卵巢高分化黏液性癌患者中MMP—2、MMP—9、S100A14的表达

胡倩倩　严浩　李盛

[摘要]目的：探讨卵巢高分化黏液性癌（highly differentiated Ovarian mucinous carcinoma，HDOMC）患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表达水平及意义。方法：采用免疫组化法对40例正常卵巢组织、43例卵巢黏液性肿瘤（Ovarian mucinous tumor，OMT）、80例HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表达水平进行检测，并分析HDOMC患者中S100A14表达与MMP-2、MMP-9表达的相关性。结果：MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢组织、OMT、HDOMC患者中的表达水平呈递增趋势，且两两组间比较差异显著（P<0.05）。Spearman相关分析：HDOMC患者中S100A14表达与MMP-2、MMP-9表达水平两两呈正相关（P<0.05）。MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平与HDOMC患者手术-病理分期（FIGO）、CA-125水平有关（P<0.05）；与年龄、肿瘤直径、淋巴结转移无关（P>0.05）。结论：MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平升高与HDOMC发生、进展、早期转移具有显著相关性，早期联合筛查这些指标对HDOMC病情演变及治疗预后评估具有重要价值。

[关键词]黏液性癌；表达水平；联合筛查；病理分期；相关性

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是近年来临床最常见的一种女性生殖系统恶性肿瘤，其发病隐匿，在疾病早期可无明显症状，70%～80%患者发现时即己为晚期，死亡率极高。因此，近年来，临床一直在寻找对早期卵巢癌监测对其侵袭、转移具有重要预测价值的标志物。大量研究发现，MMPs在多种肿瘤组织中表达水平升高且与肿瘤侵袭、转移具有显著相关性。MMP2、MMPO是目前临床研究发现与肿瘤发生、发展关系最为密切的一组MMP成员；通过降低细胞外基质水平促进癌细胞浸润，导致恶性肿瘤发生早期转移。已有研究表明S100A14基因水平在多种肿瘤患者中呈现高表达状态，S100A14以p53依赖方式对肿瘤患者MMP-2表达水平进行上调，促进细胞侵袭，导致恶性肿瘤预后不良。本研究通过免疫组化法，探讨MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表达水平及其监测意义。现报道如下。

1.资料和方法

1.1临床资料

随机选择我院2010年7月至2014年8月收治的80例HDOMC患者，均经手术切除病理证实为HDOMC。纳入标准：病理类型为高分化黏液性癌；KPS评分>90分，预计生存时间>3个月；年龄25～76岁。入选患者平均（49.5±8.7）岁，FIGO分期：早期（Ⅰ～Ⅱ期）27例、晚期（Ⅲ～Ⅳ期）53例，术前均未采用过放化疗治疗，并排除合并其他恶性肿瘤者。选取同期40例因子宫肌瘤行子宫及附件全切的正常卵巢组织患者，43例OMT患者作为对照研究，年龄24-73岁，平均（47.8±8.6）岁。

1.2方法

S100A14兔多克隆抗体，MMP-2、MMP-9单抗以及sP试剂盒均由中杉金桥公司提供，批号分别为20141102、20150301、20150403、201/1204，严格按照试剂盒说明书进行染色，石蜡切片经脱蜡、酒精水化、微波炉抗原热修复。后经DAB染色、苏木精复染，最后采用中性树胶进行封闭。以实验前期检查S100A14为阳性的HDOMC组织作阳性对照，以PBS代一抗作阴性对照。S100A14、MMP-2、MMP-9阳性判断标准：显微镜下染色强度为胞浆和胞膜呈浅黄色至棕黄色，且典型分布于膜部分，排除完全脱片的无效标本，所有切片均通过Apefio病理扫描，用Apefio Image Scope软件分析蛋白表达量。每张切片随取6～10个部位用于S100A14、MMP-2、MMP-9表达水平的检测分析。

1.3统计学方法

采用SPSS13.0软件统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间采用t检验，计数资料以n（%）表示，采用x2检验；采用Pearson进行相关性检验，P<0.05则差异有统计学意义。

