不同来源精子对体外受精患者胚胎和妊娠结局的影响

蔡敏生，邓茹

（梅州市人民医院1生殖医学科，2检验科，广东 梅州514000）

不同来源精子对体外受精患者胚胎和妊娠结局的影响

蔡敏生1，邓茹2

（梅州市人民医院1生殖医学科，2检验科，广东 梅州514000）

目的探讨不同来源精子对体外受精患者胚胎和妊娠结局的影响。方法回顾性分行卵胞浆内单精子注射 （ICSI）技术治疗的患者21例，依据精子来源分为三组各7例。A组患者给予手淫法取精，B组患者给予睾丸穿刺取精术取精，C组给予经皮附睾穿刺取精术取精。结果在受精成功率、卵裂率、优质胚胎率方面，C组明显高于A组、B组 （P＜0.05），但A组与B组无统计学差异 （P＞0.05）。三组患者的妊娠率、胚胎种植率均无统计学差异 （P＞0.05）。结论经皮附睾穿刺取精术可有效提高患者的体外受精成功率，且其胚胎发育潜能良好，但对妊娠结局无显著影响。

不同来源精子；体外受精；胚胎；妊娠

不育症是临床上常见的生殖系统疾病之一，其中男方因素主要包括无精子症、功能障碍及射精障碍等，治疗方法有药物治疗和体外受精治疗等。卵胞浆内单精子注射 （intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技术可有效协助患者完成受精和妊娠，该技术的精子获取方法有手淫法、睾丸穿刺取精术、经皮附睾穿刺取精术取精，但临床上尚未有统一的标准［1－2］。本研究通过回顾性分析不同来源精子患者的临床资料，探讨不同来源精子对胚胎和妊娠结局的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2014年9月至2015年6月期间我院ICSI技术治疗的患者21例，依据精子来源分为A组、B组和C组，每组7例。A组：女方年龄 （29.67±4.26）岁，不孕时间 （4.26±1.03）年，人绒毛膜促性腺激素 （HCG）日雌二醇 （E2） （45.23±12.96）ng／L，基础卵泡刺激素 （6.63± 1.28）IU／L；B组：女方年龄 （30.26±4.41）岁，不孕时间（4.52±1.06）年，HCG日E2值 （46.03±13.08）ng／L，基础卵泡刺激素 （6.70±1.31）IU／L；C组：女方年龄 （31.01±4.82）岁，不孕时间 （4.49±1.10）年，HCG日E2值 （44.97± 12.88）ng／L，基础卵泡刺激素 （6.81±1.42）IU／L。三组的女方年龄、不孕时间、HCG日E2值、基础卵泡刺激素水平等资料无显著差异 （P＞0.05），具有可比性。本研究经院伦理委员会审批且通过。纳入和排除标准：纳入标准：①经临床症状、病史、产检、血尿常规等证实为男方不育且女方生育能力正常；②均为第1次促性腺激素释放激素激动剂长方案控制性卵巢刺激周期；③患者或其家属签署知情同意书。排除标准：①伴有心、肝、肾等重要器官严重性疾病；②女性＞40岁或男方不育年限＞15年；③女方有子宫肌瘤、子宫内膜异位等疾病。

1.2 方法

1.2.1精子获取 A组给予手淫法取精，即患者禁欲3～7 d后给予手淫法取精，通过密度梯度离心法对精液进行处理和备检；B组给予睾丸穿刺取精术取精，即患者取仰卧位，常规阴囊消毒穿刺点后麻醉，通过含2 mL精子培养液 （G－IVF，瑞典）的5 mL注射器行常规穿刺，负压下抽取出睾丸组织并于体视镜下将取精细管切碎，混匀后常规离心沉淀和备检；C组给予经皮附睾穿刺取精术取精，即患者穿刺前准备同B组，完毕后采用与B组一样的注射器行经皮附睾行常规穿刺，抽取淡黄色附睾液后处理同B组。

