CEACAM-1和VEGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

马 赛， 安 峰*， 胥爱文， 王 芹， 刘 博， 张 利， 李立恒

(1河北北方学院附属第一医院口腔颌面外科, 张家口 075000; 2河北北方学院附属第一医院病理科； *通讯作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)



CEACAM-1和VEGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

马 赛1， 安 峰1*， 胥爱文1， 王 芹1， 刘 博2， 张 利1， 李立恒1

(1河北北方学院附属第一医院口腔颌面外科, 张家口 075000;2河北北方学院附属第一医院病理科；*通讯作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)

目的 探讨癌胚抗原相关细胞黏附分子-1(CEACAM-1)和VEGF在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的表达及其与肿瘤侵袭、转移的相关性。 方法 采用免疫组织化学方法检测CEACAM-1和VEGF在40例SACC和40例癌旁正常涎腺组织中的表达情况，分析二者的阳性表达与SACC 临床病理因素的关系及其在SACC 病变中的相关性。 结果 SACC组中CEACAM-1蛋白阳性表达率为62.50%，明显高于正常涎腺组织的12.50%；SACC组中VEGF蛋白阳性表达率明显高于正常涎腺组织，差异显著(72.50%vs17.50%,P<0.001)；SACC组中中低分化者CEACAM-1和VEGF 阳性表达率明显高于高分化病者，Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期，伴淋巴结转移、肺转移、脉管浸润组的阳性表达率明显高于不伴淋巴结转移、无肺转移和无脉管浸润者(P<0.05)；而不同性别、年龄及病变部位的CEACAM-1和VEGF阳性表达率则无明显统计学差异(P>0.05)；且CEACAM-1和VEGF在SACC中的表达呈正相关(r=0.545，P<0.001)。 结论 CEACAM-1和VEGF与SACC的发生、发展、侵袭、转移密切相关，二者可能在SACC的演进中存在协同作用，相互影响。

涎腺腺样囊性癌； CEACAM-1； VEGF

涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系常见的涎腺恶性肿瘤之一，病理类型以腺癌居多，侵袭性生长，恶性度较高，早期即可出现局部扩散或血行转移，因而预后较差[1,2]。癌胚抗原相关黏附分子-1(CEACAM-1)系癌胚抗原家族重要成员之一，属于免疫球蛋白一族，大量文献显示CEACAM-1可介导肿瘤细胞黏附，调节肿瘤细胞增殖、凋亡、分化，参与肿瘤血管、淋巴管生成过程，促进肿瘤细胞侵袭、迁移，抑制免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤[3,4]。血管内皮生长因子(VEGF)是迄今发现体内特异性最高的血管内皮分裂原，能刺激血管内皮细胞增殖，诱导肿瘤微血管形成，是肿瘤生长、侵袭、浸润、转移过程中重要的物质基础与关键环节[5]。目前，国内关于CEACAM-1在SACC组织表达的相关报道较少，其在SACC组织中的浸润转移机制并不明确，本实验以CEACAM-1在SACC病变的关系为中心，通过免疫组化检测CEACAM-1和VEGF在SACC组织中的表达及与临床病理特征之间的关系，并分析二者的相关性，为临床精准诊疗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料来源

收集2010-06～2015-06河北北方学院附属第一医院口腔颌面医学科手术切除的SACC组织40例，癌组织取自癌灶中心处，另取切缘经病理证实为癌旁正常组织40例。依据2005年WHO关于SACC病理分型及TNM分期，筛孔型15例，实体型11例，管状型14例；TNMⅠ+Ⅱ期23例，Ⅲ+Ⅳ期17例；小涎腺12例，大涎腺28例。所有患者均为原发性肿瘤，其中男 ∶女为26 ∶14,年龄40-62(52±2.7)岁。

1.2 免疫组化染色方法及试剂

兔抗人单克隆浓缩型CEACAM-1抗体、VEGF抗体均购于Santa Cruz公司, DAB显色试剂盒购于博士德公司。

石蜡包埋、切片，3%甲醇-H2O2室温孵育10 min，灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗，滴加10%正常山羊血清封闭游离的结合位点，滴加一抗、二抗，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗，滴加辣根酶HRP标记链霉卵白素工作液，PBS洗3次，DAB显色、复染、梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.3 CEACAM-1、VEGF阳性判定标准

CEACAM-1和VEGF均以细胞膜和细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性表达，根据染色程度及染色细胞百分率进行评定和分析。染色程度：基本不着色为0分，着色淡为1分，着色适中为2分，着色深为3分；染色细胞百分率：无为0分，<25%为1分，25%-50%为2分，>50%为3分。染色程度得分与染色细胞百分率得分各自相乘：0-1分为阴性(-)，2-3分为(+)，4-6分为(++)，6分以上为(+++)[6]。

