叶酸片的溶出度及其含量测定

慕杨娜于珊珊谷丽艳

叶酸片的溶出度及其含量测定

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目的建立叶酸片的溶出度及其含量测定的方法。方法采用紫外-可见分光光度法测定叶酸片的溶出度，同时使用高效液相色谱（HPLC）法测定其含量。结果溶出度：精密度 RSD=0.94%，稳定性 RSD=0.80%，紫外分光光度回收率为99.85±0.76，溶出量均在75%以上。含量：精密度RSD=0.59%，稳定性RSD=0.53%，重复性RSD=0.66%，准确度RSD=0.91%，HPLC法回收率为99.32±0.87。结论采用紫外-可见分光光度法与HPLC法测定叶酸片的溶出度及其含量简便、准确可靠，可用于控制该制剂的质量。

叶酸片；含量测定；溶出度

叶酸片的主成分为叶酸（Folic acid），由蝶啶、对氨基苯甲酸和L-谷氨酸组成，是B族维生素的一种，亦称为维生素 BC或维生素 M。叶酸是人体在利用糖分和氨基酸时的必要物质，也是机体细胞生长和繁殖的必须物质[1]。叶酸片在临床上常用于治疗叶酸缺乏及叶酸缺乏导致的巨幼红细胞贫血[2]，慢性溶血性贫血所致的叶酸缺乏等，哺乳期、妊娠期妇女预防给药[3]，本实验主要针对叶酸片制剂的溶出度和含量测定方法进行研究。

1 材料与仪器

1.1 材料样品：叶酸片，批号：20080401、20080402、20080403，市售样品：北京北大药业有限公司，批号：S080304。对照品：中国生物制品检定所提供，批号：100074-20041；试剂为分析纯。

1.2 仪器智能药物溶出仪：天津创兴电子设备制造有限公司；紫外分光光度计：日立机械有限公司；高效液相色谱仪：大连依利特有限公司。

2 方法与结果

2.1 溶出度

2.1.1 检测方法与测定波长的选择采用分光光度法测定溶出度。称取叶酸适量，加磷酸盐溶液（pH 6.8）溶液制成约含4 μg/ml的溶液，在200～400 nm范围扫描。结果显示：在281 nm处本品有最大吸收，因此选择281 nm作为检测波长，空白辅料无干扰。

2.1.2 线性范围试验精密称取叶酸对照品5.01 mg，置于250 ml量瓶，加适量磷酸盐溶液（pH 6.8）溶解并稀释至刻度。分别取上述溶液 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml置 10 ml量瓶中，加磷酸盐溶液（pH 6.8），溶液稀释至刻度，摇匀，参照分光光度法，在281 nm的波长处测定吸收度，计算回归方程，绘制标准曲线。结果：回归方程为：y=0.0617x+0.0043，R=0.9996，本品在1.002～16.032 μg/ml的浓度范围内呈良好的线性关系。

2.1.3 溶出液稳定性溶出度测定的样品溶液室温下放置8 h，在不同的时间点测定其吸收度。结果显示：本品在磷酸盐溶液（pH 6.8）中8 h内基本稳定，RSD为0.80%。

2.1.4 精密度试验不同的实验人员 3人，分别取溶出度测定的样品溶液，按照溶出度测定法连续测定6次，结果溶出液精密度RSD为0.94%。

2.1.5 准确度试验精密称取叶酸原料8、10、12 mg各3份，分别置10 ml容量瓶中，加适量磷酸盐溶液（pH 6.8）稀释至刻度，精密量4 ml，置于1000 ml量瓶，加入辅料（按处方量配制），加适量磷酸盐溶液（pH 6.8）稀释至刻度，按照溶出度测定方法，配置对照品溶液，取上述 3种对照品溶液参照分光光度法（《中国药典》2005版二部附录IV A），在281 nm波长处测定吸收度，计算回收率。结果：回收率在98.91%～100.12%之间，回收率符合规定，方法准确可靠，误差在允许的范围内。

2.1.6 自制样品和市售样品溶出曲线及溶出度对比取自制3批样品和市售样品各6片，参照溶出度测定法分别在不同的时间点测定溶出量，以时间为横坐标，溶出量为纵坐标，绘制3批样品和市售样品的溶出度曲线，见表 1。结果显示：自制样品与市售样品溶出模式相似，30 min时主药的溶出量基本一致。

2.1.7 溶出度测定方法取本品，采用溶出度测定法（《中国药典》2010版附录Ⅹ C 第三法）[4]，使用磷酸盐缓冲液（pH 6.8）100 ml为溶出介质，转速为每分钟70转，依法操作，经30 min，取溶液10 ml，滤过。取续滤液，采用紫外-可见分光光度法（中国药典2005版二部附录Ⅳ A），在281 nm处测定吸光度。取适量叶酸对照品，精密称定，使用磷酸盐缓冲液稀释4 μg/ml的溶液[5]，同法测定吸光度，计算每片的溶出量[6]，见表2。结果显示：本品3批样品和市售样品的溶出量均在 75%以上，现参考叶酸片国家标准的溶出度限度和本品的实测结果，暂定溶出限度为标示量的75%。

