固相萃取-液相色谱法在食品中罗丹明B检测中的运用

□ 罗长琴 重庆市万州食品药品检验所

固相萃取-液相色谱法在食品中罗丹明B检测中的运用

□ 罗长琴 重庆市万州食品药品检验所

随着人们对食品安全的关注越来越高，发展出了多种检测食品添加剂、农残、激素残留、苏丹红以及三聚氰胺等毒害物质的检查技术，固相萃取-液相色谱（SPE-LC）技术就是其中的一种。本文首先介绍了固相萃取-液相色谱法的应用优势，并分析了固相萃取-液相色谱法的应用原理，最后以食品中罗丹明B的检测为例，探讨了固相萃取-液相色谱法的运用。

固相萃取-液相色谱法；食品检测；罗丹明B检测

1 固相萃取-液相色谱法的应用优势及原理分析

随着人们对生活品质的关注，对食品安全的要求也越来越高。不少食品安全机构都对食品中的有害物质作出了残留量上限规定，并随着时间推移，这些规定的标准越来越低，使得对监测技术的要求也有所提高。目前，食品安全检测工作中的常见技术有液相色谱（LC）和液相色谱-质谱（LCMS），以及气相色谱（GC）和气相色谱-质谱（GC-MS）等多种方式，但这些方式检测时间长、耗费资源大且样品制备十分复杂[1]。因此，应用效益有待提高。而固相萃取-液相色谱法的出现，则有效解决了这一问题。固相萃取技术有人工操作方便、萃取彻底、易于收集被测物以及节约有机溶剂等优势，对实现简单、快速、经济、有效的食品分析，起到了良好的作用。

固相萃取-液相色谱法，是一个包含有液相和固相的物理萃取过程，其通过利用选择性吸附与选择性洗脱分离原理进行相应的检测。在具体的固相萃取中，由于固相吸附较溶解分离物的吸附力更大，当样品通过检测活动经过吸附剂床时，分离物会吸附于固相物体表面，而其他样品成本则不被吸附，这样就能确保在检测过程中获得高纯度的、浓缩的分离物[2]。或者反过来说，可以选择吸附干扰杂质的物质，从而得到被测物质溶液。另外，固相萃取-液相色谱法还可以选择吸附被测物质及杂质，再通过相应的溶剂选择性洗脱测定物质。

2 固相萃取-液相色谱法在食品中罗丹明B检测中的运用

运用固相萃取-液相色谱法检测食品中的罗丹明B，可利用高效液相色谱荧光检测器（HPLC-FLD）测定和提取净化食品中的罗丹明B，其主要包括以下几个步骤。

2.1 准备好试剂及仪器设备

固相萃取-液相色谱法，所需试剂包括甲醇（色谱纯）、正己烷（分析纯）、甲醇饱和的正己烷（每100 mL正己烷＋5 mL甲醇，静止分层后取上层使用），以及去离子水等。所需要的设备包括电子天平、固相萃取仪、高效液相色谱仪及荧光检测器、旋转蒸发仪、氮吹仪、OASISHLB小柱（200 mg，6 mL）、0.45 μm针式过滤器和超声波清洗机等。

2.2 准备好标准工作溶液

首先，选择高纯度的罗丹明B，其纯度以99%为佳。其次，通过电子天平，精准选取适量的罗丹明B标准品，利用甲醇制作出浓度100 μg/mL的标准溶液。标准溶液需在避光条件下保存，且温度需要控制在-18 ℃以下。最后，选取适量的标准溶液进行配置。按照工作曲线溶液的要求，分别配置成1、5、10、20、50 ng/mL以及100 ng/mL的标准工作溶液，注意避光保存。

2.3 进行样品处理

首先，要初步提取。样品可分为油脂类产品（主要为食用油）、含油脂类产品（如辣椒酱、辣椒粉、腊鱼、腊肉、香肠以及饼干薯片等）和低含油脂产品（包括果酱、果汁、蜜饯、糖果等）。油脂类产品取1 g，含油脂类产品取2～5 g，低油脂类产品取5 g，将样品放入50 mL的具塞离心管内。适量添加少量纯净水润湿样品，再加入0.1%甲酸含量的甲醇溶液10 mL。之后通过超声波提取4 000 r/min离心，15min后，用滴管（一次性）吸取上层澄清甲醇，并通过另一离心管内提取液过滤到新的离心管内。对样品需重复提取两次，并合并提取液。其次，对上述的提取液进行混合10 mL容量甲醇饱和过的正己烷，经30 s旋涡混合后，可在60 ℃的水浴中加快分层。等到界面清晰后，通过吸出正己烷的方式，达到去除脂溶性色素的目的。之后加入5 mL正己烷进行重复操作。对丢弃的正己烷可加入10 mL甲醇（0.1%甲酸的甲醇），就能进行反提取操作。注意合并甲醇，之后在85 ℃的水浴中挥干，待到剩余2～3 mL时，再加入5 mL容量的5%甲醇水溶液。最后，运用5 mL水和5 mL甲醇对固相萃取柱进行平衡与活化，再将所有分配的液体，分数次分步骤地加入到小柱中。用5 mL纯净水清洗离心管，之后准入小柱之中，再以60%甲醇的水溶液10 mL淋洗小柱，并用85%甲醇的水溶液10 mL进行洗脱罗丹明B的操作。之后，收集洗脱液放置在60℃水浴中，经氮气流吹干。再用甲醇定容1 mL后，经过0.45 μm滤膜，就能进行HPLC分析操作。

3 结语

经过固相萃取-液相色谱法在食品中罗丹明B检测中的具体运用，能有效按照色谱条件及结果检测食品中的罗丹明B，其方法不仅灵敏度高，且回收率好，大大降低了检测成本，有很好的推广效益。

[1]曹鹏,乔旭光,娄喜山,等.固相萃取结合超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的6种工业染料[J].分析化学,2011(11):1670-1675.

[2]阮成旭,陈梅兰,王晓丽,等.食品中罗丹明B快速检测方法的建立与实现[J].中国食品学报,2015(6):167-172.