葛明胶囊薄层色谱鉴别实验研究※

马雪云戚欢阳 黄亦琦 钱叶雯潘东明

（1 福建中医药大学药学院，福州 350122；2 厦门市医药研究所·厦门市天然药物研究与开发重点实验室，厦门 361008）

葛明胶囊薄层色谱鉴别实验研究※

马雪云1，2戚欢阳2*黄亦琦2*钱叶雯1潘东明1，2

（1 福建中医药大学药学院，福州 350122；2 厦门市医药研究所·厦门市天然药物研究与开发重点实验室，厦门 361008）

目的 建立葛明胶囊及处方的定性鉴别方法。方法 采用薄层色谱法，以葛根素，丹酚酸B，熊果酸和大黄素为对照品，分别对葛明胶囊及处方中的葛根、山楂、丹参及决明子进行定性鉴别。结果 所建立的薄层色谱分析方法分离效果良好。结论 所建立的鉴别方法重复性好，专属性强，为葛明胶囊及处方的质量控制奠定基础。

葛明胶囊；薄层色谱法；葛根；山楂；丹参；决明子

葛明胶囊是厦门市医药研究所依据中医食疗理论和现代中医药研究的成果，经国家食品药品监督管理总局批准的保健食品（国食健字G20100467），具有辅助降血脂作用[1-2]。由葛根、山楂、决明子及丹参等中药制成，具有清肝利湿、活血理气、润肠通便等功效，除辅助降血脂作用外，可用于防治脂肪肝、高脂血症和肥胖症[3-6]。葛明胶囊中主要药效成分为葛根素、熊果酸、大黄素、丹酚酸B，葛根素可通过增加肝脏中胆固醇和胆汁酸的排泄来减轻高胆固醇饮食导致的动脉粥样硬化[7]。熊果酸通过促进乙酰辅酶A羧化酶磷酸化和肉毒碱棕榈酰转移酶1的蛋白表达，抑制胚胎成纤维细胞分化和脂肪形成来降脂[8]。大黄素抑制动脉粥样硬化，降低血脂[9]。丹酚酸B通过抑制低密度脂蛋白（LDL）被氧化成氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL），从而减少巨噬细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞和成纤维细胞等释放酸性成纤维细胞生长因子使原已发生的动脉粥样硬化（AS）病变发展延缓甚至消退[10]。为严格控制葛明胶囊内在质量的稳定性，提升产品技术水平，本文采用多指标同时检测，为葛明胶囊及处方质量检测和控制方法提供依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 XS205电子分析天平（瑞士梅特勒，托利多公司，d=0.01 mg）；KQ-500VDB型三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；WS70-1红外线快速干燥器（南通科学仪器厂），WFH-203三用紫外分析仪（上海精课实业有限公司）。

1.2 试药与试剂 甲醇（批号20160902），石油醚（60～90°C，批号1607181），乙酸乙酯 （批号1606211），无水乙醇（批号20160222），三氯甲烷（批号1411181），盐酸 （批号1410211），氨水 （批号1412281），硫酸（批号1311251），均为分析纯（西陇科学股份有限公司）。硅胶G/GF254薄层板（青岛海洋化工有限公司）。实验用水均为超纯水系统自制双蒸水。

标准品：葛根素 （批号110752-201313，纯度95.5%，中国食品药品检定研究院），丹酚酸B（批号111562-200403，中国药品生物制品鉴定所），大黄素（110876-200619，中国药品生物制品鉴定所），熊果酸（110844-2004120，中国药品生物制品鉴定所）。葛明胶囊（批号 20140407，20140523，20140817，厦门市医药研究所）。饮片：丹参（批号161215），山楂（批号161219），泽泻（批号161116）购自厦门燕来福制药有限公司；决明子（批号1608270122），葛根（批号1611010072）购自亳州市沪谯药业有限公司。

2 方法及结果

2.1 提取溶剂的选择

2.1.1 对照品溶液的制备 取葛根素、熊果酸、丹酚酸B对照品，分别加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备 葛明胶囊提取物制备：取葛明胶囊内容物0.05 g，平行称7份，分别加入10 mL水、石油醚（60～90°C）、70%乙醇、甲醇、无水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯浸泡30 min，超声处理（100 W，80 HZ） 30 min，过滤，滤液蒸干至1 mL（石油醚（60～90°C） 提取物蒸干至0.5 mL），作为供试品溶液。葛明处方提取物制备：按葛明胶囊处方配比，取各单味药混合，粉碎，称取2 g（n=3），加入20 mL的甲醇，浸泡30 min，超声处理（100 W，80 HZ）30 min，过滤，滤液蒸干，加甲醇3 mL使溶解，过滤后作为葛明处方供试品溶液。

2.1.3 薄层色谱条件及结果 取以上供试品溶液5 μL，对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水 （14∶1∶1） 为展开剂[11]，展开，展距3.5 cm，取出，晾干，再以石油醚-乙酸乙酯（3∶1） 为展开剂，展开，展距7.5 cm，取出，晾干，在氨蒸气中熏蒸10 min，置日光下或紫外灯（365 nm）下检视，或喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，置紫外灯（365 nm）下检视，结果见图1。

图1 葛明胶囊7种不同提取溶剂薄层色谱图

2.2 葛明胶囊中葛根、山楂、丹参的定性鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备 称取3个不同批次（20140407，20140523，20140817） 的葛明胶囊内容物各0.05 g，分别加入10 mL甲醇，浸泡30 min，超声处理（100 W，80 HZ） 30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 制备方法同2.1.1。

