细胞块制片免疫组化对胸腹腔积液转移性腺癌的诊断价值

龙兆博 唐晓梅 司婷婷 秦 娟 王三喜

·临床研究·

细胞块制片免疫组化对胸腹腔积液转移性腺癌的诊断价值

龙兆博 唐晓梅 司婷婷 秦 娟 王三喜

目的探讨细胞块制片免疫组化对胸腹腔积液转移性腺癌的诊断价值。方法收集胸腹腔积液患者100例，经过穿刺法获取胸腹腔积液标本100 ml，病理检查，给予常规涂片和细胞块制片，均联合免疫组化法，比较两种检测方法相关蛋白阳性、阴性以及不确定性，计算细胞阳性率。结果细胞块检测阳性率为48.0%，高于常规检测的34.0%，不确定性比例为0，低于常规的22.0%(P<0.05)；两种方法对良性组织检测结果显示：CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad均呈低表达，WT-1、Calretinin、CK5/6均呈高表达，恶性组织检测显示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad均呈高表达，并且细胞块法阳性率均高于常规涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6均呈低表达；常规涂片对不确定组织检测结果：WT-1、Calretinin、CK5/6阳性率均较高，其他均为低阳性率，CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在转移性恶性肿瘤中阳性率均较高，并且细胞块阳性率均高于相应的常规涂片法(P<0.05)。结论细胞块制片免疫组化对胸腹腔积液转移性腺癌的诊断具有重要意义，各指标间联合可以判断肿瘤类型。

细胞块；免疫组化；胸腹腔积液转移性腺癌

胸腹腔积液是临床上多种炎症和恶性肿瘤常见的伴随症状，而且部分是首先症状，大部分恶性肿瘤晚期均会产生胸腹腔积液，其中细胞可以来源于肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃肠道肿瘤等[1]，临床可以通过常规的涂片判断细胞良恶性，但是部分肿瘤细胞不典型，诊断比较困难，在细胞学诊断工作中发现胸腹腔积液离心涂片细胞重叠，细胞少，阳性率低，部分难以确认，即使诊断也不能确定肿瘤原发病灶，缺乏科学依据，因此国内外学者探索有价值的方法[2]，近年来有研究资料表明，抗体组合在确定胸腹腔积液良恶性和恶性肿瘤原发病灶及制定治疗方案具有重要意义[3]，本文通过收集我院2015年5月到2017年3月收治的可疑的100例胸腹腔积液恶性病例，采用细胞块免疫组化检测，探讨其在胸腹腔积液转移性腺癌患者汇总诊断意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2014年5月至2016年6月收治的诊断具有胸腹腔积液患者100例，其中男性56例，女性44例，年龄28～70岁，平均(45.45±3.46)岁，病程1～5年，平均(2.78±0.89)年，纳入标准[4]：①经过明确诊断具有胸腹腔积液，并且可以收集到患者完整的检查和疾病资料；②患者均为可疑恶性或者临床怀疑恶性；③患者均进行常规和细胞块涂片检查；④研究符合伦理道德，患者知情同意。排除标准：①明确胸腹腔积液病因者，并且已经确认良恶性者；②依从性差，或者拒绝参加研究者；③经过评价患者生存时间<3个月者。

1.2 研究方法

患者均经过穿刺法获取胸腹腔积液标本100 ml，送至病理科检测，整个实验过程由经过专业训练的经过培训的病理医师进行操作和结果判断。标本通过给予常规涂片和细胞块制片，均联合免疫组化法。

免疫组化法：采用SP法，具体操作方法和要求进行，选用抗体为细胞角蛋白7(cytokeratin，CK7)、上皮细胞表面糖蛋白(MOC-31)、整合素蛋白αv(CD5)1、甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor -1，TTF-1)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)、CA125、肿瘤糖蛋白(Ber EP4)、Wilm’s 肿瘤基因-1(WT-1)、钙结合蛋白(Calretinin)、细胞角蛋白(CK5/6)、足细胞结蛋白(Desmin)、NapsinA、E-cad等，均购自南京建成生物工程研究所，每项指标均设置阳性和阴性对照，整个操作过程均按照试剂盒要求严格执行。

常规涂片法：将胸腹腔积液装入冻存管中，3000 rpm离心15 min，留取细胞沉渣做细胞涂片，染色光学显微镜下观察细胞形态和形状，观察细胞坏死情况等。

细胞块制定方法：胸腹腔积液静置1 h后弃掉上清液，收取全部沉淀，分别装入试管，2 000 rpm，离心5 min，弃上清液，取部分沉淀涂片2张，剩余部分全部制作细胞块，若为血性加入50%乙醇，去除红细胞，2 000 rpm，离心5 min，弃上清液，加入沉淀物等量的蛋清液(鸡蛋清和LBS按照12∶1混合而成)；加入95%乙醇离心2 000 rpm，离心5 min，等凝集成块，用擦镜纸包裹后放入包埋盒中，常规包埋、脱水切片。

