99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中的敏感性与特异性探讨

赵金彩 刘明霞 袁有法 王庆胜 张金树

99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中的敏感性与特异性探讨

赵金彩1刘明霞1袁有法1王庆胜1张金树2

目的探究99mTc-甲氧异丁基乙腈(99mTc-MIBI)亲肿瘤显像联合去整合素金属蛋白酶9(ADAM-9)、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中的敏感性与特异性。方法选择2014年12-2016年12月在我院接受CT检查发现肺部存在性质待定结节的78例男性患者作为本次研究对象，其中46例肺恶性结节患者作为恶性组，32例肺良性结节患者作为良性组，另选择男性健康者40例作为对照组，比较三组支气管肺泡灌洗液(BALF)中的ADAM-9 mRNA表达水平、BALF和血清中ADAM-9蛋白表达水平以及血清性激素水平，并分析9mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结节患者良恶性诊断的阳性预测值、阴性预测值、准确性、特异性及灵敏性。结果恶性组患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表达水平均显著高于对照组，而良性组患者上述各指标均显著低于对照组，数据差异具有统计学意义(Plt;0.05)；恶性组患者雄激素、雌二醇及黄酮水平均显著低于对照组和良性组，差异均具有统计学意义(Plt;0.05)；99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结节良恶性诊断，其阳性预测值、阴性预测值、准确性和灵敏性均显著优于99mTc-MIBI亲肿瘤显像或ADAM-9和性激素检测诊断方法，差异具有统计学意义(Plt;0.05)。结论99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中具有重要临床价值，其准确性、特异性与灵敏度均十分理想。

99mTc-MIBI；去整合素金属蛋白酶9；性激素；肺结节；诊断；特异性；灵敏性

肺癌作为临床一种常见肿瘤疾病，对人类生命安全存在严重威胁[1-2]。99mTc-甲氧异丁基异睛(99mTc-MIBI)是一种临床常用肿瘤阳性显像剂，可明显提升肺癌诊断准确性及灵敏度[3]。报道指出，肺结节病及肺结核患者去整合素金属蛋白酶9(A disintegrin and metalloproteinase-9, ADAM-9)阳性表达显著低于正常患者，但肺癌患者显著高于正常患者[4]。此外，有研究发现，肺癌患者存在性激素失衡及紊乱现象[5]。本文主要探讨99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中的敏感性与特异性。

资料与方法

一、一般资料

选择2014年12-2016年12月在我院接受CT检查发现肺部存在性质待定结节78例男性患者作为本次研究对象，其中经病理检查，确诊46例肺恶性结节(恶性组)，年龄为38-75岁，平均(60.37±4.05)岁；有吸烟史患者32例；结节大小为1.3-4.8 cm，平均(2.84±0.42)cm；恶性组织学分型：腺癌20例，鳞状细胞癌26例；32例良性结节(良性组)，年龄为39-74岁，平均(61.28±3.92)岁；有吸烟史患者24例；结节大小为1.4-4.6 cm，平均(2.73±0.39)cm；良性结节类型：肉芽肿6例，血肿7例，炎性病变12例，其他7例。另选择男性健康者40例作为对照组，年龄为40-70岁，平均(59.86±4.17)岁；吸烟史29例。本研究方案已经获得本院伦理委员会批准，所有研究对象及其家属均对该研究方案有详细了解，且自愿签署了知情同意书。

二、排纳标准

纳入标准：①所有肺结节患者均经临床影像学检查及病理活检确诊，符合相关诊断标准；②所有肺结节患者均未接受过任何药物治疗、放疗和化疗；③肺结节恶性患者肿瘤分期为I期的患者；④同意接受99mTc-MIBI亲肿瘤显像检查的肺结节患者。排除标准：①对99mTc-MIBI过敏的患者；②具有肝、肾等人体重要器官功能严重障碍的患者；③伴有神志不清，无法正常交流的患者；④依从性较差，无法有效配合医师相关检查的患者。

三、方法

199mTc-MIBI亲肿瘤显像[6]

