不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷d的含量影响

董金石

摘 要：本文对不同炮制工艺对北柴胡中成分含量的影响进行研究。固定相为：依利特hypersil BDS C18色谱柱（4.6*250*5u），以乙腈、水梯度洗脱为流动相，检测波长为203nm；柴胡皂苷d在50～950μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好、回收率高，可用于不同北柴胡炮制品中柴胡皂苷d的含量测定。

关键词：北柴胡；炮制；测定

北柴胡（BupleurumchinenseDC.）别名：硬苗柴胡（东北药用植物图志）、竹叶柴胡（植物名实图考）、韭叶柴胡（安徽）、津柴胡等。北柴胡分布于我国东北、华北、华东、中南、西南及陕西、甘肃等地。柴胡属多年生草本药用植物，能解表和里、升阳、疏肝解郁。柴胡主治感冒、上呼吸道感染、肋痛、肝炎、胆道感染、胆囊炎、疟疾、寒热往来、脱肛等。《本草正义》记载：“约而言之，柴胡主治，止有二层，一为邪实，则为外邪之在半表半里者，引而出之，使达于表而外邪自发；一为正虚，则为清气之陷于阴分者，举而升之，使返其宅，胃中气自振。”本文对不同炮制工艺对北柴胡中成分含量的影响进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器RephiLe Direct-Pure Genie 超纯水系统（上海乐枫生物科技有限公司）；LC3000分析等度高效液相系统（北京创新通恒科技有限公司）；德国美诺G7883实验室清洗消毒机（科德恩（北京）科技发展有限公司）；HX-06超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）；UV-6双光束扫描型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；TGF-9075A电热恒温鼓风干燥箱（上海喆图科学仪器有限公司）；普利赛斯 EP125SM 电子天平（上海天美天平仪器有限公司）。

1.2 试药：三乙胺（天津市康科德科技有限公司）、冰乙酸（山东佳泰石油化工有限公司）、乙腈（成都三维化工有限责任公司）、磷酸（济南世纪通达化工有限公司）、盐酸（济南世纪通达化工有限公司）、甲醇（济南世纪通达化工有限公司）、磷酸氢二铵（天津市康科德科技有限公司）、冰醋酸（天津市康科德科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u）；流动相以乙腈为A，水为B，按下表梯度洗脱；检测波长为203nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按柴胡皂苷d峰计算应不得低于2000。

2.2 炮制品的制备

2.2.1 醋制。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥，加醋拌匀，焖透，置锅内，用文火炒干，取出，放凉。每公斤柴胡，用醋0.2公斤。

2.2.2 鳖血制。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥，置大盆内，淋入用温水少许稀释的鳖血，拌匀，焖润，置锅内用文火微炒，取出，放凉。每公斤柴胡，用活鳖2个取血。

2.2.3 酒制。取柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥，用黄酒拌匀，焖润手诱，置锅内用文火加热炒干，取出，放凉。每公斤柴胡，用黄酒0.1公斤。

2.2.4 炒制。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥，用文火炒至微焦，取出，放凉。

2.2.5 制炭。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥，用文火炒至外黑内褐黄色，喷入少量水，取出，晾干。

2.2.6 蜜制。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥.取蜜置锅内，加热至沸，倒入柴胡片，用文火炒至深黄，不粘手为度。

2.2.7 蜜麸制。柴胡除去杂质及残茎，洗净，润透，切厚片，干燥.将麦麸炒热，加入蜂蜜，炒至不粘手时，加入柴胡片，炒至药材表面显黄色为度，取出，过筛，晾凉。每公斤柴胡，用麦麸0.03公斤，蜂蜜0.01公斤。

2.3 供试品溶液的制备

取北柴胡适量，粉碎成粗粉，精密称定至容量瓶内，加适量5%浓氨试液的甲醇流动相超声20分钟，放凉，过滤，用甲醇多次冲洗残渣和容器，将冲洗液和滤液合并，水浴蒸干，残渣用50%乙腈溶解并转移至10毫升容量瓶内，用50%乙腈定容，过0.45μm的滤膜，即得。

2.4 对照品溶液的制备

精密称取柴胡皂苷d对照品约10mg，置5毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取1毫升，置10毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含柴胡皂苷d 200μg）。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为50μg·mL-1、150μg·mL-1、250μg·mL-1、350μg·mL-1、450μg·mL-1、550μg·mL-1、650μg·mL-1、750μg·mL-1、850μg·mL-1、950μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，柴胡皂苷d对照品在50～950μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取柴胡皂苷d对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.69%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批北柴胡样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.63%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品柴胡皂苷d峰面积积分值的RSD为0.56%。结果表明柴胡皂苷d至少在4h内稳定。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定北柴胡三批样品中柴胡皂苷d的含量，结果柴胡皂苷d含量生柴胡〉蜜麸制〉蜜制〉醋制〉酒制〉鳖血制〉炒制〉制炭。

参考文献

[1]李媛媛，秦雪梅，张丽增，郭小青.不同品种柴胡药材和饮片中皂苷类成分的质量评价[A].2006第六届中国药学会学术年会论文集[C].2006.

[2]谭铭铭，晁志.广州市售柴胡药材中柴胡皂苷a的ELISA检测[A].广东省植物学会第十九期学术研讨会论文集[C].2010.

[3]刘伟，郭蕾，范婷，董诚明，陈志红.生长期不同施肥方法对柴胡中柴胡皂苷a、d含量的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010年01.

[4]胡杰，刘晓节，秦雪梅，张丽增，郭小青.HPLC法测定柴胡皂苷前处理酸化条件的优化及相关分析方法的评价[A].2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C].2008.

[5]李军，姜华，张延平，王新胜，李晓明，尹卫平，王忠东.柴胡皂苷b2对照品的制备研究[A].第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].2009.