1.2.2促排卵方案和ICSI治疗 常规采用促性腺激素释放激素激动剂 （GnRHa，德国默克雪兰诺有限公司）、尿人绝经期促性腺激素 （HMG，丽珠制药有限公司）、重组人卵泡刺激素（rFSH，默克雪兰诺，德国）方案进行促排卵，待卵泡刺激素＜5 U／L、促黄体生成素≤5 U／L、雌二醇≤50 μg／L、窦状卵泡直径＜8 mm、内膜厚度≤5 mm后应用促性腺激素150～300 U启动控制下卵巢刺激周期，待直径≥18 mm时，肌内注射4 000～10 000 U的HCG（丽珠制药有限公司），36 h后于超声下吸取卵泡，在取卵2～4 h后将卵丘颗粒细胞除去，选择M2期卵细胞和形态正常、活力较好的精子行ICSI，取卵后第3 d行胚胎移植，期间予以常规体征监测，移植后35 d行B超检查。

1.3 观察指标和标准主要指标和标准［2－3］：所有患者均通过电话或复诊等方式进行为期的42周随访，统计分析所有患者受精、胚胎发育和妊娠结局情况。在ICSI后16～18 h观察原核形成情况，形成双原核为正常受精，其余为受精失败，且第3 d观察和记录胚胎卵裂球数目，根据卵裂球的均匀程度、大小及无核碎片的量对胚胎质量进行评价，胚胎培养3 d后细胞数为7～8个且核碎片评级为Ⅰ～Ⅱ级的胚胎为优质胚胎，其余为非优质胚胎；取第3 d优质胚胎进行新鲜周期胚胎移植且14 d后检测女方血人绒毛膜促性腺激素水平，观察受孕并于30 d后超声检查观察女方宫腔内是否存在孕囊以确定是否妊娠。

1.4 统计学处理采用SPSS 20.0统计软件处理数据，计数资料比较采用χ2检验，计量资料比较采用t检验，多组资料比较采用F检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组的受精和胚胎发育情况比较在受精成功率、卵裂率、优质胚胎率方面，C组明显高于A组、B组 （P＜0.05），但A组、B组无统计学差异 （P＞0.05），见表1。

表1 三组的受精和胚胎情况比较 ［% （n）］

注：与A、B组比较，*P<0.05；与A组比较，#P>0.05。

2.2 三组的妊娠结局比较三组的临床妊娠率、胚胎种植率无统计学差异 （P＞0.05），见表2。

表2 三组的妊娠结局比较 ［n（%）］

3 讨论

不育症是临床上常见的生殖系统疾病之一，其中男性不育占30%～50%，治疗方法有药物治疗和体外受精治疗等，可有效协助患者夫妇恢复受精和妊娠。有研究［4］显示，随着医疗技术的发展，ICSI技术已逐渐成为男性不育治疗的重要手段之一，可通过将精子直接注入到卵细胞胞质内完成体外受精，具有良好的受孕成功率。谢多等［5］的研究表明，不同来源的精子在形态、质量及成熟度等方面存在差异，对患者体外受精的影响也存在差异，提示医师应选择正确有效的精子获取方法。

