血清α-淀粉酶常规系统校准品的筛选与评价

黄妍，宗玉，简娟,马怀安

(1.北京世纪沃德生物科技有限公司研发部，北京 102200；2.中国中医科学院眼科医院检验科，北京 100040)

·质量管理研究·

血清α-淀粉酶常规系统校准品的筛选与评价

黄妍1，宗玉1，简娟1,马怀安2

(1.北京世纪沃德生物科技有限公司研发部，北京 102200；2.中国中医科学院眼科医院检验科，北京 100040)

目的 选择α-淀粉酶(Amy)常规测量系统的校准品。方法 IFCC Amy参考方法作为参考系统，用世纪沃德公司Amy试剂盒和Randox多项校准品分别做成常规系统A(用Roche PNPG7定标)、B(用Randox Liquid stable PNPG7定标)，分别检测40份新鲜冰冻血清样本，验证常规系统的检测结果是否可接受。结果 IFCC Amy参考系统，与常规系统A和常规系统B相关方程分别为：Y=0.964X+0.376、Y=1.095X+3.131，其中X和Y分别代表IFCC参考方法和常规系统的测量结果。以IFCC参考方法为比较方法，常规系统A测量结果可接受。结论 通过IFCC Amy参考方法，国内生化试剂选择合适校准品定标，可解决测量结果检测结果是否可接受问题。

淀粉酶；参考方法；常规方法；校准品

血清α-淀粉酶(Amy)常规方法很多，市场上各厂家试剂盒使用底物主要有2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷(CNP-G3)、4-硝基酚-6-O-苯基α-麦芽戊糖苷(BG5P)、4,6-亚乙基-对硝基酚-α-D-麦芽七糖苷(E-G7-PNP)。2006年，国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)公布了血清淀粉酶参考方法[1]，其测量底物为E-G7-PNP。国内习惯采用Randox多项校准品校准。Randox多项校准品根据不同方法提供不同的值，大约有20个不同方法的值，分别对应国外不同厂家试剂系统，其中，选用底物与IFCC相同的系统有5个，但定值不同。对于国内生化试剂生产厂家，校准品的选择及依据是个难题。利用IFCC参考方法溯源自己的校准品，同时用新鲜冰冻血清样本比对第三方校准品Randox多项校准品，可保证临床样本结果的检测结果是否可接受。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 参考方法试剂 N-2-羟基乙基哌嗪-N′-乙基磺酸(批号：1825C183)、牛血清清蛋白(批号：1022C394)均购于美国Amresco公司；4,6-亚乙基-4-硝基酚-α-D-麦芽七糖(批号：10698466)、α-葡萄糖苷酶(批号：11786437)均购于瑞士Roche公司；氯化钠(批号：20150831)、氯化钙二水化合物(批号：20150916)均购于国药公司；岛津UV2550紫外可见分光光度计(水浴控温)。

1.1.2 常规方法试剂 Amy试剂盒(批号：B036101，北京世纪沃德公司)；Olympus AU400全自动生化分析仪；Amy试剂盒和Randox多项校准品(定值选用Roche PNPG7:274 U/L)组成常规系统A，Amy试剂盒和Randox多项校准品(定值选用Randox Liquid stable PNPG7: 308 U/L定标)组成常规系统B。

1.2 样品 (1)Amy有证参考物质JCCLS CRM001c，购于日本标准物质中心，认定值为(348±9) U/L。(2)Randox多项质控品，货号/批号：HN1530/1027UN，HE1532/791UE。(3) Randox多项校准品，货号/批号：CAL2351/753UE。(4)40份不同Amy浓度的新鲜冰冻血清样本。

1.3 实验方法

1.3.1 参考方法 按照IFCC参考测量程序，用JCCLS CRM001c验证参考方法的正确度，3次测量结果要求在“认定值±不确定度”范围内。用Randox多项质控验证参考方法的精密度，每日测量5次，连续测量2 d，10次测量变异系数(CV)<1%。正确度和精密度达到要求后，测定40份不同Amy浓度的新鲜冰冻血清样本。

