肛瘘患者术后创面新血管形成与VEGF和VEGFR⁃2表达的影响

谢家良 聂红海 朱卫洲

肛瘘患者术后创面新血管形成与VEGF和VEGFR⁃2表达的影响

谢家良 聂红海 朱卫洲

目的研究贝复新凝胶（重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶）对肛瘘术后创面新血管生成恢复与血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR⁃2）表达的影响。方法选择2014年12月～2016年12月间我科收治的肛瘘挂线术后患者60例，分为观察组（n=30）和对照组（n=30），观察组以贝复新凝胶进行治疗，对照组以传统凡士林纱布治疗，治疗后7 d和14 d检测创面毛细血管数量和VEGF、VEGFR⁃2表达水平。结果观察组7 d、14 d的创面毛细血管数量、VEGF和VEGFR⁃2表达水平均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；且创面毛细血管数量与VEGF、VEGFR⁃2表达呈显著正相关（r=0.714，P＜0.05；r=0.652，P＜0.05）。结论贝复新凝胶能促进肛瘘术后创面新血管恢复，提高创面VEGF和VEGFR⁃2表达水平。

肛瘘；重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶；血管；血管内皮细胞生长因子；受体

肛瘘（anal fistula）是一种临床上常见的直肠肛管疾病，其是肛门周围的肉芽肿性管道，包括内口、瘘管、外口3个部分。手术是治愈肛瘘的唯一方法，但肛门具有排便的特殊生理功能，因此肛瘘手术切口一般不予缝合，造成术后创面大、疼痛明显且愈合缓慢［1］。肛瘘术后创面的传统护理方法是采用凡士林纱布覆盖伤口，从而对创面起到润滑防护的作用，但其不能加速伤口的愈合［2，3］。最新的研究表明，外源性生长因子对创面愈合有着较好的促进作用，且安全性得到保证［4］。我科对贝复新凝胶（重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶）促进肛瘘术后创面新血管恢复与血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR⁃2）表达的影响进行了研究，本文现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年12月～2016年12月间我科收治的肛瘘患者60例，所有入选患者入院后常规行盆腔磁共振增强扫描及电子肠镜检查，排除了高位、低位的复杂性肛瘘或合并肛周脓肿的诊断，所有入选病例均符合单纯性低位肛瘘诊断标准［4］，术前常规不使用抗生素，入院第3天在硬外麻醉下行瘘管部分切除、肛瘘挂线术，创面止血不缝合，术后常规留置肛管，术后连续3天使用抗生素注射用头孢呋辛静滴；排除标准：直肠恶性肿瘤、溃疡性结肠炎等肠道疾病者；糖尿病、心脑血管疾病、结核等影响创面愈合疾病者；其他严重疾病者。按照入院先后顺序将60例患者分为观察组（n=30）和对照组（n=30），其中观察组男17例，女13例，年龄19～64岁，平均38.9±10.3岁，病程1～18年，平均11.4±4.2年；对照组男16例，女14例，年龄18～63岁，平均39.7±11.5岁，病程1～17年，平均11.1±5.0年。两组一般资料如性别、年龄、病程等等一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法

患者均于肛瘘挂线术术后第2天拔除肛管，每日清晨排便后以温盐水坐浴10～15 min，以生理盐水棉球清创并以碘伏消毒。观察组以棉签将贝复新凝胶（重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶，21 000 U/5g/支，国药准字S20040001，珠海亿胜生物制药有限公司）均匀涂抹于创面上，厚度为1～2 mm，然后以无菌纱布包扎固定，每日换药1次。对照组以传统凡士林砂条覆盖于创面上，然后以无菌纱布包扎固定，每日换药1次。所有患者行肛瘘挂线术后第14天橡皮巾挂线自行脱落，瘘管完全挂开，创面可见新鲜肉芽组织生长，创面愈合良好。出院前常规行直肠超声检查，排除新瘘道形成。

1.3 观察指标及检测方法

1.3.1 创面毛细血管数量观察分别与术后7 d和14 d沿创面取1.0 mm×1.0 mm新鲜肉芽组织标本，以20%甲醛固定，常规脱水，再以石蜡包埋，5 μm连续切片，行苏木素⁃伊红染色，于400×视野下计算每个视野内具有完整管腔的毛细血管数，每张切片计算3个视野，取其平均值。

1.3.2 VEGF和VEGFR⁃2表达检测将上述切片以免疫组化法［5］检测，试剂由美国R&D公司提供。于200×视野下计算表达阳性信号（黄染）进行计数，计算其阳性率，每张切片计算3个视野，取其平均值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件进行统计学分析。创面毛细血管数量、VEGF和VEGFR⁃2表达以x±s进行描述，进行t检验，并进行Spearman相关性分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组创面毛细血管数量比较

两组创面毛细血管数量比较如表1。观察组7 d、14 d的创面毛细血管数量均明显高于对照组，差异具有统计学意义（t＞3.898，P＜0.05）。

表1 两组创面毛细血管数量比较（x±s）

2.2 两组VEGF和VEGFR⁃2表达比较

两组VEGF和VEGFR⁃2表达比较如表2。观察组7 d、14 d的VEGF表达水平均明显高于对照组，差异具有统计学意义（t＞2.341，P＜0.05）；观察组7 d、14 d的VEGFR⁃2表达水平均明显高于对照组，差异具有统计学意义（t＞2.203，P＜0.05）。

表2 两组创面毛细血管数量比较（x±s）

2.3 HE染色结果比较

经过HE染色结果比较，见图1，观察组14 d的创面毛细血管数量均明显高于对照组，差异具有统计学意义（t＞3.898，P＜0.05），说明贝复新凝胶能显著促进肛瘘术后创面新血管恢复。

