⅱ。

2 结 果

82例高龄患者共获得成熟卵子1 334枚，其中A组344枚，B组335枚，C组331枚，D组324枚，各组受精情况，胚胎发育情况的比较见表1，D组正常受精率明显高于A组(P<0.05)，C组优质胚胎率、囊胚形成率及可利用胚胎率明显高于A组(P<0.05)。各组间受精后第3天优质胚胎卵裂球数见表2。

表1 各组间正常受精率、可利用胚胎率、优质胚胎率、 囊胚形成率比较(%)

a：P<0.05，与A组比较

3 讨 论

褪黑素是一种在夜间由松果体分泌的神经内分泌激素，在不同的生理过程中扮演多重角色[4-6]。对人的生殖系统有重要的调控作用，褪黑素还作为一种自由基清除剂减少在促排卵过程中产生的额外活性氧[7-8]。局部产生的活性氧在卵泡破裂和作为第二信使控制卵细胞成熟过程中的基因表达方面有重要作用，但大量的活性氧会损伤卵泡内卵细胞和颗粒细胞的分子结构[9-10],因此活性氧需要被不断灭活，以保证它的浓度是在维持细胞正常运转的范围内。褪黑素及其代谢产物都是优秀的氧自由基清除剂，防止活性氧对蛋白质和核DNA造成损伤[11-12]。

在本研究中，为将可能影响结果的因素降到最少，对入选患者做出一定的筛选，但本研究数据对接受辅助生殖技术治疗的不同病因患者均具有意义。表1中C、D两组的正常受精率均高于A、B两组，D组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在各组间优质胚胎率、囊胚形成率、可用胚胎率的比较中，C组各项结果均高于其他组，且与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)；移植受精后第3天胚胎卵裂球个数为8的Ⅰ级和Ⅱ级胚胎可以获得较好的临床妊娠率和种植率，表2中第3天优质胚胎的8细胞胚胎比例含褪黑素各组的数值均高于无褪黑素组，其中以C组数值最高，但各组间差异无统计学意义。以上结果提示较高浓度的褪黑素(10 nmol/L)有利于卵子的受精，这可能与褪黑素在卵子受精过程中清除了高浓度精子产生的大量活性氧有关;而特定浓度的褪黑素(1 nmol/L)有利于胚胎的发育。较高浓度的褪黑素(10 nmol/L)在对卵裂期及囊胚期胚胎的影响弱于1 nmol/L组，此情况在本研究中不能解释，需要更进一步的实验来揭示。

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海南省卫生厅基金资助项目(15A200001)。

马博(1978-)，硕士，主要从事生殖医学研究。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.34.021

R711.6

B

1671-8348(2017)34-4820-03

2017-08-23

2017-09-27)