库存血加热对于血浆中IL-8的影响

孙 楠,温 转,韩丽娜,彭 华,李 捷(.河北医科大学第四医院输血科，河北 石家庄 0500；.河北医科大学第四医院干部保健处，河北 石家庄 0500)

·论 著·

库存血加热对于血浆中IL-8的影响

孙 楠1,温 转2,韩丽娜1,彭 华1,李 捷1
(1.河北医科大学第四医院输血科，河北 石家庄 050011；2.河北医科大学第四医院干部保健处，河北 石家庄 050011)

目的探讨温浴不同温度和时间对血浆中白细胞介素8(interleukin-8，IL-8)的影响，为库存红细胞安全、有效的使用提供理论依据。方法随机抽取河北省血液中心采集的无偿献血、经检测各项指标均合格的血液标本50份，每份均分成8段(A、B、C、D、E、F、G、H组)分别行4 ℃保存，37 ℃加热10、20、30、60、120、180 min和40 ℃加热30 min处理，并进行后续实验。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测血浆中IL-8浓度。结果加热能明显上调IL-8水平，并且有时间依赖性，随加热时间延长IL-8水平逐渐增高，B、C组血浆IL-8浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05)，而D、E、F、G、H组血浆IL-8浓度与A组相比显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论库存红细胞37 ℃温浴30 min以内对血浆IL-8浓度无明显影响，之后随着时间延长逐渐升高。

输血；红细胞免疫功能；白细胞介素8

医院输血科库存的红细胞一般在4 ℃条件下保存，若将4 ℃保存的红细胞直接输入患者体内，会出现体温下降以及冷抗体导致的溶血等不良反应。如果将库存血加热后输注可以避免以上不良反应，但是库存血加热后对其免疫功能是否有影响呢？是否能在更大程度上提高输血治疗的效果？本研究通过检测血浆中白细胞介素8(interleukin-8，IL-8)浓度的变化来评价加热对库存红细胞免疫功能是否有影响，并进一步探讨保证红细胞免疫功能的最佳温浴时间，旨在为库存红细胞安全、有效的使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样本来源 随机抽取2015年1—12月河北省血液中心采集的经检测各项指标均合格的无偿献血者血液标本共50份，约10 mL/份。将所采集每份血液与血袋中CPD 保养液充分混匀后, 注入血袋细管小辫,将其分成8段小样4 ℃保存备用；每次各取1个小样测定, 分别于4 ℃保存(A组)，37 ℃加热10 min(B组)、20 min(C组)、30 min(D组)、60 min(E组)、120 min(F组)、180 min(G组)和40 ℃加热30 min(H组)处理后，对上述标本分别进行血浆IL-8浓度的检测。本研究获得河北医科大学第四医院伦理委员会批准。

1.2 方法 血浆IL-8浓度测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法，IL-8酶联免疫试剂盒由法国Diaelone公司生产，结果以ng/L表示。性能参数:灵敏度≥25 ng/L。重复性:板内变异系数<10%，板间变异系数<10%。

1.2.1 血浆制备 将待测标本以3 000 g离心5 min，收集上层血浆至试管备用。

1.2.2 试剂准备 按照试剂盒说明的内容，准备好标准品、生物素、亲和链霉素-HRP、洗涤液。

1.2.3 检测程序 按照试剂盒说明的内容：①建立标准曲线，将标准孔进行倍比稀释操作；②将各组待检样品加入相应的样品孔；③加入配有标记物的IL-8抗体；④孵育，室温(18～25 ℃)1 h后洗板；⑤加入亲和链霉素-HRP室温孵育20 min;⑥洗板后加入底物，在室温避光孵育20 min;⑥加入终止液，30 min内在酶标仪内振荡后，450 nm测试吸光度。

1.2.4 结果分析 将酶标仪所测得的吸光度减去空白孔以防止板间差异和本地差异，绘制标准曲线，根据标准曲线求得各样品孔血浆中IL-8浓度。

1.3 统计学方法 应用SPSS 13.0软件对所有数据进行统计学处理。计量资料比较分别采用单因素方差分析和SNK-q检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

血浆IL-8浓度在37 ℃加热30 min以内无显著变化，之后随着时间延长逐渐升高。与A组相比，B、C组血浆IL-8浓度差异无统计学意义(P>0.05)，而D、E、F、G、H组血浆IL-8浓度显著高于A组，差异有统计学意义(P<0.05)；E、F、G、H组血浆IL-8浓度显著高于D组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 库存悬浮红细胞加热不同温度不同时间后IL-8浓度比较Table 1 The level of IL-8 in storing suspending erythrocytes treated with different degree for various times (n=50，±s，ng/L)

*P<0.05与A组比较 #P<0.05与D组相比较(SNK-q检验)

