化学发光法与POCT检测降钙素原的方法比较及临床应用

李结周

(澄迈县人民医院检验科，澄迈571900)

化学发光法与POCT检测降钙素原的方法比较及临床应用

李结周

(澄迈县人民医院检验科，澄迈571900)

1975年，Moya等[1]应用放射性氨基酸在鸡后腮腺发现降钙素(Calcitonin,CT)的合成来自于分子量为13 000(CT分子量为:3 500)的前体物质(降钙素原)，鼠研究中发现CT位于PCT(Procalcitonin)编码序列的60～91，且PCT两侧有N端和羧端[2]，人类PCT作为一种无激素活性的糖蛋白由11号染色体降钙素Ⅰ基因(CALC-Ⅰ)编码(1～57为N残端，60～91为降钙素，96～116为降钙蛋白)，通过选择性剪接(编码1～4外显子)生成mRNA，转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网翻译成降钙素原前体，继而在高尔基复合体及分泌囊中经一系列水解酶作用裂解形成[3，4]，其在人体内的半衰期约20～24 h，稳定性好，人血清PCT含量极低，约2.5 pg/ml(运用高效液相色谱分析)，在一些非甲状腺损伤如由细菌感染引起的全身炎症反应、败血症或脓毒性休克、慢性肾衰竭等患者血清PCT及其组分均显著升高。

目前我科考虑将原有的POCT(Point of care testing)荧光免疫分析法替换为更先进，更准确的化学发光法。故进行两种方法临床结果比对试验，以确认试剂性能是否满足实验室要求。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1比对试验样本来源 收集2016年10月8日至2016年11月30日，本院降钙素原标本共376例，同时收集临床标本以及临床信息，按照样本的临床情况将已经确诊为中度炎症反应或者脓毒症的患者分为阳性组(>0.5 ng/ml)，有轻度炎症反应或者局部感染的患者划分为可疑组(0.1～0.5 ng/ml)，将无炎症反应的患者划分为阴性组(<0.1 ng/ml)，进行两种不同方法的研究比对。

1.1.2日间重现性试验标本来源 收集1.1.1中的阳性组(>0.5 ng/ml)、可疑组(0.5～0.1 ng/ml)、阴性组(<0.1 ng/ml)的标本各1例分别分装成5管，每管分装200 μl，置于-20℃冰箱中保存。连续5 d进行日间重现性检测。

1.1.3试剂与仪器 深圳市新产业MAGLUMI 4000以及配套的PCT试剂，方法为化学发光免疫分析法。另外比对的厂家为，瑞莱生物公司ReLIA SSJ-2以及配套的PCT试剂。

1.2方法

1.2.1准确性检测 收集临床标本以及临床信息，根据1.1.1的分组，采用两种不同的方法学进行检测，并记录结果。

1.2.2日间重现性 取1.2.1中的阳性组、可疑组、阴性组标本各1例，连续检测5 d，每天连续检测5次，计算相对标准偏差(RSD%)，并做记录，计算。

2 结果

两种方法的准确性比较结果见表1。新产业检测阳性组、可疑组、阴性组样本的RSD%分别为0.11%、0.16%、0.21%,瑞莱生物检测阳性组、可疑组、阴性组样本的RSD%分别为0.18%、0.27%、0.57%。在准确度以及日间重现性方面进行方法的研究比较，结果显示，化学发光法比POCT方法更加准确，重现性更好。但是从使用的领域方面来说，POCT法有着仪器小巧，便携，操作简单，非专业人士能够快速上手等优势。

3 讨论

降钙素原(PCT)目前已经成为临床上全身性细菌感染诊断过程中必不可少的检测指标之一，在美国、德国等发达国家中，已经将PCT检测列入脓毒症以及ICU发热患者的临床诊断指南中。

表1化学发光法与POCT准确性对比

Tab.1Comparisonofaccuracybetweenchemilunninesc-enceandPOCT

GroupsAmountofsamplesNewindustryAccuracyRuilaiAccuracyPositivegroup(>0.5ng/ml)14314097.9%12587.4%Suspiciousgroup(0.1～0.5ng/ml)555294.6%4581.8%Negativegroup(<0.1ng/ml)17816793.8%12067.4%