1.3 研究指标[5]

比较两种检测方法阳性、阴性以及不确定性，计算细胞阳性率；结果判断：离心涂片，细胞块HE切片，E-cad、CEA、CA125细胞膜为棕黄色颗粒为阳性，TTF-1和WT-1细胞核为棕黄色者为阳性，NapsinA细胞质显示棕黄色者为阳性，CK7细胞质或细胞质和细胞膜同时表现出棕黄色为阳性表达，Calretinin细胞核、细胞膜及细胞质同时表现出棕黄色为阳性表达， 每张切片选取不重复视野观察细胞阳性染色情况，比例≥10%者为阳性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两种方法病理学检测结果

细胞块检测阳性率为48.0%，高于常规检测的34.0%，不确定性比例为0，低于常规的22.0%，差异具有统计学意义(P<0.05)，阴性率二者间差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两种方法病理学检测结果(例，%)

2.2 两种检测方法蛋白阳性检测结果

良性组织两种方法检测显示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad阳性率均较低，WT-1、Calretinin、CK5/6均较高；恶性组织两种方法检测显示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad阳性率均较高，并且细胞块法阳性率均高于常规涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6均较低；不确定组织常规涂片WT-1、Calretinin、CK5/6阳性率均较高，其他阳性率均较低，见表2；CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在转移性恶性肿瘤中阳性率均较高，并且细胞块阳性率均高于相应的常规涂片法(P<0.05)，WT-1、Calretinin、CK5/6在间皮瘤中常规涂片阳性率较高，见表3。

表3 转移性肺癌和间皮瘤组织两种方法检测结果(例，%)

3 讨论

本文浆膜腔中恶性肿瘤均为转移性，浆膜腔中细胞学病理检测对于恶性肿瘤诊断及肿瘤原发病灶的治疗和预后评估具有重要意义，随着医学的发展，精确医疗要求病理诊断既要确定肿瘤的良恶性，同时也要判断肿瘤组织来源[6]，为组织的后续治疗提供良好基础，胸腹腔积液细胞块免疫组化抗体选择是诊断鉴别的关键，但是选择合适抗体是建立在细胞形态和临床病史，影像学检查及相关实验基础上，才能使病理诊断更加精确，不能主观选择抗体，在胸腹腔积液中检测中我选择抗体主要有CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、WT-1、Calretinin、CK5/6、NapsinA、E-cad等，目前研究发现每种蛋白抗体均具有特殊对应的癌症，比如CA125主要针对女性患者，以排除暖巢癌和乳腺癌[7-8]。

本文通过收集100例胸腹腔积液标本检测发现细胞块检测阳性率为48.0%，高于常规检测的34.0%，说明细胞块法较常规涂片更加灵敏，可以避免漏诊或者误诊等现象发生等，对比两种方法蛋白抗体显示两种方法在良性组织检测显示CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4、NapsinA、E-cad阳性率均低表达，WT-1、Calretinin、CK5/6均高表达，而在恶性组织检测结果与良性组织相反，并且恶性组织中CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4在转移性恶性肿瘤中阳性率均高表达，且细胞块阳性率均高于相应的常规涂片法，再次说明细胞快法具有较高诊断精确性，并且各种蛋白可以单独诊断也可以联合检测对疾病诊断和筛选，其中CEA是是大肠癌组织产生的1种糖蛋白[9]，是1个广谱性肿瘤标志物，反映多种肿瘤的存在，对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断；TTF-1是核转录蛋白，表达与肺、甲状腺、上皮细胞及胚胎大脑的某些区域，组织学研究发现TTF-1在肺腺癌中敏感性和特异性较高[10]，间皮细胞中不表达，与本研究相同；NapsinA是1种新型的天门冬氨酸蛋白酶，正常情况下存在肺Ⅱ型肺泡上皮，部分Ⅰ型，研究发现在肺腺癌中特异表达，并且在TTF-1部分阴性组织中阳性表达，可以与TTF-1联合使用用于肺源性肺腺癌诊断；CA125是上皮性卵巢，尤其是浆液性癌的主要标志，敏感性高，但是特异性较差，粘液肿瘤不存在，CA125不仅是卵巢癌主要标志，而且在子宫内膜癌、宫颈腺癌、胰腺癌等癌症中具有不同表达，因此需要和其他指标联合使用；临床上对于CK7、MOC-31、CD51、Ber EP4、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin、E-cad等均具有对应的恶性肿瘤的诊断或者筛选，对于各指标之间的联合应用还是需要更加长时间的研究[11-12]。

综上所述，细胞块制片免疫组化对胸腹腔积液转移性腺癌的诊断具有重要意义，各指标间联合可以判断肿瘤类型，并且各项抗体蛋白联合应用对于胸腹腔积液的良恶性及原发病灶的确认具有中重要的诊断意义，其中TTF-1、CEA、CA125针对肺腺癌，CEA、CA125联合使用鉴别卵巢浆液性癌输卵管癌，E-cad可以确定胸腹腔积液良恶性，Calretinin用于间皮细胞癌等，组合抗体最大优点为敏感性和特异性均高，病理诊断结果客观、准确，可靠，具有广泛的临床应用前景，但是临床上还是存在一部分不能诊断的癌症，需要进一步深入研究。

[1] 杨晓林.胸腹水细胞块切片结合免疫组化用于病理诊断的价值〔J〕.中国药物经济学,2017,12(1):118-120.

