免疫透射比浊法多点非线性校准在脂蛋白(a)测定中的应用

张汉园，曹风华，王 斌

(江苏省镇江市中西医结合医院检验科 212003)



·论 著·

免疫透射比浊法多点非线性校准在脂蛋白(a)测定中的应用

张汉园，曹风华，王 斌

(江苏省镇江市中西医结合医院检验科 212003)

非线性校准； 脂蛋白(a)； 免疫透射比浊法

随着全自动生化分析仪技术日趋完善，免疫透射比浊法正逐渐成熟，应用越来越广泛。免疫透射比浊法中抗原抗体的结合需要经过3个阶段，导致吸光度变化与被测物水平变化呈非线性关系[1]。多点非线性校准是采用多个水平的标准物质在特定波长下，测定出各自的吸光度值，采用不同水平和所测吸光度值之间的关系，绘制成非线性曲线[2]。脂蛋白(a)作为心脑血管疾病的独立危险因素指标，需选择较可靠的检测方法，以保证结果的准确性[3]。本院Beckman AU680生化仪上有2种多点非线性校准方法：Y=aX2+bX+c和Spline曲线。本研究旨在建立更准确地体现免疫透射比浊法测定脂蛋白(a)整个反应过程的最佳曲线，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取临床患者血清标本200例，另采用4个标准定值血清(由试剂厂商提供)。

1.2 仪器与试剂 检测仪器为Beckman AU680型全自动生化分析仪。脂蛋白(a)检测试剂盒及配套标准品均由万泰生物技术有限公司提供。

2 结 果

2.1Y=aX2+bX+c和Spline曲线图 见图1、2(拍摄于AU680生化分析仪操作电脑)。

图1 Y=aX2+bX+c曲线

2.2 2组数据对比 见表1、2。

2.3 结果分析 2个曲线图充分反映2种非线性多点校准方法间的差异。从AU680自动生化分析仪的多点非线性校准中得知，Spline计算公式为Y=anX3+bnX2+cn+dn，采用最小二乘法的三次曲线拟合而成，可得出光滑曲线，也能将测定误差拟合到曲线中，属于函数逼近的范围。Spline曲线将每个转折点的数据作为非线性曲线的1个数据点，充分满足统计数据中的数值。Y=aX2+bX+c曲线2次函数的拟合曲线，属于线性或很近似线性的计算方法，其尽量满足统计数据中的数值，在非线性分析中应用十分广泛。

2个表格显示了实际临床应用中所得数据的不同之处。采用Y=aX2+bX+c曲线时，0～100 mg/L组、>400～600 mg/L、>600～800 mg/L组的脂蛋白(a)测定值比Spline曲线所得值高；>100～200 mg/L组和>200～400 mg/L组的脂蛋白(a)测定值却恰恰相反，采用Spline曲线所得值较高。4个标准定值血清在2种多点定标方式条件下分别进行测定，Spline曲线的测定值更接近靶值；而Y=aX2+bX+c曲线所得值中，>100～200 mg/L组和>200～400 mg/L组所得值偏低，>600～800 mg/L组所得值偏高，这与表1临床患者血清标本结果一致。

图2 Spline曲线

表1 血清脂蛋白(a)对比

表2 4个标准定值血清脂蛋白(a)对比

3 讨 论

国内外已有电泳法、散射和透射免疫比浊法等多种方法测定脂蛋白(a)，其中免疫透射比浊法快速、准确、精密，且适合于各种类型生化自动分析仪，特别适用于大批量标本的测定[4]，本研究拟在现有试剂盒基础上，对标准方式作进一步探讨。免疫透射比浊法反应体系中，待测成分作为抗原出现，与反应体系中的相应抗体发生反应，形成抗原-抗体复合物。同时，试剂中的聚乙二醇可消除抗原-抗体蛋白的水化层，加速抗原-抗体复合物的形成，增加其稳定性。通过仪器进行透射光强度测定，可取得水平和吸光度数据的相关关系。由于抗原与抗体结合过程中吸光度与水平间不呈线性关系，标准曲线拟合即为使用数学方法体现上述相关关系，其关键在于选择拟合曲线类型，需要根据标准水平和吸光度值，建立1条曲线，使所有点在总体上尽量接近[5]。

此前的生化分析仪比色系统基于朗伯-比尔定律，校准曲线往往为直线，不具备非线性拟合能力。而现代全自动生化分析仪功能相当完善，其校准曲线拟合功能齐全，往往具备多种数学函数方程供非线性拟合时使用[6]，如线性函数、多项式函数、指数函数、对数函数、样条函数、多参数的对数值对数函数等[7]。测定结果的准确与否很大程度上取决于是否采用适当的曲线拟合。采用合适的曲线拟合，能大大改善检验结果的准确性。

本研究结果显示，Spline曲线更客观，能更准确地体现免疫透射比浊法测定脂蛋白(a)的整个反应过程。脂蛋白(a)水平升高与冠状动脉粥样硬化的发生有着密切的关系，是当前心、脑血管疾病极有价值的危险性预测指标[8]，需选择较可靠的检测方法，以保证结果的准确性。有研究建立芯片电泳分离血清脂蛋白及其亚型的方法并初步探讨其临床应用价值，结果表明基于纳米技术的芯片电泳可快速、简便地测定脂蛋白及其亚型[9],对评价心、脑血管疾病的危险因素,实现对冠状动脉粥样硬化的早期检测、预防及有效制订防治策略具有重大意义[10]。

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[5]骆春艳.不同标准曲线拟合模式对化学发光免疫分析测定结果的影响[J/CD].世界最新医学信息文摘(电子版),2013,13(5):40.

[6]董晓妮,张文灏.关于免疫透射比浊法测定波长选择的探讨[J].检验医学,2013,28(3):210.

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Application of immune transmission turbidimetry multipoint nonlinear calibration in lipoprotein(a) determination

ZHANGHanyuan,CAOFenghua,WANGBin

(DepartmentofClinicalLaboratory,ZhenjiangMunicipalHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,Zhenjiang,Jiangsu212003,China)

nonlinear calibration; lipoprotein(a); immune transmission turbidimetry

张汉园，女，主任技师，主要从事临床生物化学方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.016

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1673-4130(2016)22-3137-03

2016-04-17

2016-06-23)