HPLC法测定维吾尔药通滞埃提勒菲力沙那片中番泻苷A、B的含量△

王亚丽 沙拉麦提·艾力

(新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830004)

通滞埃提勒菲力沙那片是由番泻叶、余甘子、西青果、诃子肉、毛诃子肉等5味药材组成，具有开通阻滞，通便止痛的功效。用于热性头痛、便秘、瘙痒及关节疼痛等。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱法测定通滞埃提勒菲力沙那片中番泻苷A、番泻苷B的含量，可用于该制剂的测定[1-4]。

1 仪器与试药

美国Thermo U3000型高效液相色谱仪，紫外检测器；CPA 225D型电子分析天平(德国sartorius公司)，Mettler MS 204S电子分析天平(德国梅特勒公司)；中草药粉碎机(德国IKA)；KLZ-UP超纯水仪(台湾艾柯成都康宁实验专用纯水设备厂)；KUDOS SK7210LHC型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。

番泻苷A对照品(批号：110824-201301，纯度：94.7%)；番泻苷B对照品(批号：110825-201301，纯度：94.9%)均购自中国食品药品检定研究院。乙腈(色谱纯)购自fisher公司，四庚基溴化铵(分析纯，批号：224-458-3)购自东京化成工业株式会社；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

通滞埃提勒菲力沙那片(批号：140929、140928、YF1503001)由新疆维吾尔药业有限责任公司生产。

2 含量测定

2.1 色谱条件：色谱柱为Thermo AcclaimTM120-C18(4.6mm×250mm 5μm)；以乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化铵的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.0)(1→10)[注](37：63)(缓冲液1000mL加入四庚基溴化铵2.45g)为流动相；流速为1.0mL·min-1，柱温为40℃，检测波长为340nm，进样量：各10μL。理论塔板数按番泻苷B峰计算应不低于6500。

[注]1、1mol/L乙酸-乙酸钠(pH5.0)缓冲液的制备：取1mol/L乙酸钠溶液，用稀乙酸试液调制成pH为5.0的溶液，再稀释10倍，即得。2、以上缓冲液与乙腈按比例混合后，再加四庚基溴化铵2.45g使溶解，过滤后即得流动相。

2.2 对照品溶液的制备：取番泻苷A、番泻苷B对照品适量，置棕色量瓶中，加0.1%NaHCO3溶液制成每1mL含番泻苷A、番泻苷B各50μg的混合溶液，摇匀，即得。见图1。

2.3 供试品溶液制备： 取本品20片，去除薄膜衣，精密称定。研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1%NaHCO3溶液50mL，称定重量，超声处理(功率350W,频率59kHz)15min(30～40℃)，放冷，再称定重量，用0.1%NaHCO3溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.4 线性关系考察： 精密称取番泻苷A对照品适量，加0.1%NaHCO3溶液适量溶解，摇匀，制成每mL含番泻苷A 1.792μg、14.3μg、44.8μg、89.6μg、179.2μg；番泻苷B1.883μg、18.83μg、47.08μg、94.2μg、188.3μg的系列浓度对照品溶液，分别进10μL，按“2.1”项测定，以进样量(X，μg)浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，番泻苷A为Y=6.2403X+0.3995，r2=0.9999；番泻苷A在1.792μg～179.2μg范围内有良好的线性关系。番泻苷B为Y=0.1499X-0.0124，r2=1.0000；番泻苷B在1.883μg～188.3μg范围内有良好的线性关系。

2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，按“2.1”项连续进样6次测定峰面积，结果番泻苷A峰面积的RSD为0.295%，番泻苷B峰面积的RSD为0.731%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验：取通滞埃提勒菲力沙那片(批号：YF1503001)，按“2.3”项制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，分别于0,2,4,6,8,12,24h测定，结果番泻苷A峰面积RSD为1.159%，番泻苷B峰面积RSD为11.04%，结果表明番泻苷A在24h内稳定性良好，但番泻苷B相对不稳定，需及时测定提取后的样品。

表1 稳定性试验结果

2.7 重复性试验：取通滞埃提勒菲力沙那片(批号：YF1503001)，按“2.3”项制备方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，测定样品中番泻苷A、番泻苷B含量，结果平均含量番泻苷A为2.1028mg·g-1(RSD=1.78%)；番泻苷B为3.0933mg·g-1(RSD=1.26%)，表明方法的重复性良好。

2.8 准确度试验：取通滞埃提勒菲力沙那片(批号YF1503001)研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共9份，分别精密加入混合对照品溶液(含番泻苷A对照品0.2235 mg·mL-1、番泻苷B对照品0.3094mg·mL-1) 4mL、5mL、6mL，补足溶剂，按“2.3”项制备，按“2.1”项色谱条件下测定，计算回收率。番泻苷A平均回收率为96.3%，RSD为1.78%；番泻苷B平均回收率为105.2%，RSD为2.06%。表明该方法准确度较好。

3 样品的测定

取通滞埃提勒菲力沙那片，按“2.3”项下方法操作，按“2.1”项下色谱条件测定，计算，结果见表2.

4 讨论

4.1 超声温度对样品提取的关键作用；样品提取过程中，超声温度的升高或者降低具有较为明显的影响作用，在温度为(30～40℃)时番泻苷A与B的峰面积最大，超声时以35℃设定温度最佳。

4.2 流动相配制：需将乙腈与缓冲液混合后再加入四庚基溴化铵，四庚基溴化铵为离子对色谱试剂，不溶于水，所以在配置5mmol·L-1四庚基溴化铵的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.0)(1→10)时，表现为浑浊状态，但在加入乙腈后四庚基溴化铵迅速溶解。另外，四庚基溴化铵只加入1次，即为2.45g。

4.3 进行稳定性试验时，发现番泻苷B的稳定性较差，提取2h后峰面积下降原来的4.0%，查阅文献，多有提到番泻苷类成分不稳定，因此样品提取后需及时上机进样。因此，在进行重复性及回收率试验时，分批提取和测定，以降低因稳定性差带来的影响。

[1]国家药典委员会.中国药典一部[S].2010.326.

[2] 王童,刘娜娜.HPLC法测定番泻叶中番泻苷A、番泻苷B含量[J].亚太传统医药,2014.08：32-33.

[3] 曹秀荣,向阳,冯井庆,等.HPLC法测定通滞苏润江胶囊中番泻苷A、B的含量[J].中国药师,2014, 1311-1313.

[4] 黄娟,张静,徐文,等.番泻叶提取液中番泻苷A、番泻苷B的稳定性考察[J].中国医院药学杂志,2014.05, 34(10)794-797.