[2] 唐应成,梁利斌,杨瑞仙,等.胸腔积液细胞块免疫组化染色的病理诊断价值〔J〕.第三军医大学学报,2012,34(15):1568-1571.

[3] 付海洋,王成勤,赵 洁.快速石蜡法在胸腹水细胞蜡块制作中应用〔J〕.临床与实验病理学杂志,2012,28(7):820-821.

[4] 杨 新,王秋实,李艳青,等.细胞蜡块结合免疫组化有效提高胸水细胞学阳性检出率的临床研究〔J〕.现代肿瘤医学,2014,22(12):2894-2897.

[5] 黄其文,姜汉国.胸腔积液细胞块切片免疫组化染色技术鉴别诊断肺腺癌的临床研究〔J〕.临床肺科杂志,2017,22(2):227-229.

[6] 侯 刚,尹 燕,韩 丹,等.胸腔积液脱落细胞免疫组化染色对肿瘤来源鉴别诊断价值的探讨〔J〕.中华肿瘤防治杂志,2012,19(21):1647-1650.

[7] 余 琦,李 宁,刘成龙,等.免疫组化和苏木素伊红染色在良恶性胸腹水诊断的应用价值〔J〕.局解手术学杂志,2010,19(1):13-15.

[8] 余 强,邹兰英,陈庭轩.Ki-67在良恶性胸腹水鉴别中的临床价值分析〔J〕.标记免疫分析与临床,2015,22(12):1253-1255.

[9] 陈坚平,康凯夫,吴国标,等.液基细胞学联合细胞块免疫组化检测对肺癌诊断价值研究〔J〕.临床肺科杂志,2016,21(1):16-19.

[10] 戴维德,吴明晓,王川予,等.超声引导下细针抽吸细胞块免疫组化技术对浅表淋巴结转移癌的诊断价值〔J〕.山西医科大学学报,2016,47(4):369-372.

[11] 周秋媛,张惠箴,蒋智铭,等.胸腹水沉渣包埋切片中Napsin-A、CK7、TTF-1等的表达及临床意义〔J〕.临床与实验病理学杂志,2013,29(6):671-673.

[12] Ioannou M,Papamichali R,Samara M,et al.Diagnostic value of immunohistochemistry for the detection of the BRAF V600E mutation in colorectal carcinoma〔J〕.J BUON,2016,21(3):618-625.

DiagnosticValueofImmunohistochemistryofCellMassinMetastaticAdenocarcinomaofAscites

LONGZhaobo,TANGXiaomei,SITingting,etal.

BaojiCentralHospital,Baoji,721000

ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of immunohistochemistry of cell mass in metastatic adenocarcinoma of thoracic ascites.Methods100 patients with thoracic and ascites were collected.100 ml of ascites specimens,pathology test,given conventional smear and cell block production,were combined with immunohistochemical method,compared the 2 detection methods related protein positive rate,negative rate and uncertainty rate,calculate the positive rate of cells.ResultsThe positive rate of cell block test was 48.0%,higher than routine detection(34.0%),and the uncertainty ratio was 0.0,which was lower than that of routine 22.0% (P<0.05);The 2 methods of benign tissue test results showed:the expression of CK7,MOC-31,CD51,TTF-1,CEA,CA125,Ber EP4,NapsinA and E-cad were low,the level of WT-1,Calretinin and CK5/6 were highly expressed,the results of malignant tissue showed that CK7,MOC-31,CD51,TTF-1,CEA,CA125,Ber EP4,NapsinA and E-cad were highly expressed,and the positive rate of cell mass method was higher than that of conventional smear method (P<0.05),and WT-1,Calretinin and CK5/6 showed low expression;Routine smear on the uncertainty of tissue test results showed:The positive rate of WT-1,Calretinin,CK5/6 were higher,the other were low positive rate,The positive rate of CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、CEA、CA125、Ber EP4 in metastatic malignancy were higher,and the positive rate of cell mass was higher than that of conventional smear method (P<0.05).ConclusionImmunohistochemistry of cell mass is of great significance in the diagnosis of metastatic adenocarcinoma of thoracic and ascites.The combination of each index can judge the tumor type.

Cell block;Immunohistochemistry;Pleural effusion metastatic adenocarcinoma

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1787～1790)

宝鸡市卫生局科研项目(编号：2013-32)

721000 陕西省宝鸡市人民医院

王三喜

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.014

R730.261

A

1001-5930(2017)11-1787-04

2017-04-20

2017-08-28)

(编辑：吴小红)