采用SPECT显像仪(SOPHA-DST，法国)通过低能高分辨准直器对所有肺结节患者进行检查，其中MIBI试剂盒购自北京师宏药物研制中心，锝液(99mTc)购自原子高科股份有限公司。图像共采集64幅，矩阵256×256，采集图像每帧1000K。患者在接受检查前一天内需清淡饮食，检查时在病灶对侧通过肘前静脉进行99mTc-MIBI注射，剂量为1110MBq，分别采集患者肺部断层及平面早期(30min)和延迟(120min)图像，通过衰减及滤波校正所选取的图像，采用ROI勾勒法，分别计算患者早期及延迟相肿瘤放射性摄取量(即T值)和早期及延迟相正常组织放射性摄取量(即N值)，显像结果判定标准为：T/Nlt;1.4为阴性，T/N≥1.4为阳性。

2 ADAM-9 检测方法

分别对3组研究对象(恶性组、良性组及健康对照组)进行支气管肺泡灌注，采集各研究对象支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)，并将其通过无菌纱布进行过滤，滤液放置于50mL试管(无菌且不含有RNA酶)中，采用低温(4℃)离心机进行10min低速离心，收集细胞沉淀，通过磷酸缓冲液(0.01mol/L)轻轻冲洗，再进行10min低温低速离心，细胞沉淀物通过Trizol试剂盒(购自美国Introgen公司)进行处理，并放置于-80℃保存待用，同时收集3组研究对象清晨空腹外周血5mL，离心15min(转速为3000r/min)，收集血清，并放置于-80℃保存待用。BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平通过荧光定量PCR仪(ABI Prism 7000型，购自上海普迪生物科技有限公司)进行荧光定量RT-PCR检测[7]，其中SYBR Green I染料购自大连美仑生物技术有限公司，PCR引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司。BALF和血清ADAM-9蛋白表达通过ELISA法检测[8]。若研究对象ADAM-9 mRNA表达水平或ADAM-9蛋白表达水平显著高于正常值则判定结果为阳性。

3 血清性激素检测

采用上述ADAM-9蛋白表达检测剩余血清进行检测，分别检测各研究对象血清黄酮、雌二醇及睾酮水平，通过ELISA法进行测定，试剂盒购自上海玉博生物科技有限公司，具体操作严格按照使用说明书进行。若研究对象三种雌激素水平均显著低于正常值则判定结果为阳性。

499mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测诊断

联合诊断阳性判断标准为99mTc-MIBI亲肿瘤显像诊断阳性或单个指标判定为阳性。

四、统计学方法

本研究所有数据均采用SPSS 20.0统计软件分析，以百分数(%)表示计数资料，组间对比通过卡方检验(χ2)进行分析，以均数±标准差( ±s)表示计量资料，所有数据均符合正态分布，采用独立样本t检验进行组间对比分析。当Plt;0.05，表示数据差异具有统计学意义。

结 果

一、三组研究对象ADAM-9 mRNA表达水平及ADAM-9蛋白表达水平

与健康男性相比，男性肺结节恶性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平显著升高，而良性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平显著降低，数据差异具有统计学意义(Plt;0.05)；男性肺结节恶性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表达水平均显著高于健康男性人群，而良性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表达水平均显著低于健康男性人群，数据差异具有统计学意义，Plt;0.05。(见表1)。

表1 三组ADAM-9 mRNA及ADAM-9蛋白表达水平比较

二、三组研究对象血清性激素水平情况

健康男性人群中，雄激素、雌二醇及黄酮含量分别为(5.56±0.40)ng/mL、(33.52±3.61)pg/mL以及(0.58±0.16)ng/mL，检测男性肺结节良性患者血清性激素水平发现，雄激素、雌二醇及黄酮水平虽然有下降趋势，但与健康男性相比，差异不具有统计学意义(Pgt;0.05)；而男性肺结节恶性患者雄激素、雌二醇及黄酮水平均显著低于健康男性人群和性肺结节良性患者，差异均具有统计学意义(Plt;0.05)。(见表2)。

表2 三组血清性激素水平比较

三、99mTc-MIBI亲肿瘤显像检查结果

99mTc-MIBI亲肿瘤显像检查用于男性肺结核良恶性诊断，其阳性预测值为68.75%(33/48)，阴性预测值为56.67%(17/30)，准确性、特异性及灵敏性分别为64.10%、53.13%和71.74%。(见表3)。

表3 99mTc-MIBI亲肿瘤显像检查结果

四、ADAM-9和性激素检测判定结果

用ADAM-9和性激素检测用于男性肺结核良恶性诊断，其阳性预测值为71.43%(30/42)，阴性预测值为55.56%(20/36)，准确性、特异性及灵敏性分别为64.10%、62.50%和65.22%。详见表4。

