标本溶血对重氮法测定胆红素的影响

韦晓星 杨丽珍 杨况甜 韦雪丹 黎宇

摘要：目的 探讨标本溶血对重氮法测定胆红素结果的影响。方法 选取健康者的血标本检测溶血前和溶血后总胆红素、直接和间接胆红素的测定值。结果 溶血时标本的总胆红素测定值与不溶血时的测定值无明显变化，无统计学意义（P>0.05）；溶血时标本的直接和间接胆红素测定值与不溶血时的测定值有显著差异，具有统计学意义（P<0.05）。结论 严重溶血对直接和间接胆红素的测定结果影响显著。

关键词：溶血；重氮法；测定；总胆红素；直接胆红素

Effect of Hemolysis on Heavy Nitrogen Determination of Bilirubin

WEI Xiao-xing1，YANG Li-zhen1，YANG Kuang-tian1，WEI Xue-dan1，LI Yu2

（1.Department of Blood Transfusion ，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China；2.Department of Clinical Laboratory，The Fourth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Liuzhou 545005，Guangxi，China）

Abstract：Objective To study the effect of hemolysis on the results of the determination of bilirubin by the method of hemolysis. Methods The blood samples from healthy subjects were selected to detect the total bilirubin， direct and indirect bilirubin before and after hemolysis. Results The total bilirubin hemolysis specimens was no obvious change and determination of hemolysis value was not statistically significant （P>0.05）； hemolysis direct and indirect bilirubin were measured values were significantly different from those determined not hemolysis values were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Severe hemolysis has a significant influence on the results of direct and indirect bilirubin.

Key words：Hemolysis； Diazo method； Determination；Total bilirubin； Direct bilirubin

血清胆红素是用于诊断肝胆疾病和鉴别黄疸性质的重要指标[1]。但在实际临床标本检测中，溶血已经成为影响其检测结果准确性的重要原因之一。本文用人造溶血标本，对溶血前与溶血后标本进行检测，意在分析溶血对胆红素测定结果的影响。

1资料与方法

1.1一般材料 选取到我院体检的健康成年人血清60例，要求体检者肝肾功能在正常范围内及各项指标基本正常，无相关疾病及药物使用史。标本无黄疸、溶血或高脂血状态。

1.2仪器和试剂 罗氏全自动生化分析仪D2400和P800及罗氏配套检测总胆红素、直接胆红素试剂；离心机为湖南湘仪L-530低速台式离心机。

1.3检验方法

1.3.1所选取标本以3000 r/min离心10 min分离血清，用罗氏全自动生化学分析仪检测每份标本中总胆红素、直接和间接胆红素含量，并记录好数据。

1.3.2用真空注射器反复抽打标本中的血液，使其发生溶血后离心分离血清，根据肉眼观察溶血尽量为严重溶血程度。

1.3.3用罗氏全自动生化分析仪再次检测溶血后的3组血清胆红素含量，记录好数据并进行对比分析。

以上所有检验操作严格按照厂家提供的说明书及科室制定的SOP文件执行。

1.4统计学处理 实验数据以均数±标准差（x±s）表示，两组数据比较采用t检验。

2结果

溶血前标本的总胆红素与溶血后的测定值无明显变化，无统计学意义（P>0.05），而溶血后直接和间接胆红素有显著异常，差异均具有统计学意义（P<0.05），见表1。

3讨论

在正常情况下，血清中的胆红素大部分是由衰老红细胞凋亡破坏所释放的血红蛋白分解代谢而来。释放的血红蛋白在肝、脾及骨髓等网状内皮细胞中分解成珠蛋白和血红素，后者由单核吞噬系统细胞微粒体血红素加氧酶的催化，生成一种胆绿素的产物，胆绿素被还原酶还原成未结合胆红素即间接胆红素。在肝脏中，未结合胆红素被肝细胞摄取后，在肝细胞滑面内质网中的酸葡萄糖醛酸基转移酶的催化下，与葡萄糖醛酸结合生成结合胆红素即直接胆红素。当机体内发生溶血时，红细胞被大量破坏，血液中非结合胆红素形成增多，而结合胆红素变化程度不大。

本文实验结果表明标本溶血对总胆红素的测定值无明显影响，但对直接胆红素和间接胆红素的测定结果影响显著。其主要原因为在血液标本发生严重溶血时，红细胞的血红素成分进入到血清，使得血清颜色变红，背景变暗，阻碍了仪器比色的光路传导和透射，降低了仪器光路接收器对检测光线的接收识别的敏感性和识别力，导致直接胆红素测定结果大大偏低，甚至出现负值。同时，总胆红素测定值基本无变化，由于间接胆红素不是直接测定项目，其结果为总胆红素值减去直接胆红素的值换算出来，因此间接胆红素出现假性增加的结果。且随着溶血程度的加重，偏离程度也会加深。再者，血清中的结合胆红素可直接与重氮试剂反应生成偶氮胆红素，而非结合胆红素需要加速剂方可与重氮试剂反应生成偶氮胆红素。溶血后大量的血红蛋白可竞争性的抑制直接胆红素与重氮试剂反应而生成的偶氮胆红素减少，也还可以被亚硝酸氧化為高铁血红蛋白干扰吸光度的测定[2]，导致直接胆红素测定结果低于真值。此外，当血液离体后，其生物活性依然存在，标本中单核吞噬系统仍然具有将血红蛋白转变为未结合胆红素的能力[3]，使间接胆红素升高。

综上所述，标本溶血对胆红素检验结果的影响较大。如何有效的减少溶血对胆红素检测的影响，除了相关医护人员在标本采集、运送中避免溶血之外，检验人员要做好仪器的定标、质控及校准，在接收标本或上机操作中，如发现标本为溶血状态，应当主动与临床医生联系，结合临床排除体内溶血的可能。若不是体内溶血，建议重新采集标本或备注标本溶血并做合理的误差分析。只有相关医务人员共同把关，才能确保标本检测结果的质量，帮助临床医生更好的掌握患者的真实病情及指导用药。

参考文献：

[1]李怀玉.人为标本溶血对重氮法检测胆红素结果的影响[J].广西医学，2005，27（3）：369-370.

[2]陈美舟，蔡啸.常见分析前因素对临床生化日常检验项目的影响[J].内蒙古中医药，2012，7：92-93.

[3]科温主编，胡金麟主译.病理生理学手册[M].第1版.北京：科学出版社，2002：585.

编辑/丁一