本研究通过回顾性分析不同来源精子患者的临床资料，结果显示在受精成功率、卵裂率、优质胚胎率方面，C组明显高于A组、B组，A组、B组无统计学差异，三组的妊娠率、胚胎种植率无统计学差异，表明经皮附睾穿刺取精术可有效提高患者的体外受精成功率，且其胚胎发育潜能良好，但对妊娠结局无影响。本研究结果提示在ICSI技术治疗过程中，虽可有效避免常规受精过程中精子获能、顶体反应、识别、黏附、融合等步骤并将精子直接注入到卵细胞胞质内完成体外受精，但由于卵母细胞的体外受精率与精子的质量密切相关，不同来源的精子对受精具有一定的差异，其中睾丸内的精子虽然已完成减数分裂过程和成为单倍体的遗传配子，可能由于精子未经过附睾中的成熟，如细胞膜结构和功能的变化，顶体外膜抗原分布改变和获能状态的保持等，导致其激活卵子，使其受精的能力降低，影响其受精成功率；而手淫法获得的精子可能是由于患者自身睾丸生精功能障碍或低下导致精子含量较少、畸形率较高等，导致其射出的精子在密度、质量上相对较低，进而影响正常受精［6］。此外，经皮附睾穿刺取精术可能由于获得的精子在密度、质量上相对较高，使其更容易结合并激活卵子，有利于受精卵更易卵裂并发育成优质胚胎，但可能由于在胚胎移植过程中均选取优质胚胎进行，其妊娠和种植也基本相同，故经皮附睾穿刺取精术可为ICSI技术提供更多更为良好的精子［7］，确保体外受精和胚胎的良好发育，有利于治疗的顺利进行。

综上所述，经皮附睾穿刺取精术可有效提高ICSI技术治疗患者的体外受精成功率，且其胚胎发育潜能良好，但对妊娠结局无显著性影响，可作为梗阻性无精症有效的治疗方法。

[1]李宜学,田喜凤,樊桂玲,等.不同来源精子对卵胞浆内单精子显微注射临床结局的影响 [J].河北医药,2013,35(9):1364-1365.

[2]张帆,葛红山,朱春芳,等.不同来源及不同处理方式的精子对人卵子胞浆内单精子注射结局的影响 [J].实用医学杂志,2014,30 (4):591-593.

[3]李楠,唐永梅,梁明明,等.不同受精方式及精子来源对剩余胚胎发育能力的影响 [J].重庆医学,2016,45(3):366-368.

[4]张志宏,朱海波,张馨月,等.不同来源精子对卵胞浆内单精子注射治疗结局的影响 [J].生殖医学杂志,2014,23(3):252-255.

[5]谢多,邱卓琳,罗琛,等.ICSI中不同来源精子对卵母细胞受精,胚胎质量及发育潜能的影响 [J].南方医科大学学报,2014,34(6): 857-861.

[6]金华,丁家怡,邵骏.不同来源精子在ICSI中对受精、胚胎发育的影响 [J].医学综述,2015,21(23):4392-4393.

[7]赵杰,朱小军,陈秀娟,等.精液参数及精子来源对妊娠结局的影响[J/CD].中华妇幼临床医学杂志:电子版,2015,11(6):713-718.

（责任编辑：钟婷婷）

Effect of Spermatozoa from Different Sources on Embryos and Pregnancy Outcomes of External Fertilization//CAI Minsheng1,

DENG Ru2(1Department of Reproductive Medicine,2Clinical Laboratory,Meizhou People s Hospital,Meizhou 514000,China)

ObjectiveTo discuss the effect of spermatozoa from different sources on embryos and pregnancy outcomes of external fertilization.Methods21 cases of patients with ICSI technology were analyzed retrospectively.According to the sources of spermatozoa,all cases were divided into ejaculated spermatozoa group(group A),testicular sperm aspiration(group B),and percutaneous epididymal sperm aspiration group(group C),with 7 cases in each group.ResultsIn fertilization success rate,cleavage rate,high quality embryo rate,group C was significantlyhigher than group A and group B(P＜0.05),while no statistical difference was found between group A and group B(P＞0.05). No statistical difference was found in the pregnancy rate and embryo implantation rate among 3 groups(P＞0.05).ConclusionsPercutaneous epididymal sperm aspiration can effectively improve the success rate of external fertilization,and the potential of embryonic development is good,but there is no significant effect on pregnancy outcome.

Spermatozoa from different sources;External fertilization;Embryos;Pregnancy

R321.2

：A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.02.0211

2016－07－18

2016－09－02

蔡敏生 （1982－），男，广东梅州人，主管检验师，研究方向：生殖检验。