瘦素及瘦素受体与子宫内膜异位症关系分析

杨丽玲 陈俊 张翔珍

瘦素是一种脂肪细胞衍生蛋白，其主要生理功能是调节食物的摄取和能量的消耗［1］。有研究表明瘦素在炎症、血管再生以及生殖功能等生理进程中起到了重要的内分泌调节作用［2］。子宫内膜异位症是指在子宫肌层或者子宫腔被覆内膜以外部位生长的子宫内膜组织，经过生长浸润后可出现出血、结节以及腹腔包块等，常导致患者不孕不育，从而造成常人难以忍受的疼痛［3］。本资料选取子宫内膜异位症患者作为内异组以及同期行输卵管结扎术的妇女作为对照组，通过比较两组间相关组织内瘦素及瘦素受体的表达情况，探讨瘦素在子宫内膜异位症中的作用。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2014年8月至2016年12月在本院诊治的32例子宫内膜异位症患者作为内异组，并选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术的32例患者作为对照组。内异组年龄23～51岁，平均年龄（30.6±1.5）岁。身体质量指数（BMI）20～30kg/m2，平均（21.6±1.5）kg/m2。对照组年龄 21～49岁，平均年龄（30.2±1.8）岁。BMI 20～30kg/m2，平均（20.9±1.3）kg/m2。两组年龄、BMI等一般资料比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。内异组纳入标准：（1）正在准备开腹手术或腹腔镜手术患者。（2）卵巢单侧或者双侧子宫内膜异位囊肿。对照组纳入标准：（1）正在准备小型开腹或者腹腔镜输卵管结扎术。（2）无任何子宫内膜异位症并且无卵巢病变。本项目获得医院伦理委员会批准和患者知情同意。

1.2 样本的准备 两组患者在麻醉前经静脉抽取5ml血液于抗凝管中，静置30min后，离心，分离血清保存。并在手术开始时吸取盆腔子宫直肠陷凹处的腹腔液（PF）。对照组患者切取正常子宫组织。内异组患者需吸取子宫内膜异位囊肿液（EF）、切除子宫内膜异位囊肿以及腹膜活检组织（PI）。所有样品在取用后立即-70℃保存，以备后用。

1.3 Western blot测定组织瘦素及瘦素受体 将大约400mg卵巢或PI样本加入至400μl 1% NP-40裂解液中（上海江莱生物科技有限公司）混匀，加入一定量的蛋白酶抑制剂后于4℃，10000r/min离心5min，测定上清液中的蛋白浓度。量取含蛋白20μg的上清液，加入至8%SDS聚丙烯酰胺凝胶中进行垂直电泳测定，然后转移至硝化纤维素膜上进行转印。硝化纤维素膜分别与一抗为鼠抗人瘦素多克隆抗体（BS-0109R）和兔抗人Ob-R单克隆抗体（BS-0108M）（武汉博奥森公司）于4℃下过夜孵育（1∶200）。蛋白表达采用β-actin作为标准对照，所有条带经化学发光分析仪可视化后记录。

1.4 瘦素水平的测定 采用人瘦素酶联免疫吸附测定试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技有限公司）测定血清、PF以及子宫内膜异位EF中的瘦素水平。

1.5 统计学方法 采用SPSS 18.0统计学软件。计量资料以（±s）表示，两组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验；两变量间相关关系的分析采用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢组织与PI瘦素与瘦素受体的表达 见表1和图1。典型电泳条带见图2。

表1 卵巢与PI瘦素及瘦素受体表达水平的比较（Western blot灰度值）

2.2 各样本之间瘦素水平的比较 见图3。

2.3 内异组患者组织间瘦素与瘦素及瘦素与瘦素受体的相关性分析 内异组瘦素与瘦素表达水平的相关性：分别对内异组患者的OE与EF、PI与PF、OE与PF瘦素间的表达水平进行相关性分析，显示子宫内膜异位症患者的OE与EF、PI与PF的瘦素表达水平呈现强相关性（P＜0.05），而OE与PF间无明显相关性（P＞0.05）。内异组瘦素与瘦素受体表达水平的相关性：分别对内异组患者OE中瘦素与瘦素受体、EF瘦素与OE瘦素受体、PI中瘦素与瘦素受体、PF瘦素与PI瘦素受体以及PF瘦素与OE瘦素受体的表达水平进行相关性分析，显示OE中瘦素与瘦素受体、EF瘦素与OE瘦素受体、PI中瘦素与瘦素受体及PF瘦素与PI瘦素受体的表达水平均呈强相关性（P＜0.05）。