表1 自制样品与市售样品对比溶出试验结果(%)

表2 3批样品和市售样品溶出度试验结果

2.2 含量测定[7-9]

2.2.1 溶液的制备取叶酸50片，精密称定，研细，精密称取（相当于叶酸5 mg），置于25 ml量瓶，加0.5%氨溶液15 ml，置于热水浴中加热20 min，时时振摇溶解叶酸，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取5 mg叶酸对照品，精密称定，置于25 ml量瓶，加0.5%氨溶液约15 ml，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为对照品溶液。

2.2.2 系统适应性试验色谱条件：填充剂为十八烷基键合硅胶；流动相：磷酸二氢钾6.8 g+0.1 mol/L氢氧化钾70 ml，加水稀释850 ml，调节pH值至6.3±0.1，加甲醇80 ml，用水稀释至1000 ml。检测波长：254 nm。取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，理论塔板数按叶酸计算均不低于3000。

2.2.3 辅料干扰试验取除去主药的空白辅料配成空白辅料溶液，滤过，取续滤液10 μl，注入色谱仪。结果显示：空白辅料对测定无干扰，见图1。

图1 HPLC图谱

2.2.4 线性范围考察精密称取叶酸对照品10.01 mg，置25 ml的量瓶中，加入0.5%的氨溶液约15 ml，用水稀释并刻度，分别精密量取上述溶液1、3、5、7、9 ml，置10 ml量瓶中，加入0.5%的氨溶液约6 ml，用水稀释并刻度，精密量取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，绘制标准曲线。结果：回归方程为y=1E+0.7x－100 295，R=0.9990，进样浓度在0.040 04～0.3604 mg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验不同的实验人员 3人，分别取含量测定项下的供试品溶液，精密量取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，连续测定 6次。结果：精密度符合规定，RSD为0.59%。

2.2.6 稳定性试验取含量测定项下的供试品溶液，分别在不同的时间点，精密量取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：在8 h内稳定，RSD为0.53%。

2.2.7 重复性试验取本品 6份，按含量测定项下方法制成供试品溶液，精密量取10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算标示量。结果：重复性符合规定，RSD为0.66%。

2.2.8 准确度试验精密称取适量叶酸原料（叶酸40 mg、50 mg、60 mg）3份，分别置于10 ml量瓶，加0.5%氨溶液6 ml，加水稀释至刻度，分别精密量取1 ml置25 ml量瓶中，加入处方量的相应辅料，参照含量测定方法操作，以测得量与加入量计算回收率。结果：本品的回收率在98.22%～101.49%之间，RSD为0.91%。

2.2.9 样品含量测定试验精密量取供试品溶液及对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按照外标法以峰面积计算，即得。三批样品含量测定结果分别为 98.61%、100.96%、99.94%，市售样品含量测定结果为97.68%。

3 结论

在本研究含量测定实验中曾采用水作为叶酸的溶剂，结果发现，有关物质测定时保留时间在2～3 min有较大的溶剂峰出现，对叶酸的测定存在干扰，为此经实验摸索确定采用流动相为叶酸的溶解试剂。实验还发现，叶酸在流动相溶液中不稳定，放置2天后杂质增加，为此测定时应在10 h内完成。

[1] 谢东磊,李荣,谭津,等.利用钛胶高效液相色谱法测定食品中叶酸含量[J].食品科技,2012(1):250-253.

[2] 李枝端.5例有配伍禁忌或者不良相互作用处方的分析[J].中国社区医师,2012,28(24):10-11.

[3] 江明性.新编实用药物学[M].北京:科学出版社,2005:594-690.

[4] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典(2010版一部)[S].北京:化学工业出版社,2010:157-158.

[5] 中华人民共和国国家食品药品监督管理总局.国家食品药品监督管理局国家药品标准修订件[J].中国药品标准,2014,6(3):212-213.

[6] 柳世萍.HPLC法测定叶酸片溶出度[J].河北化工,2012,35(4):31-32.

[7] 高桂花,盛筱,李雪冰.高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸含量[J].济宁医学院学报,2010,33(4):238-240.

[8] 叶立,田义梅.紫外分光光度法测定叶酸片的含量[J].天津药学,2000,12(3):63-64.

[9] 范文莉,刘会艳.HPLC法测定叶酸片含量的测量不确定度评定[J].中医药导报,2010,7(26):48-49.

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.08.012

1辽宁中医药大学附属第二医院，辽宁沈阳 110034

2辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110847

谷丽艳，E-mail：1458228050@qq.com