表4 ADAM-9和性激素检测判定结果

五、99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测判定

99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结核良恶性诊断，其阳性预测值为89.58%(43/48)，阴性预测值为88.89%(24/27)，准确性、特异性及灵敏性分别为85.90%、75.00%和93.48%。(见表5)。

表5 99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测诊断男性肺结节患者良恶性结果

显像诊断、指标诊断以及二者联合检测诊断

99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结核良恶性诊断，其阳性预测值、阴性预测值、准确性和灵敏性均显著优于99mTc-MIBI亲肿瘤显像或ADAM-9和性激素检测诊断方法，差异具有统计学意义(Plt;0.05)。99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结核良恶性诊断的特异性与ADAM-9和性激素检测诊断以及99mTc-MIBI亲肿瘤显像诊断相比，不具有显著性差异，Pgt;0.05。(见表6)。

表6 显像诊断、指标诊断以及二者联合检测诊断

讨 论

随着人类社会不断发展，环境污染逐渐加重，肺癌发病率呈逐年上升趋势，临床早诊早治十分必要。肺癌传统影像学检查主要为CT和核磁共振，但二者均存在不足之处[9]。CT对于判断纵隔及胸壁侵犯或纵隔淋巴结是否转移难以取得令人满意的效果，其诊断平均特异性为(0.77±0.02)，平均敏感性为(0.60±0.02)，阳性预测值及阴性预测值分别为50%和85%，诊断正确性仅能够达到75%，具有较大局限性[10]。而核磁共振对于肺部细微结构的观察效果欠佳，难以显示直径低于1cm的结节；且体内装有支架、心脏起搏器等金属物质的患者无法采用核磁共振检查；此外检查时间较长，部分患者并不适用[11]。因此，临床急需研究开发一种准确性更高的诊断方案。甲氧基异丁基乙腈是一种带有正电荷的亲脂分子，而线粒体内膜带有负电荷，两者之间存在电位差，因此MIBI能够进入机体细胞内，且超过90%的MIBI可进入线粒体[12]。肿瘤细胞内存在大量线粒体，导致MIBI被大量摄取，从而使MIBI在肿瘤组织和正常组织间分布存在明显差异，并形成阳性显像，基于该原理，99mTc-MIBI亲肿瘤显像已广泛用于临床肺结节良恶性诊断[13]。

ADAM是一类跨膜糖蛋白，可调节细胞与外基质以及细胞与细胞间的相互作用，并可维持细胞的正常生理形态及功能，报道指出，在多种常见恶性肿瘤中，ADAM-9表达量均有明显升高，可通过改变分子活性状态和使细胞间黏附下降，发挥细胞迁移及外基质重塑调节作用，为肿瘤生长、转移提供生理条件[14]。有学者研究发现，ADAM-9在正常肺组织肺泡间隔及肺泡腔内有大量表达，且肺癌患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达量显著高于正常人群，且肺癌患者BALF和血清中ADAM-9 蛋白表达水平同样显著高于正常人群，可见ADAM-9异常高水平表达同肺癌发生密切相关[15]。本研究结果亦表明，男性肺结节恶性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平显著高于健康男性；且男性肺结节恶性患者BALF及血清中ADAM-9 蛋白表达水平同样显著高于健康男性人群，数据差异具有统计学意义(Plt;0.05)，该结果与前人研究相符。此外，ADAM-9还具有分解明胶和纤维结合素的作用，可能具有水解外基质蛋白的作用。研究结果发现，男性肺结节良性患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平显著以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表达水平均显著低于健康男性人群，数据差异具有统计学意义(Plt;0.05)。分析原因可能与ADAM-9具有降低细胞与外基质以及细胞与细胞间作用效果有关，使得细胞与细胞基质间平衡被破坏，从而导致肉芽肿形成，并为肺纤维化的发生提供条件。可见，检测肺结节患者BALF中的ADAM-9 mRNA表达水平以及BALF和血清中ADAM-9 蛋白表达水平，可用于肺结节良恶性诊断。

