胃泰方对功能性消化不良肝郁脾虚型大鼠一氧化氮、神经降压素及胃窦5-羟色胺表达的影响※

陈 婕 张津玮 杨 岩 胡建功 李慧臻 杜 潇 王天麟 孔祥茹

(天津中医药大学第二附属医院消化内科，天津 300150)

实 验 研 究

胃泰方对功能性消化不良肝郁脾虚型大鼠一氧化氮、神经降压素及胃窦5-羟色胺表达的影响※

陈 婕 张津玮 杨 岩 胡建功1李慧臻 杜 潇2王天麟2孔祥茹2

(天津中医药大学第二附属医院消化内科，天津 300150)

目的 通过观察胃泰方、吗丁啉对功能性消化不良(FD)肝郁脾虚型大鼠一氧化氮(NO)、神经降压素(NT)及胃窦5-羟色胺(5-HT)表达的影响，从脑—肠轴途径探讨胃泰方治疗FD的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为4组，即空白组、模型对照组、吗丁啉组、胃泰组，每组10只。以32 mm蝴蝶夹夹鼠尾后1/3处，30 min后放开，每日1次；于每周二、四、六禁食，余日给足量饲料，持续4周。造模成功后第2 d起，胃泰方组大鼠以0.9 375 g/mL胃泰方浓缩液按2 mL/kg灌胃，吗丁啉组以0.5 mg/mL吗丁啉混悬液10 mL/kg灌胃，空白组、模型对照组以0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃，日1次，连续28 d。检测血清中NO、NT及胃窦5-HT的表达。结果 与空白组比较，模型对照组NO含量减少，NT含量增加，胃窦5-HT阳性细胞数及灰度值明显降低(P<0.05)；与模型对照组比较，胃泰组、吗丁啉组NO含量增加，NT含量降低，胃窦5-HT阳性细胞数及灰度值明显增加，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 胃泰方能纠正NO、NT及胃窦5-HT的异常表达，其作用与吗丁啉基本相当，这可能是胃泰方治疗FD的关键所在。

消化不良；中药疗法;病理生理学;血清素；代谢;一氧化氮

功能性消化不良(functional dyspepsia，FD)属功能性胃肠病之一，在其发病过程中不仅胃肠道功能失调起着重要作用，而且环境、心理、社会等因素对其发病也有一定的影响，各种致病因素相互作用，共同导致FD的发生发展。FD具有典型的临床症状，以发病时腹部有明显和持续性的上腹部胀满疼痛、嗳气、恶心、呕吐、厌食、纳差等，且病程较长，长达12周以上而未有器质性疾病的临床综合征[1]。在众多消化系统疾病中，FD在临床中较多发生，流行病学研究发现，消化不良患者在普通人群中患病率为19%～41%，在我国发病也占有很大比例，且发病率逐年上升，现阶段我国发病率为20%～30%[2]。随着对FD的深入研究，众多专家学者开始重视精神心理因素[3]，而生理-心理-社会模式以及脑—肠轴理论备受重视，成为治疗FD疾病的重要手段之一。由于脑—肠轴理论近年来在功能性疾病方面有着明显的指导作用，本实验则通过研究其作用机制，从而更好地指导临床。

1 材料与方法

1.1 动物 健康雄性SD大鼠40只，体质量(250±10)g，购自北京军事医学科学院动物实验中心，动物合格证编号：SCXK(京)2009-0017，置于标准实验条件下饲养，室温(24±2)℃，湿度(55±5)%。

1.2 药物 胃泰方由黄芩9 g、半夏12 g、黄连3 g、干姜9 g、人参(党参)9 g、炙甘草9 g、大枣4 g、郁金10 g、青皮10 g、陈皮10 g组成，购自天津中医药大学第二附属医院中药房，按成人体质量60 kg临床用药量的10倍，由天津中医药大学第二附属医院煎药室袋煎，取全部煎煮液，于天津南开医院药理研究室用旋转蒸发器浓缩胃泰方水煎剂，终得浓缩液浓度为0.9 375 g/mL。多潘立酮(吗丁啉)，西安杨森制药有限公司，国药准字H10910003，产品批号：140423350，按成人60 kg体质量临床用药量的10倍，由蒸馏水配制成浓度为0.5 mg/mL的混悬液备用。