3 讨 论

传统观点认为，红细胞在人体内只是通过携带氧气和二氧化碳参与呼吸功能，并不参与免疫系统运转。随着人们对于红细胞基础分析、临床观察和动物实验等研究的深入，逐渐发现红细胞具有非常重要的免疫功能，1981年Siegel等提出了机体中除了白细胞免疫系统外还存在红细胞免疫系统这一重要概念，红细胞和中性粒细胞、淋巴细胞等经典免疫细胞共同参与机体的免疫系统，红细胞的免疫功能和免疫活性与许多疾病尤其是肿瘤和一些自身免疫性疾病的发生和进展有密切的关系[1-2]。红细胞具有包括识别携带抗原、清除血液循环中的免疫复合物、防御感染、增强T细胞依赖反应、抗自由基氧化、促进中性粒细胞的吞噬功能和调控淋巴细胞活性等。红细胞的免疫功能包括天然免疫功能和获得性免疫功能，天然免疫功能包括免疫黏附功能等，获得性免疫功能包括调控自然杀伤细胞杀伤活性、促进中性粒细胞的吞噬功能等，红细胞在人体中数量巨大,是一种重要的免疫细胞。输血作为一种替代性的治疗方法，在创伤急救、外科手术以及出血性休克等治疗过程中都是不可缺少的。输血前血液加热可以避免由于低温造成的患者不良反应。有研究表明，在临床输血中对于大剂量输血的患者，在输注前需要对红细胞进行温浴加热处理，这样可以改变血液的流变性质，有效降低红细胞的黏度，使血液输注的速度加快，便于抢救大出血的危重患者；红细胞在4 ℃条件保存会出现胞膜脆性程度升高、膜变形能力下降，直接输注到患者体内会降低红细胞的寿命，降低红细胞输注的治疗效果，而通过37 ℃加热可以有效解决这一问题[3]。

红细胞膜上具有的许多广谱趋化因子受体(duffyantigenreceptorforchemokines,DARC),也称红细胞趋化因子受体(erythrocytechemokinreceptor,ECKR)，DARC与IL-8可以发生受体和配体的结合反应，DARC不断吸附血浆中的IL-8, 使人体血液循环中IL-8的浓度保持在最适宜的水平，因此红细胞对于血浆中IL-8的浓度起到重要的调控作用。IL-8的主要生物学功能是在炎症反应中趋化中性粒细胞、T淋巴细胞等到达病变部位。IL-8是吞噬细胞、肿瘤细胞等一些类型的细胞受刺激后释放的因子，为血小板β球蛋白超家族成员，是促炎症与促营养血管生长的细胞因子，有利于肿瘤细胞增殖和转移。国内外研究发现，IL-8的生物学功能可以使肿瘤细胞避免因为药物治疗和物理治疗等手段引起的细胞凋亡，从而增强肿瘤细胞的迁移和侵入[4]。IL-8还参与卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等多种癌症的发病过程和侵袭转移[5-6]。IL-8在血浆中的浓度对于临床治疗肿瘤具有相当重要的参考意义[7-15]。IL-8与冠心病、急性脑梗死、慢性阻塞性肺疾病等疾病的发病机制密切相关，并且还可作为疾病恢复或进行性加重的指标[16-24]。红细胞可以负调节血浆中IL-8的浓度[25]，可以降低肿瘤的转移，促进炎性因子向正常水平恢复，因此输血治疗中保证红细胞的正常免疫功能有着非常重要的意义。

本研究结果显示，IL-8含量随着库存血37 ℃加热时间增加而增高, 尤其在加热60min后增高明显(P<0.05)。这是由于红细胞膜表面也有大量的IL-8受体，红细胞可通过该受体迅速地结合血浆中IL-8等趋化因子并通过循环系统清除掉IL-8，但随着加热时间延长，红细胞能量代谢增加，而周围环境无法提供营养而导致红细胞膜不断受损，膜表面IL-8受体随之减少，最终导致血浆中IL-8浓度升高。有报道指出，脑缺血后患者体内红细胞被破坏，IL-8浓度升高并导致其神经元细胞等出现炎性损伤[26]。本研究结果显示，随着加热时间延长和加热温度的提高，血浆中IL-8浓度越来越高。提示，为保证输血过程中血浆中IL-8浓度的稳定，应将血浆加热时间限制在30min以内，温度不超过37 ℃，避免因为加热时间过长导致患者体内IL-8浓度升高，从而影响患者的治疗和康复。

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(本文编辑：刘斯静)

Effect of heating on blood plasma IL-8

SUN Nan1, WEN Zhuan2, HAN Li-na1, PENG Hua1, LI Jie1
(1.DepartmentofBloodTransfusion,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shjiazhuang050011,China; 2.DepartmentofCadreHealthService,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shjiazhuang050011,China)

Objective To study the effects of storing suspending erythrocytes after water bath on interleukin-8(IL-8) in plasma, and further more to confirm the effect of water bath at various times and different degrees on IL-8 in plasma. Our study will provide the theoretical basis for safe and effective use of storing suspending erythrocytes. Methods Fifty blood samples were selected randomly from blood center in HebeiProvince, with detection of all indicators qualified. Each divided into 8 groups(A, B, C, D, E, F, G, H) which were stored at 4 ℃, heated at 37 ℃ for various time(10, 20, 30, 60, 120, 180 min) and 40 ℃ for 30 min for subsequent experiments. IL-8 concentration in plasma was detected by adopt double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. Results Heating could significantly up-regulated IL-8 level, and with time-dependence pattern. There was no significant difference in plasma IL-8 concentration between B and C group compared with A group(P>0.05). Plasma levels of IL-8 in D, E, F, G, H were significantly higher than those in the A group, the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion There was no significant effect on plasma IL-8 concentration in water bath at 37 ℃ within 30 min，and then gradually increased with time extended.

blood transfusion; erythrocyte immune functions; interleukin-8

2017-02-07；

2017-03-06

孙楠(1978-)，男，河北保定人，河北医科大学第四医院主管技师，医学硕士，从事临床输血研究。

R457.1

A

1007-3205(2017)04-0454-04

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.04.020