高效液相色谱法测定左旋甲状腺素钠片的含量及溶出度

常海莹

（河南省新乡市食品药品检验所，河南 新乡 453000）

高效液相色谱法测定左旋甲状腺素钠片的含量及溶出度

常海莹

（河南省新乡市食品药品检验所，河南 新乡 453000）

目的 建立测定左旋甲状腺素钠片含量的高效液相色谱（HPLC）法，并比较2种片剂的含量及溶出度。方法 用HPLC法测定2种钠片中的左旋甲状腺素钠含量，并按照《中国药典》的测定方法测定2种左旋甲状腺素钠片的溶出度。色谱柱为Hypersil BDS C18柱(150 mm × 4.6 mm， 5 m)，柱温为 25℃，流动相为甲醇 －水 －磷酸（600∶400∶1），检测波长为 225 nm，流速为 1.5 mL ／min。结果 2 种左旋甲状腺素钠片的含量占标示量的百分率分别为101.39%和99.32%；2种片剂溶出50%及63.2%所需的时间和 m值比较，均有显著性差异（P＜0.05）。结论 HPLC法是测定左旋甲状腺素钠片的有效方法，2种左旋甲状腺素钠片含量无明显差异，但溶出度差异明显。

左旋甲状腺素钠；高效液相色谱法；含量；溶出度

甲状腺素是人体内调节机体代谢的重要内源性激素，包括甲状腺素（T4）和三碘甲状腺素（T3），其合成与分泌受下丘脑－垂体－甲状腺控制，参与调节机体代谢，并在生长发育过程、中枢神经系统中扮演重要角色[1]。人体内甲状腺素分泌及血循环水平是恒定的，含量异常时会导致甲状腺功能亢进或减退[2]，引起一系列的疾病，进而对患者生命质量造成恶劣影响。左旋甲状腺素钠是一种人工合成的甲状腺素左旋异构体钠盐，属甲状腺激素类药物，适用于治疗各种原因造成的甲状腺功能异常疾病[3]。目前，我国对左旋甲状腺素钠片含量及溶出度测定的研究较少。为保证该药物的疗效及安全性，本研究中建立了测定左旋甲状腺素钠片的溶出度及含量的高效液相色谱（HPLC）法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters高效液相色谱系统（包括Waters 2695型高效液相色谱仪，600型低压梯度泵，Waters 2487型紫外检测器，717型自动进样器，美国Waters公司）；ZRS－8型智能溶出实验仪(深圳市凯铭杰仪器设备有限公司)。

1.2 试药

试验品A为左旋甲状腺素钠片（商品名优甲乐，Merck kGaA公司，进口药品注册证号 H20140052）；试验品B为左旋甲状腺素钠片（商品名尤仙，常州康普药业有限公司，国药准字H20030502）；左旋甲状腺素钠对照品（美国新百利药业有限公司，批号为ITR301B）；甲醇（HPLC级，江苏淮阴精细化工研究所）；水为重蒸馏水，其他药品均为市售分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil BDS C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；柱温：25℃；流动相：甲醇－水－磷酸（600∶400∶1）；流速：1.5 mL ／min；检测波长：225 nm。在选定的色谱条件下，左旋甲状腺素钠与片剂所用辅料杂质分离良好，保留时间约为6.3 min。色谱图见图1。

2.2 溶液制备

参照2005年版《中国药典(二部)》[4]，取试验品A和B各20片，用磷酸盐缓冲液作为溶剂，转速为100 r／min，80 min后取溶液10 mL过滤，留取滤液作为供试品溶液。取经60℃减压干燥4 h的左旋甲状腺素钠对照品适量，用 0.02 mol／L 氢氧化钠 －甲醇（1 ∶1）溶液溶解后稀释成每1 mL含20 μg的溶液，即得对照品溶液。

图1 左旋甲状腺素钠高效液相色谱图

2.3 含量测定方法学考察

标准曲线制备：取左旋甲状腺素钠对照品适量，精密称定，用 0.02 mol／L 氢氧化钠 －甲醇（1 ∶1）溶液溶解后，用流动相定量稀释成 4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 μg ／mL的标准工作液，精密量取50 μL进样测定，记录色谱图，并用最小二乘法对峰面积作标准曲线，得线性回归方程。线性回归方程为 A＝228.97 C＋61 012（A为峰面积，C 为质量浓度），相关系数 r＝0.999 6(n＝5)。结果表明，左旋甲状腺素钠质量浓度在 4.0 ～ 6.0 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