1.3 造模及分组 将40只SD大鼠随机分为4组，即空白组、模型对照组、吗丁啉组、胃泰组，每组10只。以32 mm蝴蝶夹夹鼠尾后1/3处，30 min后放开，每日1次；于每周二、四、六禁食，余日给足量饲料，持续4周，成功复制肝郁脾虚型FD大鼠模型。造模成功后第2 d起，胃泰组以0.9 375 g/mL胃泰方浓缩液灌胃，吗丁啉组以0.5 mg/mL吗丁啉混悬液10 mL/kg灌胃，空白组、模型对照组以0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃，日1次，连续28 d。在进行胃肠动力测定的实验过程中，由于实验要求，需要用碳素墨水灌胃。然而在观察胃窦组织形态学变化时，由于碳素墨水灌胃，从而导致某些SD大鼠的黏膜污染，以至于无法观察，同时碳墨灌胃也会影响一氧化氮(NO)、神经降压素(NT)的检测，故最终每组有6只SD大鼠进行本实验。

1.4 观测指标与方法

1.4.1 NO、NT 实验第28 d禁食12 h后，经腹腔注射10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，收集于空白的采血管中，静置30 min，4 ℃ 3 000 r/min离心，20 min，取上清，为血清，供NO、NT检测。

1.4.2 胃窦组织形态学变化 各组大鼠在造模结束后及给药干预结束后第2 d，用30%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉后，采用中性甲醛，以内固定的方法固定全胃，梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、切片、苏木精-伊红(HE)染色，光镜下观察胃病理学变化。在光学显微镜下，每张切片在400倍镜下随机取3个视野，用Image Pro Plus 5.0.2图像分析软件测定各组切片中抗体呈阳性反应的细胞数、累计光密度(integrated optical density,IOD)进行半定量分析，IOD值代表组织染色强度，IOD值越大，代表染色越强。灰度值可反映5-羟色胺(5-HT)蛋白阳性神经元染色深浅，灰度值越高，染色越浅，5-HT蛋白含量越低，表达越少。

2 结 果

2.1 各组给药后大鼠NO含量比较 见表1。

表1 各组给药后大鼠NO含量比较

与空白组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

由表1可见，给药干预28 d后，与空白组比较，模型对照组NO含量减少，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，胃泰方组、吗丁啉组NO含量增加，差异有统计学意义(P<0.05)；吗丁啉组与胃泰方组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组给药后NT含量比较 见表2。

表2 各组给药后NT含量比较

与空白组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

由表2可见，给药干预28 d后，与空白组比较，模型对照组NT含量增加，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，胃泰方组、吗丁啉组NT含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)；吗丁啉组与胃泰方组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组大鼠胃窦5-HT阳性细胞数比较 见表3。

表3 各组大鼠胃窦5-HT阳性细胞数比较 个/视野

与空白组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

由表3可见，与空白组比较，模型对照组胃窦5-HT阳性细胞数降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，胃泰方组、吗丁啉组胃窦5-HT阳性细胞数增加，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 各组大鼠胃窦5-HT免疫组织化学染色结果 空白组模型胃窦明显，可见胞浆呈棕褐色的5-HT阳性细胞，染色较强。与空白组比较，模型对照组胃窦胞浆呈棕褐色的5-HT阳性细胞较少，染色较弱，与模型对照组比较，吗丁啉组及胃泰方组胃窦胞浆呈棕褐色的5-HT阳性细胞无明显差别，染色相近。见图1。

图1 各组大鼠胃窦5-HT免疫组织化学染色(×400)A、空白组；B、模型对照组；C、吗丁啉组；4、胃泰方组

2.5 各组大鼠胃窦5-HT表达(灰度值)比较 见表4。

表4 各组大鼠胃窦5-HT表达(灰度值)比较

与空白组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05

由表4可见，与空白组比较，模型对照组胃窦5-HT灰度值降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，胃泰方组、吗丁啉组胃窦5-HT灰度值增加，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

FD在中医学中没有明确的病名。根据病因、病机、病变所及脏腑和病性的不同，可归属于“胃脘痛”“痞满”“嘈杂”等范。许多古典医籍对其皆有记载，如《素问·至真要大论》曰“诸呕吐酸，皆属于热”[4]。FD虽然病位在胃、肠，但其发病与五脏相关，其中与肝、脾尤为密切。张照兰教授在对FD论述中提出“饮食水谷入肠胃，赖肝木之疏泄，肝气机调畅，木气得疏，则脾胃调和[5]。正如《临证指南医案》曰“脾宜升则健，胃宜降则和”[6]。二者一脏一腑，受纳腐熟运化水谷，同为人之“仓廪之官”。一旦出现肝木过旺或脾土虚弱，克伐脾土太过，则“肝木乘土”或“土虚木乘”的病理变化随即发生，如《医学求是》曰“木郁不达，风木冲击而贼脾土，则痛于脐下”[7]。《素问·举痛论》曰“思则心有所存，神有所归，正气留而不行，故气结矣”[4]。即是指情志失调，气机不利导致痞满。孙志杰等[8]认为FD病机以脾虚为本，食积、气滞、痰湿为标，本虚标实，虚实夹杂。气机不畅为本病病机特点，肝郁脾虚是基本病机。苏干伸等[9]认为脾虚气滞是FD的病机关键，气机不畅是病机特点，而饮食和情绪是主要诱发因素。近年中华中医药学会消化专业委员会将FD分为脾虚气滞、肝胃不和、饮食停滞、痰湿中阻、脾胃湿热、寒热错杂、胃阴不足、脾胃虚寒8种类型[10]。