2.2.3 色谱条件及结果 色谱条件同2.1.3，结果见图2~3。

图2 葛明胶囊中葛根、山楂、丹参的薄层色谱图

图3 葛明处方中葛根、山楂、丹参薄层图

2.3 葛明胶囊中决明子的定性鉴别

2.3.1 供试品溶液的制备 称取3个不同批次的（20140407，20140523，20140817）葛明胶囊内容物0.5 g，加30%乙醇-盐酸 （10∶1） 的混合液30 mL使溶解，置水浴锅中加热回流1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）的混合溶液2 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取适量大黄素对照品，用甲醇配成0.1 mg/mL的对照品溶液，备用。

2.3.3 色谱条件及结果 取以上供试品溶液、对照品溶液2 μL，在同一硅胶GF254薄层板上分别点样，以石油醚∶乙酸乙酯（3∶1） 为展开剂，展开，展距7.5 cm，取出，晾干，在氨蒸气中熏蒸10 min，置紫外365 nm下检视，结果见图4~5。

图4 葛明胶囊中中决明子薄层色谱图

图5 葛明处方中决明子薄层色谱图

3 讨论

以葛根素、丹酚酸B和熊果酸为对照品，考察不同溶剂提取葛明胶囊，通过薄层色谱图（图1）可以同时检测到3种对照品，且各组分间的分离效果较好，故采用甲醇作为供试样品的提取溶剂。从图2和3可见，样品展开后在氨蒸气中熏蒸10 min，置紫外365 nm下检视，供试品在与葛根素对照品相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；另外，展开后的薄层板经过10%硫酸显色后，供试品与丹酚酸B、熊果酸对照品相应位置上，显相同颜色的斑点，置紫外365 nm下检视，供试品与丹酚酸B、熊果酸对照品相应位置处显相同的荧光斑点，该薄层鉴别方法分离度好，Rf值适宜，稳定性好，适合于葛明胶囊和处方中葛根、山楂、丹参的定性鉴别。由图4和5可见，样品展开后，在氨气中熏蒸10 min后，供试品与大黄素对照品相应位置上，显相同颜色的斑点，置紫外365 nm下检视，供试品与大黄素对照品相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，该薄层鉴别方法分离度好，Rf值适宜，稳定性好。适合于葛明胶囊和处方中决明子的定性鉴别。实验确定的多指标同时检测葛明胶囊及处方中有效成分的薄层色谱定性鉴定方法，为严格控制葛明胶囊内在质量的稳定性，保障产品质量，提升产品技术水平提供依据。

[1]黄亦琦，赵鹏，杨辉，等.葛明胶囊调节血脂作用临床试验[J].辽宁中医药大学学报，2011，13(8):41-43.

[2]黄亦琦，林蔚，杨辉，等.葛明胶囊的毒理学安全性评价[J].福建医药杂志，2012，34(1):6-9.

[3]黎海彬，方昆阳，吕翠婷，等.决明子、山楂提取物不同配比降血脂作用的研究[J].中药材，2007，30（5）：573-575.

[4]康文艺，李晓梅，郭曙光.山楂提取物不同部位体内降血脂作用[J].中成药，2009，31（9）：1342-1345.

[5]缪亚东，欧阳臻，袁斌.葛根、山楂、制首乌的提取物降血脂作用的研究[J].现代中药研究与实践，2008，22（3）：27-29.

[6]王云来，樊守艳，韩进.山楂丹参合用调节血脂作用的实验研究[J].浙江中医药大学学报，2006，30(5):467-468.

[7]张雁，张孝祺.葛根的营养保健功能及开发利用[J].食品研究与开发，2000，21(2):37-39.

[8]吴淑艳，张杰，朱德增.熊果酸对胰岛素抵抗大鼠糖代谢及肝脏葡萄糖激酶的影响[J].云南中医学院学报，2011，34(1):20-24.

[9]赵剑锋，刘运芳，王卫红.大黄素对小鼠动脉粥样硬化模型的干预研究[J].泰山医学院学报，2012，33(1):4-6.

[10]Lee BW，Chun SW.Lithospermic acid B protects beta-cells from cytokineinduced apoptosis byalleviatingapoptotic pathways and activating anti-apoptotic pathways ofNrf2-HO-1 and Sirt1[J].Toxicol Appl Pharmacol，2011，252(1):47-54.

[11]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社，2015:212-213.

The Experimental Study on the Identification of Geming Capsules by Thin Layer Chromatography

MA Xueyun1,2,QI Huanyang2*,HUANG Yiqi2*,QIAN Yewen2,PAN Dongming1,2
(1.College of Pharmacy,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fujian Province,Fuzhou 350122,China;2.Xiamen Medicine Institute·Xiamen Natural Medicine Research and Development Key Laboratory,Fujian Province,Xiamen 361008,China)

Objective To establish the qualitative identification method of Geming capsule and prescription.Methods The puerarin,salvianolic acid B,ursolic acid and emodin were selected as the reference substance.The qualitative identification of Pueraria lobata,Hawthorn,Salvia miltiorrhiza and Cassia obtusifolia was carried out by thin layer chromatography (TLC).Results The established TLC analysis method is effective.Conclusion The identification method has good repeatability and strong specific,can provide the basis for the quality control of Geming capsule and prescription.

Geming capsule;thin layer chromatography;pueraria lobata;hawthorn;salvia miltiorrhiza;cassia obtusifolia

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.23.067

1672-2779（2017）-23-0150-03

福建省厦门市科技计划资助项目【No.3502Z20021011】

*通讯作者：huanyang7@163.com；huangyq502@sina.com

2017-10-27）