回收率及精密度试验：取对照品适量，分别溶解并稀释成 1 mL 中含 4.0，5.0，6.0 μg 的工作液，进样测定，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。

表1 2种左旋甲状腺素钠片回收率及精密度比较（n＝3）

重复性试验：取同批号样品，依法制备供试品溶液，连续5次，测定含量。结果的 RSD为 1.95%（n＝5），表明方法重复性良好。

2.4 含量测定

取左旋甲状腺素钠片试验品20片，充分研磨后，取与各片剂标示量 100 μg相当的粉末，置 50 mL容量瓶中，加入 0.02 mol／L 氢氧化钠 －甲醇（1 ∶1）溶液25 mL，超声溶解后再加入上述溶液至50 mL，摇匀，离心，取上清液，测定含量。结果试验品A与试验品B含量占标示量百分率分别为101.39%和99.32%。

2.5 溶出度测定

精密吸取供试品溶液及对照品溶液各200 μL，分别进样测定，记录色谱图，计算溶出度。试验品A与试验品B的溶出曲线见图2，溶出参数见表2。经检验得2种左旋甲状腺素钠片 T50，Td，m值均有显著性差异（P ＜0.05，n＝15）。

图2 2种左旋甲状腺素钠片溶出曲线

表2 2种左旋甲状腺素钠片的溶出参数()

表2 2种左旋甲状腺素钠片的溶出参数()

注：T50及 Td为溶出50%和63.2%所需时间。

溶出参数T50（min）Td（min）m试验品A 26.31 ± 2.80 52.73 ± 7.21 0.76 ± 0.05试验品B 10.22 ± 3.61 15.85 ± 5.66 1.34 ± 0.23 t值13.640 15.583 9.544 P＜ 0.05＜ 0.05＜ 0.05

3 讨论

左旋甲状腺素钠又名四碘甲状腺原氨酸钠（L－T4），该药以 L－络氨酸为原料，其合成工艺复杂且条件较为苛刻[5－7]，使得左旋甲状腺素钠片总合成回收率较低，生产成本较高。又因该药治疗指数窄、给药规格小，故建立有效的方法精确测定左旋甲状腺素钠片的含量及溶出度，对于临床用药的有效性及安全性都有非常重要的意义。

左旋甲状腺素钠中含有苯环，且具有脂溶性[8]，故在建立HPLC法测定该药含量时，应采用反相柱进行分离。本研究中选择C18柱进行试验，具有出峰快的优点。以往的研究中，有学者选择流动相作为溶剂来提取左旋甲状腺素[9－11]，但其在流动相中总溶解度较低，最终导致回收率低。同时，流动相酸碱度对主峰的出峰时间、峰形均有影响[12]。本研究中选用氢氧化钠－甲醇溶液作为溶剂，并加入磷酸，调节流动相pH至弱酸性，能使各种成分更好地分离，这是由于左旋甲状腺素分子结构中含有氨基基团，酸性条件下可使钠片的主要成分高选择性地被保留[13]。本研究中所建立的测定方法的回收率及精密度均符合要求，也提示所选取的溶剂更适合对左旋甲状腺素钠片的含量测定。

本研究中拟订的溶出度检验方法从溶出参数（包括溶出仪器方法、溶出介质、溶出提及、转速等）、分析方法、限度规定等几方面进行了综合考虑，启用了分析性能更优越的整体化色谱柱。结果表明，2种左旋甲状腺素钠片溶出度有显著性差异，这可能与2种左旋甲状腺素钠片生产工艺及采用辅料不同有关。溶出度是生物利用度的重要影响因素[14]，2种左旋甲状腺素钠片的溶出度不同必然会导致二者生物利用度的差异，进而导致2种药品临床疗效的差异，但其机制仍需进一步探明。

本研究中拟订的色谱条件中，流速为1.5 mL／min，也是经过多次尝试后选取的最佳流速。流速太小，左旋甲状腺素钠出峰时间长，无法快速分离各物质；流速过大，色谱柱反压过大，不能正常分析样品，1.5 mL／min的流速在色谱柱可承受压力的范围内最大限度地缩短了梯度洗脱时间，并保证了分离效果。检测溶出度时，选取进样量为200 μL，这是由于我国药典规定，测定左旋甲状腺素钠片溶出度采用小杯法[15]，使得溶出液浓度极低，故进样量选择也较小。左旋甲状腺素钠片在225 nm波长处有最大吸收峰，因而选择检测波长为225 nm。

综上所述，HPLC法测定左旋甲状腺素钠片含量的方法准确、专业性强，溶出度测定方法简便、准确，为控制药品质量提供了良好的测定方法。

[1]曹 敏，罗婉莹.左旋甲状腺素钠片治疗原发性甲状腺功能减退症合并垂体增生患者的效果[J].中国药物经济学，2017，12（6）：90 － 92.