FD的病机与肝、脾密切相关，肝郁脾虚为胃肠功能紊乱的病理本质，用叶天士的“肝为起病之源，胃为传病之所”来概括FD的发病部位，认为FD病变部位在胃，与肝密切相关，并强调此处胃当理解为脾胃之功能，肝、脾、胃同居中焦，三者功能失调可致气机壅滞，升降失职，出现水谷不腐之痞满证。

FD是指具有胃和十二指肠功能紊乱引起的症状，经检查排除引起这些症状的器质性疾病的一组临床综合征[11]。FD的发生与胃肠运动功能型障碍、内脏敏感性异常、胃酸分泌的改变、幽门螺杆菌(Hp)感染、胃肠激素的改变、心理障碍及脑—肠轴功能障碍等具有相关性。脑—肠轴理论近年来在功能性疾病方面有着明显的指导作用，其作用机制则是将认知和情感中枢与神经内分泌、肠神经系统和免疫系统相联系的双向交通通路，其一方面通过刺激和将内在信息通过肠神经链与高级神经中枢相连接影响胃肠感觉、动力和分泌等，另一方面通过亲内脏作用，同时又反过来作用于中枢的痛感、情绪和行为，即胃肠症状对心理状态有反作用[11]。

半夏泻心汤出自张仲景所撰《伤寒论》，由半夏、干姜、黄芩、黄连、人参、大枣、炙甘草7味药组成。方中半夏、干姜为君，半夏辛散开结，兼和胃降逆，干姜味辛性温，合半夏行气以散痞结，二者合用，共达畅通气机、散结开痞之功；黄连、黄芩相须为辅，二者皆味苦性寒，具有清热燥湿之功，取其味苦趋下，以助胃气通降，又可兼制干姜、半夏之温燥；人参、甘草、大枣三者皆味甘性温，共为佐使，甘缓调中，扶正补虚，顾护胃气。《伤寒论》原文中此方本为少阳误下成痞或症见呕而肠鸣之心下痞所设，因其配伍精当，疗效显著，故后世广泛应用于各种消化道及其他疾病的治疗[12]。胃泰方为半夏泻心汤加青皮、陈皮、郁金而成，使其加强疏肝健脾的作用，切中FD肝郁脾虚的基本病机。

半夏泻心汤广泛应用于胃痞病患者，根据症状胃痞相当于现代医学的FD，虽然其疗效显著，但具体机制仍不明确。通过查阅文献，发现脑—肠轴在FD的发病中起到重要作用，且众学者散在的研究也表明半夏泻心汤对脑—肠轴相关脑肠肽具有一定的调节作用。张越等[13]发现半夏泻心汤可通过对胃泌素、血管活性肽的调节，抑制化疗后胃肠道反应。冯云霞等[14]发现半夏泻心汤及其类方调中颗粒可通过对一氧化氮合酶(NOS)、肠血管活血肽(VIP)及P物质(SP)含量的影响，进而调节气机升降和胃肠运动。李彩荣等[15]认为胃肠动力减弱、排空障碍等与胆囊收缩素(CCK)的升高相关，通过实验证实半夏泻心汤可通过降低CCK来达到治疗慢性胃炎的目的。李志强等[16]通过小鼠实验发现半夏泻心汤具有明显抗抑郁作用。

胃肠道黏膜嗜铬细胞(EC)可分泌5-HT，其在人体生理调控过程中具有调节胃肠道运动、情感认知、睡眠饮食等多种功能。其常存在于胃、十二指肠，在其分泌过程中，以旁分泌为主，约占其分泌总量的90%。NT可明显增强小肠的逆蠕动，然其总体来说则起着抑制胃肠蠕动的作用。NO可调节胃肠道容受性舒张功能，因此NO合成及释放减少，最终将导致FD患者早饱或餐后饱胀感。

本动物实验研究以FD大鼠为研究对象，在成功造模后，通过酶联免疫、免疫组化法等方法检测血清中NO、NT含量和胃窦组织5-HT的表达在胃泰方治疗前后变化，结果表明，胃泰方能使血清NO含量增加，NT含量降低，胃窦组织5-HT阳性细胞数及灰度值明显增加，其作用与吗丁啉基本相当，纠正异常的脑肠肽的作用可能是胃泰方治疗FD的关键所在。

[1] Lee KJ,Demarchi B,Demedts I,et al. A pilot study on duo-denal acid exposure and its relationship to symptoms in func-tional dyspepsia with prominentnausea[J].Am J Gastroen-terol,2004,99(9):1765-1773.