女性和男性中性激素水平具有较大差异，为了排除性别差异的干扰，本研究仅选择男性患者进行研究，且所有肺结节恶性患者均经病理证实处于I期，以探究性激素是否可以作为恶性肿瘤早期判断依据。睾酮是一种由睾丸间质细胞直接分泌的性激素，最终可在肝脏中转化为雌激素或被灭活，男性人群体内，大部分雌激素由睾酮转化形成，睾丸仅分泌较小一部分[16]。本研究结果发现，男性肺结节恶性患者雄激素、雌二醇及黄酮水平均显著低于健康男性人群，差异均具有统计学意义(Plt;0.05)；而男性肺结节良性患者上述三种性激素水平虽然有一定程度降低，但并不显著(Pgt;0.05)。提示性激素水平检测可能对男性肺结节恶性患者诊断具有一定辅助作用。该结果与张双等学者[17]研究结果相同。研究发现，生理状态下，雌激素和雄激素均参与肺细胞结构与生理功能形成，如雌激素参与肺血管舒张反应，睾酮可促进肺组织生长等[18]。肺癌将导致肺功能失调，从而造成男性患者血清性激素水平显著下降，对于男性肺结节良性患者来说，该类病灶不会对性激素水平造成较大影响，因此患者血清性激素水平下降并不明显。

本研究中采用99mTc-MIBI亲肿瘤显像对男性肺结节良恶性进行诊断，结果发现其假阳性率偏高，从而造成特异性下降，该结果与赵义刚等学者[19]研究结果保持一致。分析原因可能是因为外伤、感染及炎症等良性改变均能够导致99mTc-MIBI大量积聚，从而形成阳性表现。与男性健康人群相比，ADAM-9 和性激素等指标在男性肺结节恶性患者中差异十分显著，因此可明显提升指标诊断阳性率，但某些微小病灶无法被99mTc-MIBI亲肿瘤显像检测出来，主要是因为SPECT分辨率不足，导致患者出现假阴性表现，而99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测能够有效弥补该不足之处，因此，99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测用于男性肺结节良恶性诊断，其阳性预测值、阴性预测值、准确性和灵敏性均显著优于99mTc-MIBI亲肿瘤显像或ADAM-9和性激素检测诊断方法，差异具有统计学意义(Plt;0.05)。

综上所述，99mTc-MIBI亲肿瘤显像联合ADAM-9、性激素检测在男性肺结节患者良恶性诊断中具有重要临床价值，其准确性与灵敏性均十分理想。因受到研究对象数量及来源限制，本研究尚存在一定不足，有待进一步扩大样本容量和进行地区差异研究。

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Sensitivityandspecificityof99mTc-MIBIimagingcombinedwithADAM-9,sexhormoneindiagnosisofbenignandmalignantpulmonarynodulesofmales

JINCai-xia,LIUMing-xia,YUANYou-fa,WANGQing-sheng,ZHANGJin-shu
RadiologyDepartment,ChinesePeople’sLiberationArmyNO. 305Hospital,Beijing100017,China

ObjectiveTo explore the sensitivity and specificity of99mTc-MIBI imaging combined with disintegrin and metalloproteinase-9 (ADAM-9) and sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males.Methods78 male patients who were detected pulmonary nodules by computed tomography (CT) in our hospital from December 2014 to December 2016 were selected as research objects. 46 patients of malignant pulmonary nodules was the malignant group, 32 patients of benign pulmonary nodules was the benign group, and 40 cases of male healthy as the control group. The ADAM-9 mRNA expression in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), expression of ADAM-9 protein in BALF and serum, and serum sexual hormone level were compared in the three groups. The positive predictive value, negative predictive value, accuracy, specificity and sensitivity of99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9, sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males were analyzed.ResultsThe expression of ADAM-9 mRNA in BALF and ADAM-9 protein in BALF and serum in the malignant group were significantly higher than those in the control group, and the benign group were significantly lower than the control group (Plt;0.05). The levels of male hormone, estradiol and flavone in the malignant group were significantly lower than those in the control group and the benign group (Plt;0.05). The positive predictive value, negative predictive value, accuracy and sensitivity of99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9, sex hormone in diagnosis of benign and malignant pulmonary nodules of males were significantly better than the diagnosis of99mTc-MIBI imaging or ADAM-9 and sex hormone detection (Plt;0.05).Conclusion99mTc-MIBI imaging combined with ADAM-9 and sex hormone detection has great clinical significance in identifying pulmonary nodules of males. It’s accuracy, sensitive and specify.

99mTc-MIBI; disintegrin and metalloproteinase-9; sex hormone; pulmonary nodules; diagnosis; specificity; sensitivity

10.3969/j.issn.1009-6663.2017.12.036

100017 北京，中国人民解放军第三〇五医院 1.放射科 2.检验科

刘明霞，Email：youyo_775@163.com

2017-04-26]