BANCR在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

王素敏，王浩联，何倩倩，李东颖，张金平，李建生

郑州大学第一附属医院消化内科，河南 郑州 450052

BANCR在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

王素敏，王浩联，何倩倩，李东颖，张金平，李建生

郑州大学第一附属医院消化内科，河南 郑州 450052

目的 研究食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)患者癌组织中BANCR的表达及其与临床病理和预后的关系。方法 应用荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测BANCR在92例ESCC癌组织和癌旁组织中的表达,分析BANCR表达与临床病理特征和预后的关系。结果 BANCR 在67.4%(62/92)的ESCC患者癌组织中高表达，其相对表达量为2.046±0.160，癌旁组织相对表达量为0.447±0.694，差异有统计学意义(P<0.001)；BANCR的高表达与肿瘤的TNM分期(P=0.015)、肿瘤大小(P=0.022)、淋巴结转移(P=0.032)有关；与年龄、性别、肿瘤部位、远处转移等无关；BANCR高表达组无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)均较BANCR低表达组缩短(PFS，P=0.006；OS，P=0.040)。结论 BANCR在ESCC组织中高表达，BANCR的异常表达与肿留大小、淋巴结转移、TNM分期相关，BANCR表达水平越高，患者预后越差，提示其可能参与ESCC的进展及转移。

长链非编码RNA；BANCR；食管鳞状细胞癌；TNM分期；淋巴结转移；预后

长链非编码RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)是一类不编码蛋白质, 转录本长度超过200 nt的非编码RNA分子，以前认为其是转录过程中的副产物,其作用价值未得到研究人员重视[1]。目前越来越多研究表明，lncRNA通过调节转录、翻译、细胞分化、细胞周期、染色质修饰和核-细胞质转运等生物过程[2]，从而参与到疾病的发生、发展机制中。BNACR是位于9号染色体长度为693 bp的lncRNA，最先被发现于黑色素瘤中并调节其侵袭能力，相继证实BANCR参与视网膜母细胞瘤、肺癌、胃癌、肝癌和肠癌的发生和发展[5-8]。然而，BANCR在食管癌发生、发展中是否起到调控作用尚不明确，本试验旨在研究BANCR在92例食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者中的表达情况，并探讨其与ESCC临床病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 病例资料 选取郑州大学第一附属医院2010年2月-2011年4月行手术切除的92例ESCC癌组织，术前未经放疗、化疗及其他辅助治疗，术后经病理科证实；对照组选取同一患者的癌旁组织(距手术切缘至少3 cm)，术后病理检查未发现癌细胞。所有标本取下后, 立即放入液氮中后转至-80 ℃超低温冰箱保存备用。入选对象术后均电话随访，随访起点为病理确诊日期，末次随访时间为2016年4月30日，无失访病例。肿瘤分化程度依据Edmondson-Steiner分级标准来确定, 肿瘤分期按美国肿瘤研究联合委员会(American Joint Committee on Cancer, AJCC)2010发布的第七版分期系统的标准确定，同时收集各标本的临床病理资料，此研究经伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 试剂与仪器 RNA提取试剂TRIzol购自美国Invitrogen公司，RNA逆转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒由大连TaKaRa公司提供。荧光实时定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)试剂盒购自美国Roch公司。BANCR引物、β-actin引物用Premier 5.0软件设计并由上海英潍捷基生物工程有限公司合成。qRT-PCR引物序列如下： BANCR：(Forward)5′-ACAGGACTCCATGGCAAACG-3′；(Reverse)5′-ATGAAGAAAGCCTGGTGCAGT-3′； GAPDH：(Forward) 5′-AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3′； (Reverse) 5′-GACTCATGACCACAGTCCATGC-3′。

1.3 方法 采用TRLzol一步法抽提ESCC癌组织及癌旁组织的总RNA，紫外分光光度计检测RNA浓度，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。按照逆转录试剂盒说明书步骤合成cDNA产物，保存于-20 ℃备用。qRT-PCR按照SYBR Green说明书配制反应体系，反应条件：95 ℃预变性1 min，然后95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，共40个循环。根据公式2-ΔΔCt计算BANCR在ESCC组织中的相对表达量。

为了验证BANCR与ESCC临床病理特征是否相关，本试验根据ESCC癌组织BANCR表达水平的均值为临界值，将试验组分为高表达组和低表达组，并研究其表达水平与临床病理特征的关系。为了探讨BANCR异常表达与预后是否相关，本研究根据BANCR的表达高低将ESCC患者分为两组：BANCR高表达组(n=62)和BANCR低表达组(n=30)，并通过Kaplan-Meier生存分析来评估BANCR表达水平和患者总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)的相关性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。以上实验中每个样本组织均重复实验3次。采用χ2检验或者四格表Fisher 精确检验比较BANCR在各肿瘤组织和对应癌旁组织中的阳性率，并分析其与主要临床病理特征的关系；Kaplan-Meier生存分析法分析BANCR高表达和低表达ESCC患者的PFS和OS的差异。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BANCR在ESCC癌组织和癌旁组织中的表达差异 92例ESCC癌组织BANCR相对表达量为2.046±0.160，癌旁组织相对表达量为0.447±0.694，BANCR在ESCC患者癌组织较癌旁组织中高表达，差异有统计学意义(P<0.05，见图1)。

图1 ESCC癌组织与癌旁组织BANCR表达水平

Fig 1 The expressions of BANCR in ESCC tissues and adjacent non-tumor tissues

2.2 BANCR的表达与ESCC临床病理特征的相关性 BANCR异常表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及TNM分期有相关性(P<0.05)，与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、远处转移无相关性(P>0.05)(见表1)。