1.4 统计学方法

运用SPSS17.0统计软件分析整理数据，用百分率表示计数资料，采用χ2检验分析 CEACAM-1和VEGF的表达与临床病理参数的关系，相关性分析采用Spearmen检验，设P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CEACAM-1和VEGF在SACC组织中的表达及相关性

SACC 组中的CEACAM-1和VEGF阳性表达高于癌旁正常组(见图1)。SACC 组中的CEACAM-1阳性表达率为62.50%(25/40)，明显高于癌旁正常组的12.50%(5/40)，差异有统计学意义(χ2=17.934，P<0.001)；SACC 组中的VEGF阳性表达率为72.50%(29/40)，明显高于癌旁正常组的17.50%(7/40)，差异有统计学意义(χ2=19.271，P<0.001)。

图1 免疫组化检测腮腺组织中CEACAM-1、VEGF蛋白的阳性表达 (SP,×200)Figure 1 Expression of CEACAM-1 and VEGF in parotid tissues of SAAC and normal tissues by immunohistochemistry (SP,×200)

2.2 CEACAM-1和VEGF的表达与SACC临床病理参数间的关系

CEACAM-1和VEGF在中/低分化组织中的表达率高于高分化者，在Ⅲ+Ⅳ期的阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴结转移、肺转移组织中的阳性表达率远高于无淋巴结转移、无肺转移者，在伴脉管浸润组织中的阳性率远高于无脉管浸润者，以上差异均有统计学意义(均P<0.05，见表1)，而二者在性别、年龄及肿瘤部位中的表达则无明显差异(均P>0.05，见表1)。

2.3 SACC组中CEACAM-1和VEGF表达的相关性

SAAC组中CEACAM-1和VEGF共同阳性者21例，共同阴性7例，符合一致率为70.00%(28/40)两者呈明显正相关(r=0.545，P<0.001，见表2)，表明CEACAM-1和VEGF在SAAC病变的发生、进展过程中具有协同作用。

表1 CEACAM-1和VEGF阳性表达与SACC临床病理参数的关系 例(%)

Table 1 Positive expression of CEACAM-1and VEGF in SACC tissue and its correlation with clinical pathological features cases(%)

临床病理参数nCEACAM-1表达VEGF表达阳性χ2P阴性χ2P性别1.1050.3061.5420.203 男2616(61.54)19(73.07) 女149(64.26)10(71.43)年龄1.4550.2131.1760.301 ≥50岁2416(66.67)18(75.00) <50岁169(56.25)11(68.75)肿瘤部位1.0710.3982.9470.106 小涎腺127(58.33)8(66.67) 大涎腺2818(64.29)21(75.00)病理分级10.8470.0009.6220.002 中/低分化2522(88.00)23(92.00) 高分化153(50.00)6(40.00)TNM分期5.1790.0227.2580.006 Ⅰ+Ⅱ2311(47.83)13(56.52) Ⅲ+Ⅳ1714(82.35)16(94.12)淋巴结转移6.2590.0146.2810.013 有1412(85.71)13(92.86) 无2613(50.00)16(61.54)肺转移6.6340.0127.8170.005 有76(85.71)7(100.00) 无3319(57.58)22(66.67)脉管浸润7.0460.0078.6500.003 有98(88.89)9(100.00) 无3117(54.84)22(70.97)

表2 SACC组中CEACAM-1和VEGF表达的相关性

Table 2 Correlation of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues

CEACAM-1VEGF+-合计rP+214250.5450.000-8715合计291140

3 讨论

CEACAM-1系癌胚抗原家族中最保守的基因，位于染色体19q13.2区域，由9个外显子，11个亚型构成，其中多数亚型内含CEACAM1-L和CEACAM1-S2个亚组，前者内含72-74个氨基酸残基，后者内含12-14个氨基酸残基[7，8]。CEACAM1-L内含2个免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)，能通过磷酸化参与多个细胞内信号传导，发挥其抑制下游信号的作用，而CEACAM1-S内含原肌球蛋白、钙调蛋白及肌动蛋白的结构域，对维系细胞骨架有重要的调节作用[9]。CEACAM-1广泛表达于内皮细胞、上皮细胞、各类粒细胞、淋巴细胞和肿瘤细胞中，除以少数分泌形式分布于体液中外，大多数以跨膜形式表达于细胞中。研究表明：CEACAM-1在乳腺癌、肝癌、大肠癌、泌尿系肿瘤等恶性肿瘤中的表达明显降低，其沉默或下调在恶性肿瘤发生过程中发挥重要作用，因而CEACAM-1属抑癌基因，能抑制肿瘤细胞的增殖[10,11]；但近年来相关文献报道CEACAM-1在胃癌、肺癌、甲状腺癌、黑色素瘤等恶性肿瘤中呈高表达，且与肿瘤的恶性生物学行为呈正相关[12-14]，从这方面考虑，CEACAM-1系致癌基因，因而目前认为CEACAM-1在肿瘤发生、进展中有双重作用。

