多叶唐松草药材中盐酸小檗碱的含量研究

刘长明， 张 磊， 杨 爽

(河北省承德市食品药品检验检测中心， 河北 承德 067000)

多叶唐松草药材中盐酸小檗碱的含量研究

刘长明， 张 磊， 杨 爽

(河北省承德市食品药品检验检测中心， 河北 承德 067000)

目的：建立HPLC法马尾连含量测定方法。方法：采用十八烷基键合硅胶色谱柱，DAD检测器，以乙腈-0.05%磷酸为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为265nm，进样量10μl。结果：5组多叶唐松草的盐酸小檗碱含量为0.51%、0.81%、1.14%、0.61%、0.54%。结论：该方法专属性强，能够快速、准确地测定马尾连(多叶唐松草)中盐酸小檗碱含量，为更好地控制河北马尾连的质量并评价其药用价值提供科学依据。

多叶唐松草； 含量测定； 中药质量控制

马尾连为毛茛科植物多叶唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根茎。[1]马尾连和黄连相似。[2]其功效较多，如清热、燥湿、解毒等。[3]多叶唐松草属于唐松草属植物。[4]唐松草属植物含有较多生物碱，生物碱有抗菌、抗癌作用。盐酸小檗碱作为其中有代表性的一种生物碱，本研究以盐酸小檗碱为测定指标，对多叶唐松草中盐酸小檗碱的含量进行测定，并做了方法学验证，建立马尾连(多叶唐松草)的盐酸小檗碱含量测定方法，对马尾连(多叶唐松草)中的盐酸小檗碱的含量进行控制。

1 仪器、样品和试剂

Waters e2695高效液相色谱仪 Agilent1100高效液相色谱仪，超声波清洗器(天津科贝尔光电技术有限公司)，XS105型电子分析天平(瑞士梅特勒有限公司)。

药材共计5个批次来自河北各地药材市场，经河北省药品检验院鉴定为毛茛科植物多叶唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根茎。盐酸小檗碱(含量为86.7%C20H18ClNO4)对照品购于中国食品药品检定研究院。

乙腈、甲醇均为色谱纯，水为杭州娃哈哈集团有限公司生产的纯净水，磷酸等试剂均为分析纯。

2 方法学的建立与验证

2.1 对照品与样品溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备：精取盐酸小檗碱对照品，以流动相[乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)]为溶剂，制成每1mL含25μg的溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备：取马尾连粉末(过二号筛) 0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇-盐酸(100：1)的混合溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)1h，放冷，再称定重量，用乙醇-盐酸(100：1)的混合溶液补足减失的重量，摇匀，0.45m滤膜过滤，即得。

2.2 色谱条件：色谱柱：C18；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)；检测波长：265nm；进样量：10μl。

2.3 专属性考察：取对照品溶液、供试品溶液，按上述色谱条件测定，并利用二极管阵列检测器对峰纯度进行测试，表明其它成分不干扰被测成分的测定。见图1。

图1 马尾连色谱纯度图

图2 盐酸小檗碱色谱纯度图

2.4 线性关系考察：精密量取盐酸小檗碱对照品溶液(0.01499g→50mL)，加[乙醇-盐酸(100：1)]溶液配制成系列浓度溶液，质量分别为0.05198、0.10397、0. 15595、0.20794、0.25992、0.31191、0.36389、0.41588、0. 4678610μg，根据“2.2”项下色谱条件进样测定，纵坐标Y为峰面积，纵坐标，横坐标 X为盐酸小檗碱质量(μg)，计算线性回归，所得回归方程：Y=-78752+ 4910936X r=0.9999，线性范围为 0.05198～0. 46786μg。

2.5 重复性试验：马尾连(多叶唐松草)粉末，混匀，称取粉末0.06g、0.10g、0.14g各三份，按“2.1.2”项下条件制备供试品溶液，根据“2.2”项下条件进样测定，盐酸小檗碱含量平均值为1.65%，RSD为0.2%。表明重复性试验结果较好。

2.6 稳定性试验：取同一马尾连(多叶唐松草)供试品溶液，在室温下放置，分别于0、1、1.5、2、4.5、12、24h进样测定，记录色谱峰峰面积，结果峰面积的RSD为0. 3%，表明供试品溶液24h内放置较稳定，基本无变化。

2.7 回收率试验：采用加样回收法，取2.6项下已测知含量的马尾连(多叶唐松草)粉末每份约0.10g，精密称定，分别加入高、中、低浓度的对照品溶液，制备供试品溶液，根据“2.2”项下条件进样测定，计算出回收率，回收率为103.65%，RSD为1.0%，本方法的回收率符合要求。

2.8 耐用性实验：采用同一根色谱柱(Diamonsil)分别用Waters e2695、Agilent高效液相色谱仪，测定同一批样品，含量结果Rd为1.7%；采用不同厂家的色谱柱( Diamonsil C18，5μm，4.6mm×200mm)、(Waters C18，5μm，4.6mm×250mm)、(Thermo C18，5μm，4.6mm× 150mm)，测定同一批马尾连(多叶唐松草)样品，分离度均较好，峰形均较对称。这一实验结果更好的验证了此含量测定的方法适用于不同色谱仪，不同色谱柱。

2.9 多叶唐松草测定结果：取5组马尾连(多叶唐松草)药材，来自不同产地，分别按“2.1.2”项下条件制备供试品溶液，根据“2.2”项下条件进样测定，计算含量，结果见表1。

表1 马尾连含量测定结果

3 讨 论

马尾连具有抗菌作用，与黄连抗菌谱相似，从马尾连和黄连中分别提取的小檗碱，二者无论是抑菌范围或是抑菌强度均表现一致性。[2]有文章研究选择盐酸小檗碱作为控制指标进行检测唐松草植物中的总生物碱类含量，山东中药材标准2012年版将盐酸小檗碱作为马尾连的指标性成分，2015年版中国药典将盐酸小檗碱作为黄连的指标性成分，因此，选用盐酸小檗碱作为马尾连的考察指标。

本实验从环保角度考虑，选择乙醇-盐酸溶液为提取溶剂，更优于甲醇作为提取溶剂。选用盐酸小檗碱的紫外检测波长为265nm，此波长处盐酸小檗碱有较大吸收。采用HPLC法建立多叶唐松草中盐酸小檗碱的含量测定方法。能更好的控制马尾连其中一种基源(多叶唐松草)的质量，此方法简单可靠，易于操作，准确，重现性好。对不同产地的马尾连样品分析，结果表明盐酸小檗碱的含量有差别。可能由于产地等方面因素，笔者将进一步研究产地与质量的影响。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010.附录22.

[2] 中国医学研究院药学研究所.中药志[M].北京：人民卫生出版社，1979.264～266.

[3] 李时珍.本草纲目[M].北京，人民卫生出版社，1982.888～894.

[4] 张永红，朱琳，任棣.唐松草属植物叶的扫描电镜观察与鉴别[J].兰州医学院学报，1998，24(3)：21～23.

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.056

1006-6233(2017)01-0165-03

河北省承德市科技计划自筹经费项目，(编号：201601A010)