[2] 沈志祥,陈喜兰,谭诗云,等.消化系统疾病诊断与治疗学[M].北京:科学技术文献出版社,2004:166.

[3] 徐亮,陈剑群.功能性消化不良与精神心理因素关系的研究进展[J].徐州医学院学报,2010,30(6):418-420.

[4] 王冰.黄帝内经素问[M].北京:人民卫生出版社,2002:332.

[5] 安丽,曹国强,张照兰.张照兰教授治疗功能性消化不良临床经验[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(24):278-281.

[6] 叶天士.临证指南医案[M].北京:人民卫生出版社,2006:200.

[7] 吴达.医学求是[M].南京:江苏科学技术出版社,1984:197.

[8] 孙占杰.加味四君子汤治疗动力障碍型功能性消化不良60例[J].山西中医，2009,25(1):16．

[9] 苏干伸.中医辨证治疗功能性消化不良40例疗效观察[J].内蒙古中医药,2010,29(14):11-12．

[10] 李乾构,单兆伟,周学文,等.中医消化病诊疗指南[M].北京：中国中医药出版社，2006:30-31.

[11] Ford AC. Eradicating Helicobacter pylori in functional dyspepsia[J].Gastroenterology， 2012， 142(7):1613-1614.

[12] 张胜,吴春福,陈立江,等.半夏泻心汤药理研究最新进展[J].中国中药杂志,2001,26(7):437-439.

[13] 张越,杨焱,张文风.半夏泻心汤对化疗后家兔胃泌素和血管活性肽的影响[J].上海中医药杂志,2012,46(12):77-78.

[14] 冯云霞,时昭红,张介眉,等. 调中颗粒对反流性食管炎大鼠食管黏膜脑肠肽和一氧化氮合酶的影响[J].中国实验方剂学杂志, 2010,16(15): 154-157.

[15] 李彩荣,樊世英,邓秀莲,等.半夏泻心汤对慢性胃炎胆囊收缩素的影响[J].河北中医,2010,32(11):1659-1667.

[16] 李志强,常红娟.半夏泻心汤抗抑郁作用实验研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(4):280-282.

(本文编辑：董军杰)

Effects of Weitai prescription on expression of nitric oxide, neurodetensin and antrum 5-HT in functional dyspepsia rats with liver depression and spleen deficiency type

CHENJie,ZHANGJinwei,YANGYan,etal.

DepartmentofGastroenterology,theSecondHospitalAffiliatedtoTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300150

Objective To observe the effects of Weitai prescription and domperidone on expression of nitric oxide (NO), neurodetensin (NT) and antrum 5-hydroxytryptamine (5-HT) in functional dyspepsia (FD) rats with liver depression and spleen deficiency type, and explore the mechanism of Weitai prescription on treatment of FD from brain - gut axis way. Methods SD rats were randomly divided into blank group, model group, domperidone group and Weitai group,10 rats in each group. The 1/3 after rat tali were folder by 32 mm butterfly clamps for 30 min, one time per day. The rats were fasting at Tuesday, Thursday, Saturday, given enough feed in the other days for 4 weeks. The rats in Weitai group were treated with 0.9 375 g/mL Weitai prescription concentrate by 2 mL/kg gavage after 2ndd successful modeling. The domperidone group was treated with 0.5 mg/mL domperidone suspension by 10 mL/kg gavage, blank control group and model group were treat with 0.9% sodium chloride injection by 10 mL/kg gavage, once a day for 28 d. The expression of NO, NT and antrum 5-HT were detected. Results Compared with the blank group, the NO content in the model group was decreased, the NT content was increased, and the number of antrum 5-HT positive cells and the gray value were significantly decreased (P<0.05).Compared with the model group, the NO content in Weitai group and domperidone group were increased,the NT content were decreased, and the number of antrum 5-HT positive cells and the gray value were significantly increased,with statistical differences(P<0.05). Conclusion Weitai prescription can correct the abnormal expression of NO, NT and antrum 5-HT, its actions are similar to that of domperidone, which may be the key of Weitai prescription on treatment of FD.

Dyspepsia; TCM therapy; Pathophysiology; Serotonin; Metabolism; Nitric oxide

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.07.026

※ 项目来源：天津市中医药管理局中医中西医结合科研课题(编号：13099)

1 天津中医药大学第二附属医院病理科，天津 300150

2 天津中医药大学2013级硕士研究生，天津 300193

陈婕(1970—)，女，主任医师，博士研究生在读，硕士研究生导师。研究方向：脾、胃、肝、胆疾病的中西医诊疗。

R-332;R345.44

A

1002-2619(2017)07-1064-05

2016-11-03)