激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响

牛世莉　丁宣玮　徐方旭　王升厚

摘要：研究了不同激发子菌株对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷含量的影响。结果表明：就虫草素而言，JF4对虫草素积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大，为162.22mg/L，与对照组相比增加了3.85倍，并且JF4对虫草素的诱导作用是4种激发子中作用最强的；就腺苷而言，JF2对腺苷积累的诱导作用在发酵培养40d时达到最大，为29.16mg/L，与对照组相比增加了4.13倍。由此可见，激发子对蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的积累因激发子种类及添加后培养时间的不同而产生不同的影响。

关键词：蛹虫草；激发子；虫草素；腺苷

蛹虫草[Cordyeeps militaris（L.）Link.J，隶属于高等真菌的子囊菌亚门麦角菌科虫草属。现代医学研究表明，蛹虫草中的有效药物成分包括虫草素、虫草酸、核苷类、虫草多糖、麦角甾醇、环肽类、多球壳菌素、有机硒、SOD酶和微量元素。激发子可以诱导植物细胞产生和积累植保素，能快速、专一和选择性地诱导植物多种特定基因的表达，尤其是活化特定的次生代谢途径，积累次生代谢产物。本研究以蛹虫草菌株FB-0为试材，探讨了不同激发菌对蛹虫草液体菌种中虫草素及腺苷含量的影响，旨在为生产中筛选合适的激发菌及培养时间提供一定的理论依据。

1材料与方法

1.1材料

蛹虫草菌株FB-0，由沈阳师范大学特种菌业研究所菌种资源库提供；激发子菌株JF₁、JF₂、JF₃和JF₄均由污染的蛹虫草液体菌种培养液中分离获得；液体培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、水1000mL。

1.2方法

吸取等量的JF1-JF4液体菌种分别加入装有液体培养基中进行液体培养，各接种3瓶；培养7d后，将JF₁～JF₄及其混合菌液分别接入蛹虫草液体发酵液中进行发酵培养；在发酵培养第10、20、30、40、50d后分别取出，采用高效液相色谱法对其发酵产物中的虫草素和腺苷含量进行测定。色谱条件为：色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150mm，5um）；流动相：甲醇（25%）-水（75%）；分析时长：10min；柱温25℃；流速：1.0mL/min；紫外检测波长260nm；进样量20ul。

1.3仪器与设备

LX-B75L型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（合肥华泰医疗设备有限公司）、UV-5100型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）、ESJ182-4电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）、Agilent 1100高效液相色谱仪、GKC数显智能型恒温水浴锅、5404高速冷冻离心机（德国EppendoffAG公司）。

2结果与分析

2.1虫草素及腺苷标准曲线

从图1和图2可以看出，虫草素和腺苷的标准曲线线性回归方程分别为v=56292x+53.609和y=45671x+16.476，相关系数分别为R2=0.9988和R。=0.9917，线性关系良好，可以进行虫草素和腺苷样品的定量计算。

2.2不同激发菌对虫草素和腺苷含量的影响

图3和图4表明，发酵前加入激发菌能有效改变蛹虫草发酵液中虫草素和腺苷的含量。与对照组相比，发酵培养40d后，JF₁、JF₂和JF₄均能不同程度地提高虫草素的含量，且差异达到显著水平（p2