瘦素及瘦素受体与子宫内膜异位症关系研究

唐利飞 刘敏杰

瘦素及瘦素受体与子宫内膜异位症关系研究

唐利飞 刘敏杰

目的探讨瘦素与瘦素受体在子宫内膜异位组织中的表达。方法选取32例子宫内膜异位症患者作为内异组，并选取同期行输卵管结扎术的32例妇女作为对照组，分别采取两组患者的血清、腹腔液（PF）和腹膜组织（PI）。内异组患者切除子宫内膜异位囊肿，切取囊肿组织（OE），并吸取囊肿液（EF）。采用Western blot法测定PI和OE瘦素及瘦素受体表达水平。采用ELISA法测定血清、PF及EF中的瘦素水平。结果两组PI中瘦素和瘦素受体表达水平比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），而内异组OE中瘦素和瘦素受体表达水平均较PI中瘦素及瘦素受体表达水平明显增高（均P＜0.05）。两组血清及PF中瘦素水平比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。但内异组EF中瘦素水平明显高于血清及PF中瘦素水平，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。内异组患者OE与EF、PI与PF、OE与PF的瘦素表达水平均呈正相关（均P＜0.05）。OE中瘦素与瘦素受体、EF瘦素与OE瘦素受体、PI中瘦素与瘦素受体、PF瘦素与PI瘦素受体均呈正相关（均P＜0.05），而PF瘦素与OE瘦素受体表达水平无相关性（P＞0.05）。结论瘦素通过与瘦素受体之间的相互调节作用在子宫内膜异位囊肿的发病过程中扮演了非常重要的角色。

子宫内膜异位症瘦素瘦素受体

瘦素是一种脂肪细胞衍生蛋白，其主要生理功能是调节机体对食物的摄取和能量的消耗[1]。有研究表明瘦素在炎症、血管再生以及生殖功能等生理进程中起到了重要的内分泌调节作用[2]。瘦素受体引导瘦素通过JAK2/STAT3和ERK信号通路刺激子宫内膜异位上皮细胞的生长，从而诱发子宫内膜异位症[3]。瘦素与炎症、血管再生之间的关系，加上它有可能在中枢和性腺水平上影响生殖功能，因此它与子宫内膜异位症之间的关系得到了广泛的研究，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象选取2013年7月至2015年3月在本院诊治的32例子宫内膜异位症患者作为内异组，并选取同期在本院行输卵管结扎术的妇女32例作为对照组。内异组年龄23～51（30.6±1.5）岁，BMI 20～30（21.6± 1.5）kg/m2；对照组年龄21～49（30.2±1.8）岁，BMI 20～30（20.9±1.3）kg/m2。两组患者年龄、BMI等一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。内异组行腹腔镜手术者30例，另2例患者由于盆腔粘连严重，出血多转行开腹手术；对照组均行腹腔镜手术。内异组纳入标准：（1）卵巢单侧或者双侧子宫内膜异位囊肿，（2）正在准备开腹或腹腔镜腹腔深部子宫内膜异位手术患者；对照组纳入标准：（1）正在准备开腹或腹腔镜结扎手术患者，（2）无任何子宫内膜异位症并且无卵巢病变。本研究获得医院伦理委员会批准和患者知情同意。

1.2 样本的准备及手术方法两组受检者在麻醉前经静脉抽取5ml血液于抗凝管中，静置30min后，3 000r/min离心10min，取上清液，-70℃保存。两组行腹腔镜手术者采用气管插管静脉复合麻醉，头低脚高15°～20°，膀胱截石位，安放举宫器，脐部10mm Trocar穿刺，置入镜头，常规取2、3、4穿刺孔[4]，首先吸取盆腔子宫直肠陷凹处的腹腔液（PF）（均-70℃保存）备用；留取侧盆壁、无粘连、肉眼观察无病变的腹膜组织（PI），用10%中性甲醛溶液固定。内异组患者在腹腔镜下剥除异位囊肿，分离周围粘连，卵巢表面电凝或直接剪开卵巢接近囊肿壁，分离卵巢与囊肿，提取囊肿组织（OE），必要时可穿刺提取囊肿液（EF）（-70℃保存）。行开腹手术患者选用腰硬联合麻醉，直视盆腔，提取相应组织及组织液。

1.3 Western blot法测定组织瘦素及瘦素受体表达水平将大约400mg PI样本或OE样本加入到400μl 1% NP-40裂解液中（上海江莱生物科技有限公司）混匀，加入一定量的蛋白酶抑制剂后于4℃，10 000r/min下离心5min，测定上清液中的蛋白浓度。量取含蛋白20μg的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝胶中进行垂直电泳测定，然后转移至硝化纤维素膜上进行转印。硝化纤维素膜分别与一抗为鼠抗人瘦素多克隆抗体（BS-0109R）和兔抗人Ob-R单克隆抗体（BS-0108M）（武汉博奥森公司）于4℃下过夜孵育(1∶200)。蛋白表达采用β-actin作为标准对照，所有条带经化学发光分析仪可视化后记录。

1.4 血清等瘦素水平的测定提前20min从冰箱中取出血清、PF及EF标本，平衡至室温，采用ELISA法（试剂盒为武汉伊莱瑞特生物科技有限公司生产）测定血清、PF及EF中的瘦素水平。