1.3.2 常规方法 按使用说明书设定参数，以Randox多项校准品为校准物质。常规系统A校准值选用Roche PNPG7方法，定值为274 U/L；常规系统B选用Randox Liquid stable PNPG7方法，定值为308 U/L。用JCCLS CRM001c评价常规方法的正确度。用Randox多项质控品验证常规方法的精密度，每日测量5次，连续测量2 d，10次测量CV<1.5%。精密度达到要求后，测定40份不同Amy浓度新鲜冰冻血清样本。

1.4 统计学分析 根据EP9-A3文件[2]要求，判断各测量数据的有效性。用SPSS 19.0软件进行回归和偏移分析，比较回归方程的95%偏移预测区间与预期偏移值。根据2012年原卫生部颁布的临床生物化学检验常规项目分析质量标准[3]行业标准，可接受预期偏移值设定为1/2总误差：±7.5%。

2 结果

2.1 Amy国际参考物质JCCLS CRM001c在3个系统的检测结果 参考方法系统的测量结果为349.9 U/L，与认定值偏移0.55%；常规系统A和B的测量结果分别为341.2 U/L、396.7 U/L，与认定值偏移分别为-1.95%、13.99%。

2.2 精密度结果 IFCC参考测量程序用Randox多项质控品验证参考方法的精密度，CV<1%；常规系统的检测性能用Randox多项质控品验证方法的精密度，CV<1.5%，结果见表1。

表1 3个系统精密度测量结果

2.3 离群值检验结果

2.3.1 目测法 以IFCC参考测量方法作为比对方法，世纪沃德的常规系统为待评方法，40份样本结果绘制散点图，未发现离群值。

2.3.2 ESD法(extreme studentized deviate) 根据EP9-A3离群值ESD检验方法计算ESD1、λ1，ESD1<λ1，未发现离群值点。

2.4 偏移初步估算 绘制IFCC参考系统和常规系统A和B间差值频数柱状图，图形均未呈经典钟形曲线，非正态分布，利用中位数作为方法间估算的偏移，经计算40份样本差值的中位数分别为-2.9%和14.2%，常规系统A小于可接受标准，常规系统B超过可接受标准。

2.5 回归分析 根据EP9-A3[2]进行OLR回归分析，常规系统A和B回归方程分别为Y=0.964X+0.376、Y=1.095X+3.131，其中X和Y分别代表IFCC参考方法和常规系统的测量结果，斜率的95%CI分别为0.959～0.968、1.091～1.100，偏移分别为-3.6%、9.5%，常规系统A小于可接受标准，常规系统B超过可接受标准。淀粉酶的医学决定水平是200 U/L，代入回归方程，偏移分别为-3.4%、11.1%，常规系统A小于可接受标准，常规系统B超过可接受标准。

3 讨论

根据2016年国家卫生计生委临床检验中心室间质量评价数据[4]，参加Amy检测的临床实验室有1 742家，其中有1 274家(73.13%)临床实验室选用了与IFCC参考方法相同底物的常规方法，测量最大值几乎是最小值的2倍。陈宝荣等[5]用IFCC参考方法评价了11个常规系统测量Amy的检测结果，发现常规系统中校准品是影响检测结果的重要原因。

Randox多项校准品提供了多个系统的值，单纯从理论上很难判断和选择合适的定值。本研究首先筛选出与IFCC方法使用相同底物的方法，以批号753UE的Randox多项校准品CAL235为例，共有5个方法：Siemes，265 U/L；Biotrol，267 U/L；Randox-Ethylidene PNP G7，219 U/L；Randox Liquid stable PNPG7，301 U/L；Roche PNPG7，259 U/L。Randox两种方法差异24.35%，Roche和Randox liquid两种方法差异16.22%。本研究选取了市场上比较常用的两种定值：Roche定值和Randox liquid定值，分别与世纪沃德试剂组成常规系统A和常规系统B，按照EP9-A3[2]的要求，与IFCC参考方法比较。研究发现选择Roche定值即常规系统A结果可接受，常规系统B结果偏移大于预期偏移，结果不可接受。通过本研究，明确了世纪沃德Amy试剂盒可选用Randox多项校准品为校准品，定值选择Roche PNPG7。