[2]李喜莲.左甲状腺素片对妊娠期亚临床甲状腺功能减退的疗效观察[J].中国综合临床，2013，29（10）：1104 －1107.

[3]Collier JW，Shah RB，Gupta A，et al.Influence of Formulation and Processing Factors on Stability of Levothyroxine sodium Pentahydrate[J].Aaps Pharmscitech，2010，11(2)：818 － 825.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京：化学工业出版社，2005：73.

[5]王 炎，董永瑞，唐海燕，等.左旋甲状腺素片治疗妊娠合并甲状腺功能减退的疗效[J].中国医药指南，2013，11（10）：507 －508.

[6]张文雯，郑树娜，罗 放，等.高效液相色谱法监控左旋甲状腺素钠生产中的偶联反应[J].化学试剂，2011，33（10）：945 －947.

[7]印其山，蒋伯康，毛子奇，等.L－甲状腺素的合成[J].化学世界，2001，42（1）：29 － 33.

[8]周瑞军.应用左旋甲状腺素治疗原发性甲状腺功能减退的效果分析[J].当代医药论丛，2015，13（3）：143 － 145.

[9]Collier JW，Shah RB，Bryant AR，et al.Development and application of a validated HPLC method for the analysis of dissolution samples of levothyroxine sodium drug products[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analusis，2011，54(3)：433 － 438.

[10]Volpato N，Silva R，Brito A，et al.Multiple level C in vitro ／in vivo correlation of dissolution profiles of two L－thyroxine tables with pharmacokinetics data obtained from patients reacted for hypothyrodism[J].Eur J Pharm，2004，21(5)：655 － 660.

[11]伍杰雄，任 斌，唐 蕾.RP－HPLC法检测左旋甲状腺素钠片剂含量及溶出度[J].中山医科大学学报，2001，22（3）：238 －240.

[12]孙传良.应用反相高效液相法检测左旋甲状腺素钠片含量及溶出度的研究[J].现代泌尿外科杂志，2007，20（3）：191 －193.

[13]袁 野，杨涌杰，曲圣涛，等.儿童及青少年对原发性甲状腺功能减退导致垂体增生的诊断与治疗[J].中国临床神经外科杂志，2014，19（2）：107 － 109.

[14]王 荣，贾正平，谢景文，等.高效液相色谱手性流动相法拆分甲状腺素对映体[J].分析化学，2001，29（4）：406.

[15]陈镇生.左旋甲状腺素钠片的体内药动学、生物利用度研究和体外溶出实验指导原则[J].中国药学杂志，2001，36(6）：425－426.

Content and Dissolution Determination of Levothyroxine Sodium Tablets by HPLC

Chang Haiying
（Xinxiang Institute of Food and Drug Control，Xinxiang，Henan，China 453000）

Objective To establish an HPLC method for content and dissolution determination of Levothyroxine Sodium Tablets.M ethods The content of levothyroxine sodium in two kinds of sodium tablets was determined by HPLC，and the dissolution of two kinds of Levothyroxine Sodium Tablets was determined according to the determination method of Chinese Pharmacopoeia.The chromatographic column was Hypersil BDS C18column（150 mm ×4.6 mm，5 μm），the column temperature was 25 ℃，the mobile phase consisted of methanol － water － phosphoric acid （600 ∶400 ∶1），the detection wavelength was 225 nm，and the flow rate was 1.5 mL ／min.Results The percentages of the contents of the two kinds of Levothyroxine Sodium Tablets were 101.39%and 99.32% ，respectively.The time and m value of 50%and 63.2%dissolution of two tablets showed significant difference （P ＜ 0.05）.Conclusion HPLC is the effective method for the determination of Levothyroxine Sodium Tablets.There is no significant difference in the content of two kinds of Levothyroxine Sodium Tablets，but the dissolution rate is obviously different.

levothyroxine sodium；HPLC；content；dissolution

R927.2；R977.1＋4

A

1006－4931(2017)22－0028－03

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.22.009

常海莹（1983－），女，大学本科，主管药师，研究方向为药物分析（药品检验）以及药品检验标准的制订，（电子信箱）48974473＠ qq.com。

2017－07－16)