1.5 统计学处理采用SPSS 18.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；两变量间相关性分析采用Pearson相关。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者PI和内异组OE瘦素与瘦素受体表达水平的比较Western blot法检测所得蛋白表达水平电泳图见图1。将蛋白表达转换成相对灰度值进行比较发现，两组患者PI中瘦素和瘦素受体表达水平的差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。而内异组OE中瘦素和瘦素受体表达水平分别为（30.23±2.28）和（12.88± 2.63）ng/ml，均较PI中瘦素及瘦素受体表达水平明显增高，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

图1 两组患者PI瘦素与瘦素受体蛋白表达电泳图

表1 两组患者PI中瘦素与瘦素受体表达水平的比较（ng/ml）

2.2 两组患者血清与PF中瘦素水平的比较两组患者血清及PF中瘦素水平比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。内异组EF中瘦素水平为（75.19± 0.33）ng/ml，明显高于血清和PF中瘦素水平，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

表2 两组患者血清与PF中瘦素水平的比较（ng/ml）

2.3 内异组患者组织间瘦素与瘦素及瘦素与瘦素受体水平的相关性分析内异组患者OE与EF、PI与PF、OE与PF的瘦素表达水平均呈正相关（均P＜0.05）。OE中瘦素与瘦素受体、EF瘦素与OE瘦素受体、PI中瘦素与瘦素受体、PF瘦素与PI瘦素受体均呈正相关（均P＜0.05），而PF瘦素与OE瘦素受体表达水平无相关性（P＞0.05），见表3。

表3 内异组患者组织间瘦素与瘦素及瘦素与瘦素受体的相关性分析

3 讨论

瘦素是由肥胖基因表达的主要存在于脂肪组织中的一种激素，因其在基础代谢、食物摄入及生殖功能等方面的作用而被认识并研究，随后研究发现其具有血管再生、促进炎症以及免疫调节的作用[3-5]。近年来研究者发现其与子宫内膜异位症的发病存在着一定的联系。

近期有研究发现，子宫内膜异位症患者子宫内膜中瘦素与瘦素受体的表达水平要明显高于正常的子宫内膜，同时这项研究发现用瘦素来治疗子宫内膜异位症时，能够促进瘦素受体转录RNA的表达，表明在子宫内膜异位症患者瘦素系统中涉及到自分泌和旁分泌两种模式[6]。这也就意味着子宫内膜异位症所属组织可能既是瘦素的来源，又是瘦素潜在的靶点。

大量研究报道了子宫内膜异位症患者血清与PF中的瘦素水平，但是结果却存在着一定的矛盾性，有些研究认为与健康人员相比，子宫内膜异位症患者血清与PF中的瘦素水平并无什么变化[7-8]，但有些研究却认为子宫内膜异位症患者的瘦素水平比健康人员要高[9-10]。此外，关于PF瘦素水平与子宫内膜异位症严重程度之间关联性也存有争议，一些研究结果呈正相关[11]，但另一些研究结果却呈负相关[12]。本研究中，ELISA法测定结果显示两组受检者血清以及PF中的瘦素水平无明显差异，但EF中的瘦素水平明显高于血清以及PF中的水平，差异均有统计学意义。本研究结果表明子宫内膜异位症患者严重程度是有关联的，可能与瘦素水平呈正相关。

内异组患者OE与EF、PI与PF、OE与PF的瘦素表达水平呈正相关。OE中瘦素与瘦素受体、EF瘦素与OE瘦素受体、PI中瘦素与瘦素受体、PF瘦素与PI瘦素受体均呈正相关，这些相关性结果表明瘦素受体在OE或PI中的表达可能是EF和PF中瘦素水平所引导的。综上所述，瘦素通过与瘦素受体之间的相互调节作用在子宫内膜异位囊肿的发病过程中扮演了重要的角色。

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Expression of leptin and leptin receptor in endometriosis

TANG Lifei,LIU Minjie.Department of Gynaecology and Obstetrics, Ningbo Yinzhou People's Hospital,Ningbo 315040,China

ObjectiveTo investigate the expression of leptin and leptin receptor in endometriosis.MethodsThirty-two patients with endometriosis(EM group)and 32 women undergoing tubal ligation(control group)were enrolled in the study.The serum,peritoneal fluid(PF),peritoneal biopsy(PI)samples were collected in both groups,the endometriosis cyst(OE)and aspiration of endometriosis cysts(EF)taken duting endometriosis resection were collected in EM group.The expression levels of leptin and leptin receptor in PI and OE were measured by Western blot,the levels of leptin in serum,PF and EF were measured by human leptin ELISA kit.ResultsThe levels of leptin and leptin receptor in PI were not statistically significant between two groups(all P＞0.05).In EM group the expression of leptin and leptin receptor in OE were significantly higher than that in PI(all P＜0.05).There were no significant difference in serum and PF leptin levels between the two groups(all P＞0.05).But in EM group the levels of leptin in EF were significantly higher than those in serum and PF(all P＜0.01).In EM group there were positive correlations in expression levles of leptin and leptin receptor between OE and EF,PI and PF,OE and PF(all P＜0.05),there were positive correlations between leptin and leptin receptor in OE,between leptin in EF and leptin receptor in OE,between leptin and leptin receptor in PI,between leptin in PF and leptin receptor in PI(all P＜0.05),while there was no correlation between leptin in PF and leptin receptor in OE(P＞0.05).ConclusionThe interaction of leptin and leptin receptor may play an important role in the pathogenesis of endometriosis.

EndometriosisLeptinLeptin receptor

2016-01-06）

（本文编辑：陈丽）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.13.2016-31

315040宁波市鄞州人民医院妇产科

唐利飞，E-mail：15084994@qq.com