2.4 创面毛细血管数量与VEGF、VEGFR⁃2表达的相关性

相关性分析表明，创面毛细血管数量与VEGF表达呈显著正相关（r=0.714，P＜0.05），创面毛细血管数量与VEGFR⁃2表达呈显著正相关（r=0.652，P＜0.05）。

图1 肛瘘创面组织HE染色所示毛细血管数量

3 讨论

肛瘘是高发的肛周疾病之一，其在国内的发病率占肛肠疾病的3%左右，肛瘘自愈率极低，因此绝大部分患者均需进行手术治疗。由于肛瘘特殊的生理位置，肛瘘手术后创面无法缝合，术后创面恢复困难，促进创面愈合是当前术后治疗的重点之一。研究表明，肛瘘术后创面修复包括局部炎症反应、细胞增殖分化、肉芽组织形成和组织重建等3个阶段，愈合过程中生长因子具有明显的调控和促愈作用［6，7］。其中VEGF是一种作用于内皮细胞的促血管生长因子，其具有广泛的生理作用，其他生长因子的促血管生成作用都需要通过VEGF而实现，研究其和受体的表达对创面愈合机制具有重要的作用［8］。

成纤维细胞生长因子是一种对来源于中、外胚层的细胞包括上皮细胞、真皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等具有促进修复、再生的作用的生长因子，其能促进毛细血管再生，改善局部血液循环，加速创面的愈合，因而在肛瘘术后创面愈合中具有很好的疗效。目前临床上应用的主要是重组牛碱性成纤维细胞生长因子，能缓解疼痛、促进组织生长并加速创面愈合，且其应用安全性良好。Kubota等［6］收集9例肛瘘，观察脓肿切开后使用生长因子喷剂对创面愈合的效果，结果显示反应良好。治疗开始后平均7.3±1.9天瘘管周围局部肿胀消退。1例治疗7个月后出现轻度复发，治疗后1个月出现新发病灶，继续使用生长因子喷剂后痊愈，近1年的随访检查正常。其余患者在平均随访14.1±3.2月无复发。

在本研究中，我科对肛瘘挂线术患者使用贝复新凝胶（重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶）进行治疗，以传统方法作为对照，治疗后7 d和14 d观察创面毛细血管数量和VEGF、VEGFR⁃2表达水平，结果表明观察组7 d、14 d的创面毛细血管数量均明显高于对照组，差异具有统计学意义，说明贝复新凝胶能显著促进肛瘘术后创面新血管恢复。而观察组7 d、14 d的VEGF表达水平均明显高于对照组，差异具有统计学意义；观察组7 d、14 d的VEGFR⁃2表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）。相关性分析表明，创面毛细血管数量与VEGF表达呈显著正相关（P＜0.05），创面毛细血管数量与VEGFR⁃2表达呈显著正相关（P＜0.05）。说明贝复新凝胶能提高肛瘘术后创面VEGF和VEG⁃FR⁃2表达水平，VEGF和VEGFR⁃2表达与创面新血管恢复具有显著的相关性，进而促进创面的愈合。

综上所述，贝复新凝胶能促进肛瘘术后创面新血管恢复，提高创面VEGF和VEGFR⁃2表达水平，VEGF和VEGFR⁃2表达与创面新血管恢复具有显著相关性，进而促进创面的愈合。

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［4］Lewis R，Lunniss PJ，Hammond TM.Novel biological strategies in the management of anal fistula［J］.ColorectalDis，2012，14（12）：1445-1455.

［5］中国肛肠病杂志.痔、肛瘘、肛裂、直肠脱垂的诊断标准_试行草案［J］.中国肛肠病杂志，2004，24（4）：42-43.

［6］Kubota M，Hirayama Y，Okuyama N.Usefulness of bFGF spray in the treatment of perianal abscess and fistula⁃in⁃ano［J］. Pediatr Surg Int，2010，26（10）：1037-1040.

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Effects of the recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel on anal fistula wound，angiogenesis，and expression of VEGF and VEGFR⁃2

XIE Jialiang，NIE Honghai，ZHU Weizhou.Department of Surgery，Qingyuan TCM Hospital，Qingyuan，Guangdong，China.

ObjectiveTo investigate the effects of shellfish Fuxin gel（recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel）on anal fistula wound，angiogenesis and vascular endothelial growth factor（VEGF）and its receptor（VEGFR⁃2）expression.MethodsSixty cases of post⁃operation of anal fistula thread⁃drawing from Jan 2013 to Dec 2016 were selected and divided into observation group（n=30），treated with Bei Fuxin Gel，and control group（n=30），treated with Vaseline gauze.The number of capillaries and the expression level of VEGF and VEGFR⁃2 were detected in 7 days and 14 days after treatment.ResultsThe number of capillaries，expression level of VEGF and VEGFR⁃2 of the observation group are much higher，with statistically significance（all P values＜0.05）respectively.Related analysis showed that wound capillary number and VEGF expression was significantly positive correlated（r=0.714，P＜0.05），wound capillary number and VEGFR⁃2 expression was significantly positive correlation（r=0.652，P＜0.05）.ConclusionBei Fuxin Gel can promote angiogenesis on the wound after anal fistula surgery，accelerate the expression of VEGF and VEGFR⁃2.There was a significant positive correlation between the number of capillaries and VEGF，VEGFR⁃2 expression.

anal fistula；recombinant bovine basic fibroblast growth factor gel；blood vessels；vascular endothelial growth factor；receptor

R657.1+6

A

10.3969/j.issn.1009⁃976X.2017.02.008

2016⁃12⁃25）

511500广东清远清远市中医院科

谢家良，Email：13680018001@139.com