2.结果

2.1不同标本组织MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平差异

MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢组织、OMT、HDOMC患者中的表达水平呈递增趋势，且两两组间比较差异显著（P<0.05）。见表1。

2.2MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表达情况

MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平与HDOMC患者手术-病理分期（FIGO）、CA-125水平有关（P<0.05）；与年龄、肿瘤直径、淋巴结转移无关（P>0.05）。见表2。

2.3HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平的相关性

Spearman相关分析：HDOMC患者中S100A14表达与MMP-2、MMP-9表达水平两两呈正相关（r=0.773，P<0.05；r=0.653，P<0.05）。

3.讨论

卵巢癌己成为近年来严重危害女性身心健康的杀手之一，其死亡率居于妇科恶性疾病之首，据调查统计，其5年存活率仅25%～30%。因此，临床一直致力于寻求一种能够灵敏地反映卵巢癌早期病变、演变的实验室客观指标，对早期癌变筛查、延长病人生命具有重要价值。本实验通过检测MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC组织中表达，以探讨这些指标是否可作为HDOMC疾病筛查、演变以及预后地评估指标。

侵袭、转移是恶性肿瘤治疗失败以及后期死亡的主要原因，多基因参与其中，是一个复杂的病理过程。有报道称S100A14蛋白与肿瘤密切相关。己有研究证实，S100A14基因在多种肿瘤细胞的RNA上高表达，在乳腺、卵巢、宫颈以及子宫内膜等妇科癌症中表达水平上调，在结直肠癌、细胞癌中表达水平下调。目前临床对于S100A14在HDOMC中的研究资料尚少。浸润是个主动过程，细胞浸润关键在于可水解细胞外基质（ECM）成分及穿越基底膜。妇产科领域肿瘤疾病均发现MMPs异常表达，并且其水平高低和癌肿分期、预后存在密切相关性，可作为早期癌症诊断的重要监测指标。MMP-2是MMPs家族成员之一，它通过降解ECM和穿越基底膜，破坏局部组织结构，有利于癌细胞侵袭；MMP-2不但对基底膜糖蛋白、ECM成分起到降解作用，且对肿瘤新生血管的生产也具有重要促进作用，为新生血管开辟道路。MMP-9是MMPs家族中分子量最大酶，主要降解破坏ECM成分中的Ⅳ、Ⅴ型胶原以及明胶。本研究结果显示，MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC组织中表达明显高于OMT及正常卵巢组织；MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平与HDOMC患者手术病理分期（FI-GO）、CA-125水平有关（P<0.05）；与年龄、肿瘤直径、淋巴结转移无关（P>0.05）。这可能与样本量少等主观因素有关。由此推测，MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平可作为HDOMC的有效筛查指标。

联合多个基因，探讨肿瘤发病机制和寻求灵敏度较高的肿瘤早期筛查指标是当前临床研究的焦点、热点。本研究在上述基础上继续探讨MMP-2、MMP-9、S100A14之间的相关性，以揭示其在HDOMC疾病中的意义。Spearman相关分析显示，HDOMC患者中S100A14表达与MMP-2、MMP-9表达水平两两呈正相关（P<0.05）。有研究证明，S100A14可激活乳腺癌中的信号通路，下调野生型p53基因，从而上调MMP-2、MMP-9蛋白表达，促进癌细胞发生侵袭、转移。但其在OC中细胞信号机制，尚待进一步研究。由实验推测，S100A14与MMP-2、MMP-9之间具有协同作用，S100A14可能通過上调MMP-2、MMP-9表达，促使癌细胞侵袭、转移。本实验为遏制OC侵袭性生长提供了新的可能，以期改善病人预后。

综上所述，MMP-2、MMP-9、S100A14表达水平升高与HDOMC发生、进展、早期转移具有显著相关性，早期联合筛查这些指标对HDOMC病情演变及治疗预后评估具有重要价值。