图 1 卵巢组织与PI瘦素及瘦素受体表达水平（★P＜0．05）

图 2 卵巢组织与PI瘦素及瘦素免疫印迹结果

图3 两组患者血清与PF中瘦素水平比较（A）。内异组患者血清、PF以及子宫内膜异位EF中瘦素水平的比较（B）

3 讨论

近年来子宫内膜异位症患者有明显的上升趋势，约10%～15%的育龄妇女患有此病［4］。有研究表明，瘦素受体引导瘦素通过JAK2/STAT3和ERK信号通路刺激子宫内膜异位上皮细胞的生长，从而诱发子宫内膜异位症［5］。瘦素与炎症、血管再生之间的关系，加上其有可能在中枢和性腺水平上影响生殖功能，因此其与子宫内膜异位症之间的关系得到广泛的研究。近期有研究发现，在子宫内膜异位症患者子宫内膜中瘦素与瘦素受体的表达水平显著高于正常的子宫内膜，同时该项研究发现用瘦素治疗子宫内膜异位症时，能够促进瘦素受体转录RNA的表达，表明在子宫内膜异位症患者瘦素系统中涉及到自分泌和旁分泌两种模式［6］。说明子宫内膜异位症所属组织可能既是瘦素的来源，又是瘦素潜在的靶点。结合实验结果作者推测，子宫内膜异位症患者卵巢组织较正常卵巢组织更为敏感，而且其生产瘦素的能力可能远强于正常的卵巢组织。本资料结果发现，子宫内膜异位症患者卵巢组织中瘦素的表达水平略低于对照组（P=0.16）。但是瘦素受体在正常卵巢组织中与子宫内膜异位症患者卵巢组织中的表达差异明显（P=0.003）。

很多研究人员报道了子宫内膜异位症患者血清与PF中的瘦素水平，但是结果却存在着一定的矛盾性，有些学者认为与健康人员对照子宫内膜异位症患者血清与PF中的瘦素水平并无显著变化［7-8］，但有些结果却认为比健康人员的瘦素水平要高［9-10］。此外，关于PF瘦素水平与子宫内膜异位症严重程度之间关联性也存有争议，一些研究结果为正相关，但另一些结果却表明呈负相关性。本资料中，酶联免疫吸附剂测定结果显示两组人员血清以及PF中的瘦素水平无明显差异，但是子宫内膜异位EF中的瘦素水平明显高于血清以及PF中的水平，且差异有统计学意义（P＜0.001）。表明子宫内膜异位症患者严重程度是有关联的，可能与瘦素水平是呈正相关的。

内异组患者子宫内膜异位OE和PI中瘦素与瘦素受体表达水平具有较强的相关性。PF中瘦素水平与PI中瘦素以及瘦素受体表达之间具有强烈的相关性。子宫内膜异位EF中瘦素水平与子宫内膜异位OE中瘦素以及瘦素受体表达之间具有强烈的相关性。这些显著性相关的结果表明，瘦素受体在子宫内膜异位OE或者PI中的表达可能是子宫内膜异位EF和PF中瘦素水平所引导的。

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［3］ De Ziegler D, Borghese B, Chapron C． Endometriosis and infertility: pathophysiology and management． Lancet, 2010, 376(9742): 730-738．

［4］ 曹泽毅．中华妇产科学(临床版)．北京:人民卫生出版社,2010:130-135．

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［6］ Choi YS,Oh HK,Choi JH．Expression of adiponectin,leptin,and their receptors in ovarian endometrioma．Fertil Steril,2013, 100(1):135-141．

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［8］ Tao Y,Zhang Q,Huang W,et al．The peritoneal leptin,MCP-1 and TNF-alpha in the pathogenesis of endometriosis-associated infertility．Am J Reprod Immunol,2011,65(4):403-406．

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［10］ Wu MH, Huang MF, Chang FM,et al． Leptin on peritoneal macrophages of patients with endometriosis． Am J Reprod Immunol, 2010,63(3):214-221．