VEGF作为一种特异性极高血管内皮分裂原，能促进内皮细胞变形、迁移，分化和增殖，通过与VEGF-3等受体结合引起一系列信号传导，释放FGF、EGF等因子来诱导内皮细胞生成新生血管[15]。

本研究结果表明，CEACAM-1和VEGF在SACC组织中的阳性表达远高于癌旁正常组织，因而CEACAM-1在SACC的病变过程中发挥致癌作用。且其在中、低分化组织中的表达明显高于高分化组织，其与SACC的TNM分期、肺转移、淋巴结转移及脉管浸润等均具有一定相关性，进一步分析显示二者在SACC病变中呈正相关。CEACAM-1能够促进肿瘤新生血管的形成，Zhu等[16]研究显示：在肿瘤新生血管内皮细胞中CEACAM-1表达异常增高，而在成熟的各类血管中几无表达，且通过外源性CEACAM-1刺激肿瘤血管内皮细胞后，肿瘤细胞的增殖、迁移、浸润及微血管腔形成的能力均有明显提高，考虑在促血管生成的机制中CEACAM-1是VEGF一个极其重要的效应分子，即CEACAM-1通过某种信号传导可诱导VEGF表达上调，从而促进血管生成。Kilic等[17]研究显示：CEACAM-1的高表达会引起VEGF、VEGFR-2、Tie-2、angiopoietin-1、IL-8等血管形成因子表达上调，且CEACAM-1高表达能促进微血管内皮细胞向血管生成表型转化。而Najjar等[18]应用CEACAM-1抗体封闭血管内皮细胞后发现，微血管的生成转化过程几乎停滞。

总之，CEACAM-1的异常表达参与SACC的发生、进展，并与血行浸润、转移等恶性生物学行为相关，其诱导VEGF的过表达可能是促进其发展的重要途径之一，因而，对二者作用机制的深入探讨将有望为SACC精准化诊疗提供科学依据。

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Expression of CEACAM-1 and VEGF in salivary adenoid cystic carcinoma and its clinical significance

MA Sai1, AN Feng1*, XU Aiwen1, WANG Qin1, LIU Bo2,ZHANG Li1, LI Liheng1

(1DepartmentofOralMaxillofacialSurgery,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China;2DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity；*Correspondingauthor，E-mail:yfyanfeng@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of CEACAM-1 and vascular endothelial growth factor(VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma(SACC) and its relationship with invasion and metastasis.MethodsThe expression of CEACAM-1 and VEGF in 40 cases of SACC and 40 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationships between their expression and clinicopathologic features in SACC were analyzed.ResultsThe positive expression rate of CEACAM-1 was significantly higher in SACC tissues than those in tumor adjacent normal tissues(62.5%vs12.5%,P<0.001).The positive expression rate of VEGF was significantly higher in SACC tissues than that in tumor adjacent normal tissues (72.5%vs17.5%,P<0.001).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were higher than those in patients without metastasis, respectively(P<0.05).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF were significantly higher in stage Ⅲ+Ⅳ patients than those in stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05),higher in middle-low differentiation patients than those in high differentiation patients(P<0.05), and also higher in vascular invasion patients than those in non-vascular invasion patients(P<0.05).There was no significant difference in positive expression of CEACAM-1 and VEGF among different gender, age and tumor size.There was a positive correlation beween the positive expression of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues(r=0.545,P<0.001).ConclusionThe expression of CEACAM-1 and VEGF may be closely correlated to the invasion and metastasis of SACC, and they may both paly important roles in the progression of SACC.

salivary adenoid cystic carcinoma; CEACAM-1; VEGF

河北省医学科学研究重点课题资助项目(20150059)；河北省政府资助临床医学优秀人才培养和基础课题研究项目(361009);河北张家口市科学技术研究与发展指导计划资助项目(1421128D)

马赛，男，1984-09生，硕士，主治医师

2016-09-28

R739.8

A

1007-6611(2016)11-1022-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.016