高效液相色谱法在去甲氧基姜黄素纳米脂质载体中药物含量测定中的应用

朱辰龙

浙江省杭州市富阳中医骨伤医院 浙江 杭州 311400

中药研究

高效液相色谱法在去甲氧基姜黄素纳米脂质载体中药物含量测定中的应用

朱辰龙

浙江省杭州市富阳中医骨伤医院 浙江 杭州 311400

高效液相色谱法 去甲氧基姜黄素 纳米脂质载体 含量测定

作为临床中一种十分常见的药物构成成分，去甲氧基姜黄素是姜黄素的类似成分，其临床作用与姜黄素有着一定的相同之处[1]。去甲氧基姜黄素不仅能够起到抗癌、抗氧化及抗炎等药理作用，而且毒副作用少，具有良好的应用前景。然而，临床研究发现去甲氧基姜黄素水溶性差，降低了其生物利用度[2-3]。作为新型的药物载体，纳米脂质载体能够促进液态脂质向固态脂质的转化，提升药物包封率及载药量，与此同时增强药物与癌细胞亲和力，效果显著[4]。研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定去甲氧基姜黄素纳米脂质载体中药物含量，并对研究结果做出总结。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂：此次研究采用的高效液相色谱仪型号为LC-4000，购自山东金普分析仪器有限公司；真空干燥箱型号为DZF-6020，购自北京中科博达仪器科技有限公司提供；电子分析天平型号为FA6103C，购自上海精科天美科学仪器有限公司；紫外-可见分光光度计型号为KV-T3，购自南京肯凡电子科技有限公司；AS30600BDT超声波清洗器购自杭州汇尔仪器设备有限公司。研究使用的去甲氧基姜黄素试剂（纯度＞99%）购自南京道斯夫生物科技有限公司；十二烷基硫酸钠购自苏州市元硕精细化学品有限公司；卵磷脂购自安庆市中创工程技术有限责任公司；棕榈酸甘油酯购自上海升德医药科技有限公司；单硬脂酸甘油酯购自南通锦恒化工有限公司；分析纯购自德州润昕实验仪器有限公司。研究时实验室用水均为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

1.2 方法：分述如下。

1.2.1 供试溶液制备：首先采用电子分析天秤精密称取去甲氧基姜黄素纳米脂质载体制剂1ml，将其置入具塞锥形瓶，给予超声及甲醇破乳处理；然后将上述物质转移到容量为50ml的容量瓶中，在其中加入适量甲醇溶液予以定容，将其留作备用。空白纳米脂质载体溶液的制备方法与上述相同。称取去甲氧基姜黄素5.1mg，将其置入50ml棕色容量瓶，在其中加入甲醇定容，达到相应刻度后得110mg/ml标准品溶液，将其作为对照品溶液。

1.2.2 检测波长确定：将甲醇作为空白，在紫外波长200～800nm范围内对去甲氧基姜黄素溶液进行扫描，剂量为5mg/ml，经过扫描，发现当波长处于420nm时，去甲氧基姜黄素拥有最强吸收率。因此，以420nm作为检测波长。

1.2.3 色谱条件确定：色谱柱规格为4.6nm×250nm，5mm，柱温以300℃为宜，流速设置为1.0ml/min，进样量为20ml，流动相为5%乙腈与43：57冰乙酸。

1.2.4 专属性试验：取去甲氧基姜黄素对照品溶液及去甲氧基姜黄素-纳米脂质载体溶液、空白纳米脂质载体溶液，分别给予甲醇稀释，稀释后各取20ml，进样所需的色谱条件如1.2.3所示。结果显示，辅料不会影响到对去甲氧基姜黄素的测定，说明该测定方法专属性强。

2 结果

2.1 标准曲线：取 对 照 品溶液200μl、400μl、800μl、1600μl、3200μl及5000μl，置入容量为10ml以下的棕色量瓶中，经过甲醇破乳处理后定容，得到浓度 分 别 为 2.04μl/ml、4.08μl/ml、8.16μl/ml、16.32μl/ml、32.64μl/ml、52.5μl/ml，并对峰面积 Y及浓度X进行线性回归分析，得方程为Y=122.32X-276.32，r=0.9997（n=6），且当去甲氧基姜黄素检测浓度处于2.04～52.6mg/ml时，浓度与吸光度线性关系良好。