PCT浓度和炎症严重程度呈正相关，并随着炎症的控制和病情的缓解而降低至正常水平，因而PCT可作为判断病情发展、疗效及预后可靠指标。低浓度的PCT血清水平提示治疗有效或预后良好，而高水平PCT的细菌脓毒症患者生存率较低。PCT在感染或非感染性休克中显著升高，且PCT与脓毒症患者器官衰竭的严重性呈正相关，是检测脓毒症患者器官功能损伤良好的指标。PCT浓度的升高可警示医生需对患者加强治疗或考虑更换其他药物治疗。如果脓毒症患者使用抗生素24 h PCT下降30%以上，72 h下降50%以上，提示感染得到控制或抗生素治疗有效，此类患者会有更好的预后。机体受到细菌感染时，白细胞计数等传统检验项目，预后的相关性差，而PCT水平可对细菌感染的预后进行评估。若PCT水平持续升高或者一直维持在比较高的水平，常常提示预后不良；若PCT水平快速降低至正常水平，常提示预后良好。

目前很多的文献[5-8]，都表明了不同浓度间，PCT有着不同的诊断建议:当PCT质量浓度<0.1 ng/ml时，基本没有细菌感染的可能性，强烈建议不使用抗生素；当PCT质量浓度为0.1～0.25 ng/ml时，细菌感染的可能性不大，不建议使用抗生素；当PCT质量浓度为0.25～0.5 ng/ml时，可能存在需要治疗的细菌感染，建议使用抗生素；当PCT质量浓度>0.5 ng/ml时，很可能存在需要治疗的细菌感染，强烈建议使用抗生素。

本研究通过对化学发光法与POCT两种方法进行比较、验证，以筛选出目前最为合适检验科的方法。从上述的准确性以及重现性结果来看，化学发光免疫分析法无论在准确性还是在重现性方面，都高于荧光免疫分析法。但是瑞莱生物公司的产品属于POCT，具有仪器小巧、便携、操作简单、非专业人士能够快速上手等优势，而新产业的化学发光免疫分析法在结果的准确度、重现性以及成本更加优越。两个不同方法学的设备都各具优势。在实验室选择中，应根据情况进行选择测定。

[1] Moya F,Nieto A,Jl RC.Calcitonin biosynthesis:evidence for a precursor [J].Europ J Biochem,1975,55(2):407-413.

[2] Burns DM,Birnbaum RS,Roos BA.A neuroendocrine peptide derived from the amino-terminal half of rat procalcitonin [J].Mol Endocrinol(Baltimore,Md),1989,3(1):140-147.

[3] Russwurm S,Wiederhold M,Oberhoffer M,etal.Molecular aspects and natural source of procalcitonin [J].Clin Chem Laborat Med,1999,37(8):789-797.

[4] 张代民.降钙素原的测定与临床应用进展 [J].实用医药杂志,2007,24(5):619-622.

[5] 降钙素原急诊临床应用专家共识组.降钙素原(PCT)急诊临床应用的专家共识 [J].中华急诊医学杂志,2012,21(9):944-951.

[6] 中华医学会重症医学分会.中国严重脓毒症/脓毒性休克治疗指南(2014) [J].中华内科杂志,2015,54(6):365-367.

[7] 杨 滨,康 梅.降钙素原在细菌感染性疾病诊断及治疗中的应用 [J].现代预防医学,2009,36(3):596-597.

[8] 郑立华,鲁辛辛.降钙素原的临床研究进展 [J].中国实验诊断学,2007,11(1):137-139.

[收稿2017-03-10 修回2017-06-08]

(编辑 许四平 刘格格)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.09.017

李结周(1966年-)，男，副主任技师，检验科主任，主要从事检验科日常检测方法的研究，E-mail：jyk67607315@163.com

R446.11

A

1000-484X(2017)09-1359-02