国外生化试剂厂家不仅提供试剂，同时提供配套校准品和质控品，理论上已经实现了溯源。随着国内生化试剂研发、生产的发展，国产试剂的质量性能已经完全可以满足临床需要，国产试剂逐渐被临床实验室接受，临床实验室在选择国产试剂时，通常出于经济及质量控制等原因的考虑，会选择国外知名品牌的校准品和质控品，构成开放系统。ISO 15189[6]规定实验室应对常规试剂检测系统验证检测结果是否可接受。陈宝荣等[5]报道用自建的准二级标准物质为校准品对4个自建常规系统进行校正，3个系统可得到与IFCC参考方法一致的结果，该研究的准二级标准物质为新鲜冰冻血清样本，由参考实验室使用参考方法定值，定值技术要求高，成本花费大。国内大量的临床常规实验室不具备参考实验室条件，使用准确可靠的商品化校准品、质控品进行常规检测是临床实验室经济可行的首选方法。

对于开放系统，国内各试剂生产厂家应建立参考方法，使用参考物质做好溯源性研究，从而保证常规试剂临床检测结果的可靠性和一致性。

[1]Schumann G, Aoki R, Ferrero CA,etal. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37 ℃. Part 8. Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of α-Amylase[J]. Clin Chem Lab Med, 2006,44(9):1146-1155.

[2]CLSI EP9-A3. Measurement procedure comparison and bias estimation using patient samples, approved guideline-third edition[S]. Wayne, PA:CLSI,2013.

[3]WS/T 403-2012.临床生物化学检验常规项目分析质量指标[S].卫生行业标准, 2012.

[4]卫生部临检中心常规化学回报结果[EB/OL].(2016). http://www.clinet.com.cn/.

[5]陈宝荣，孙慧颖，邵燕，等. 用IFCC参考方法评价11个常规系统测量血清α-淀粉酶结果的正确性[J]. 临床检验杂志, 2011,29(4):309-313.

[6]ISO 15189.Medical laboratories-particular requirements for quality and competence[S]. ISO, 2003.

(本文编辑：王海燕)

Selection and evaluation of calibrators for the conventional measurement system of serum α-Amylase

HUANGYan1,ZONGYu1,JIANJuan1,MaHuai-an2

(1.Research&DevelopmentDepartment,BeijingBioassayTechnologiesCo.,LTD,Beijing102200; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,EyeHospital,ChinaAcademyandChineseMedicalSciences,Beijing100040,China)

Objective To select the calibrator for the conventional measurement system of serum α-Amylase (Amy). Methods The Amy levels of forty frozen serum samples were detected by the IFCC reference method (reference system), the conventional system A which used the Bioassay routine reagent and Randox calibrator, and was calibrated by the Roche PNPG7 method, and the conventional system B which used the Bioassay routine reagent and Randox calibrator, and was calibrated by the Rondox liquid stable PNPG7 method, respectively, and the acceptability of the two conventional systems was evaluated. Results The regression equations of the measurement values between the IFCC reference method and the conventional systems A and B wereY=0.964X+0.376 andY=1.095X+3.131, respectively. Among them,XandYrepresented the results of the IFCC reference method and the conventional system, respectively. Compared with the IFCC reference method, the results of the conventional system A was reliable. Conclusion With the guidance of the IFCC reference method, the domestic biochemical reagents matched with the suitable calibrators may provide the acceptable results.

α-Amylase; reference method; routine method; calibrator

10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.19

黄妍，1972年生，女，硕士，研究方向为临床生化诊断试剂研发、产品溯源及质量管理。

马怀安，副研究员，硕士，E-mail:mha001@163.com。

R446

A

2016-11-02)