2.2 精密度试验：对对照品溶液给予5次/d连续检测，对日内精密度进行计算，同样条件下进行1次/d检测，连续检测5d，得出日间精密。结果显示日内精密度与日间精密度RSD分别为0.59%、0.67%（n=5），其能够满足实验测定相关要求。

2.3 稳定性试验：对同一对照品在0、2、4、8、16、24不同时间点予以峰面积测定，得出RSD=0.49%（n=6），说明在24h内其吸收基本稳定，符合测定要求。

2.4 重复性试验：精密量取同一样品，平行条件下制备6份去甲氧基姜黄素纳米脂质载体供试液，在相应的色谱条件下进行测定，结果显示RSD为0.99%，体现出其良好的重复性。

2.5 加样回收率测定：精密量取供试品溶液1ml，将其置入9个棕色容量瓶中，并将其平均分为三组，每组分别加入161μl、20μl、242μl对照品溶液，得到不同浓度溶液，分别测定其在420nm位置的吸光度值，求出回收率。见表1。

2.6 样品检测：制备去甲氧基姜黄素纳米脂质载体制剂3份，分别精密量取20μl，将其置入4ml EP管，给予甲醇定容处理，通过回归方程计算具体浓度，结合稀释倍数计算药物含量。见表2。

表1 加样回收率试验结果分析（n=9）

表2 样品含量测定结果分析（n=3）

3 讨论

脂质纳米粒在临床中又被称作是亚微米载体系统，其应用方便，能够促进活性物与水在任意比例下进行互溶，提升吸收效果[5-6]。国外学者Mishra A等人在研究中采用HPLC法对复方姜黄微囊中的姜黄素及胡椒碱含量进行测定，结果显示，姜黄素0.07342～0.36726μg间、胡椒碱0.00338～0.01696μg间表现为良好的线性关系，其回收率分别达到了97.86%、97.43%，RSD分别为1.81%、1.04%，基于此次试验结果，对HPLC法有着较高的认可度，其认为该方法具有较高灵敏度，可在复方姜黄微囊中姜黄素及胡椒碱含量测定中得以应用[7]。此次研究发现，当去甲氧基姜黄素在420nm位置呈现出最大吸收，当其浓度在2.04～52.6mg/ml之间，去甲氧基与吸光度的线性关系呈现为良好状态，经过计算，其平均回收率能够达到99.22%，体现出该方法的优越性，与国外学者研究一致。

综上所述，采用HPLC法测定去甲氧基姜黄素纳米脂质载体中药物含量，操作便利、准确性高，结果可靠，可在临床药物含量检测中得以推广应用。

[1]刘永涛，李乐，王赛赛，等.鱼组织中双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素含量的超高效液相色谱法测定

[J].分析测试学报，2017，21(2)：183-184.

[2]韩超，朱振瓯，刘滨，等.微波辅助萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定温郁金中3个姜黄素类化合物[J].药物分析杂志，2013，21(2)：185-188.

[3]陈进，代文婷，何争民，等.姜黄素纳米脂质载体中药物含量及包封率测定方法的建立[J].中国药物与临床，2012，12(12)：1550-1553.

[4]Barbosa R D M， Klassen A， Marcato P D， et al.Validation of an HPLC method for the determination of Dibucaine encapsulated in Solid Lipid Nanoparticles and Nanostructured Lipid Carriers[J]. Latin American Journal of Pharmacy，2013，32(9)：1362-1369.

[5]肖衍宇，陈曦，邹浪，等.注射用姜黄色素纳米脂质载体的制备及其质量评价[J].中国新药杂志，2013，16(9)：1088-1093.

[6]陈进，代文婷，邢海燕，等.微载体药物递送系统在姜黄素中的应用研究进展[J].中国现代应用药学，2012，29(10)：885-889.

[7]Mishra A，Dewangan G，Singh W R，et al.A simple reversed phase high-performance liquid chromatography(RP-HPLC)method for determination of curcumin in aqueous humor of rabbit[J].Journal of Advanced Pharmaceutical Technology&Research，2014，5(3)：147-149.

2017-08-01