2.3 BANCR的表达与ESCC预后的关系 BANCR高表达组患者的PFS和OS较BANCR低表达组均明显缩短(PFS，P=0.006；OS，P=0.040)。BANCR高表达组患者中位PFS是13个月，而BANCR低表达组患者中位PFS是40个月。BANCR高表达组患者中位生存期为19个月，BANCR低表达组患者中位生存期为38个月(见图2、图3)。

表1 ESCC癌组织BANCR表达水平和ESCC临床病理特征的关系

Tab 1 The relationship between expression of BANCR and clinicopathologic characteristics in ESCC

临床特征例数BANCR表达低高P值年龄(岁)0.167 ≤60451233 >60471829性别0.175 男632340 女29722肿瘤部位0.174 上16610 中461036 下301416分化程度0.484 高1798 中43835 低311318肿瘤大小(cm)0.022 ≤4341618 >4581444淋巴结转移0.032 无441925 有481137远处转移0.217 M0712348 M121714TNM分期0.015 Ⅰ～Ⅱ331617 Ⅲ～Ⅳ591445

图2 PFS分析Fig 2 Analysis of progression free survival

图3 ESCC患者OS分析Fig 3 Analysis of OS in ESCC patients

3 讨论

食管癌是目前全球第八大恶性肿瘤，并且肿瘤相关病死率位居第六位[9]。根据组织学分类食管癌可分为两个主要类型：ESCC和腺癌。其中ESCC是食管癌的主要组织类型，虽然诊断和治疗有所提高，但是ESCC患者的5年生存率仍然很低[10]。在很大程度上，ESCC患者死亡的原因是远处病灶转移[11]。

早期认为lncRNA为基因组转录的“暗物质”，但近来研究表明lncRNA与肿瘤的发生发展和侵袭转移等生物学行为有密切的联系[12]。大量研究表明lncRNA参与表观遗传学、转录、翻译、小RNA生物学功能的调节，针对已知的lncRNA功能可以总结为信号、诱饵、引导、支架[13]。同时研究证实许多lncRNA可作为疾病发生、发展、复发及预后的新指标，如HULC、H19、MALAT1和HEIH[14]。探索lncRNAs的异常表达有利于更好地研究ESCC的发生分子机制并为其诊断和治疗提供新的潜在的分子靶点[15]。

通过本实验研究发现BANCR在ESCC组织中较癌旁组织表达高，提示BANCR可作为诊断ESCC的一个潜在指标，并且BANCR的异常表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期相关，与年龄、性别、肿瘤部位无关，提示BANCR与肿瘤的进展有关。此外，Kaplan-Meier生存分析发现，BANCR高表达组的PFS和OS较BANCR低表达组都明显缩短，提示BANCR的高表达可能与ESCC的预后不良有关，可作为ESCC患者预后情况的指标,为临床ESCC的诊断、进展及预后提供新的方法。目前研究发现多种lncRNA HOTAIR、H19等可通过诱导上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)参与肿瘤的转移过程[16]。EMT是指上皮细胞失去上皮表型转化为间质细胞的可逆过程，已被证明在肿瘤细胞转移播散的早期事件中起关键作用[23]。有研究报道， lncRNA结合到特定的蛋白伴侣并在调节他们结合蛋白的活性和定位中发挥重要作用，MALAT-1是核lncRNA，通过与SR蛋白相互作用和影响SR蛋白及其他的剪接因子在核散斑区域的分布增加转录组和蛋白质组的复杂性[15]。Wang等[17]发现肝癌细胞中的AOC4P表达可能通过与Vimentin蛋白结合、促进其降解从而抑制EMT过程。目前研究发现的参与调节EMT的信号通路主要包括转化生长因子(transforming growth factor,TGF-β)通路[18]、MEK-ERK通路[19]、Wnt /β-catenin 通路[20]，BANCR是否通过上述信号通路调节EMT仍有待进一步的研究。

综上所述，在ESCC组织中BANCR表达升高，且与肿瘤大小、淋巴结转移、TMN分期相关。提示BANCR参与ESCC的进展和转移进程，其有可能作为ESCC患者预后判断的生物标志物，但其可能作为ESCC诊断的标记物及其调控ESCC进展和转移的确切分子机制仍有待进一步研究。

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(责任编辑：马 军)

Clinical significance of BANCR expression in esophageal squamous cell carcinoma

WANG Sumin, WANG Haolian, HE Qianqian, LI Dongying, ZHANG Jinping, LI Jiansheng

Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China

Objective To explore the expression of BANCR in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and to analyze its clinical significance.Methods The expression of BANCR was examined by quantitative real-time-PCR in 92 ESCC tissues and adjacent non-tumor tissues.And its correlation with clinical pathology and prognosis was analyzed.Results BANCR was overexpressed significantly in ESCC tissues compared with adjacent non-tumor tissues (P<0.05). High expression of BANCR was associated with TNM stage (P=0.015), tumor size (P=0.022) and lymph node metastasis (P=0.032), but not associated with age, gender, tumor site and distant metastasis BANCR high expression group had significant shorter survival time than low BANCR expression group.Conclusion BANCR is highly expressed in ESCC tissues and its high expression is correlated with tumor size, lymph node metastasis and TNM stage. The expressionof BANCR is higher， the prognosis of ESCC patients is worse, it may be involved in the progression and metastasis of ESCC.

Long non-coding RNA; BARF-activated non-coding RNA; Esophageal squamous cell carcinoma; TNM stage; Lymph node metastasis; Prognosis

10.3969/j.issn.1006-5709.2017.05.013

王素敏，硕士研究生在读，研究方向:消化道肿瘤。 E-mail: 846101031@qq.com

李建生，主任医师，教授，博士生导师，研究方向：消化道肿瘤。E-mail: lijiansheng@medmail.com.cn

R735.1

A

1006-5709(2017)05-0531-03

2016-11-23