血小板血型抗体与妊娠次数及复发性流产关系的研究

汤洁，赵莹莹，魏威，闫素文，张宁

（中国人民解放军第202医院优生优育研究所，辽宁 沈阳 110003）

血小板血型抗体与妊娠次数及复发性流产关系的研究

汤洁，赵莹莹，魏威，闫素文，张宁

（中国人民解放军第202医院优生优育研究所，辽宁 沈阳 110003）

目的：检测血小板血型抗体在孕妇血清中的表达情况，分析其与妊娠次数及复发性流产的关系。方法：选择2015年4月至12月，在解放军第202医院优生优育研究所进行产前检查的100例初产妇、100例经产妇（妊娠次数≥2次）及100例诊断为复发性流产患者为研究对象，收集其孕龄第16～28周的外周血血样，利用固相凝集法检测各组血清中血小板抗体的表达情况。结果：初产妇组、经产妇组及复发性流产组分别检测出血小板血型抗体阳性5、14和26例，卡方分析结果显示妊娠次数及复发性流产发生率与血小板血型抗体阳性率呈显著相关性（P＜0.05）。结论：采用固相凝集法筛查产前血小板血型抗体表达情况可为复发性流产提供诊断和治疗依据。

血小板血型抗体；复发性流产；固相凝集法；产前筛查

复发性流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指与同一性伴侣连续发生2次或2次以上妊娠并自然流产者。其病因复杂，包括遗传因素、内分泌因素、感染因素、内生殖器官解剖异常以及自身免疫因素等，但仍有60%～80%的患者病因不明，称为原因不明复发性流产。复发性流产发生机制复杂，生殖免疫学已成为阐述其发生发展的重要切入点［1］。母胎血小板血型不合的妊娠可使母体产生抗胎儿血小板抗体，导致胎儿血小板破坏，使胎儿或新生儿血小板数目减少，从而引发早期流产、新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜或复发性流产［2］。因此对适龄孕妇，特别是诊断为复发性流产患者产前进行血小板血型抗体的筛查及研究有着极其重要的作用。为进一步探讨血小板血型抗体与复发性流产的关系，本研究采用固相凝集法，检测了孕龄为16～28周的100例初产妇、100例经产妇（妊娠次数≥2次）和100例复发性流产孕妇血清标本中血小板血型抗体的表达情况，及血小板血型抗体阳性率与妊娠次数及复发性流产的相关性。

1　资料与方法

1.1研究对象和标本采集选择2015年4月至12月在解放军第202医院优生优育研究所就诊的初产妇100例，年龄24～34岁；经产妇100例（阳性对照），年龄26～38岁；复发性流产孕妇100例，年龄25～34岁。经产妇组纳入标准：（1）妊娠次数≥2次；（2）无不良妊娠史。复发性流产组纳入标准：（1）妊娠28周前连续2次以上（含2次）自然流产；（2）流产原因为非胚胎遗传因素、母体因素和胚胎异常因素。收集各组孕妇孕龄第16～28周的外周血，离心后收集血清标本。

1.2仪器与试剂固相凝集法血小板血型抗体检测试剂盒和指示细胞购自长春博德生物技术有限责任公司，TXL-4平板式血小板专用低速离心机购自长沙湘智离心机仪器有限公司。

1.3实验方法向反应孔中滴加50 μl血小板悬液，轻摇反应板约10 s。用平板式低速离心及以50×g离心5 min，使血小板固定在反应孔底部。倒出反应孔中液体，并用滴管滴加洗涤工作液清洗3次，最后一次洗涤后将反应板置于吸水纸上吸干残余液体。而后立即向每个反应孔中滴加100 μl低离子强度溶液，并分别向反应孔中加入50 μl患者血清样本、阳性对照及阴性对照。将反应孔用封口胶封好，轻摇混匀后置于湿盒中37℃水浴孵育30 min。取出已孵育完毕的反应板，弃去封口胶，洗涤反应板5次。立即加入50 μl抗人IgG及50 μl指示红细胞，轻轻振荡混匀。200×g离心5 min。将检测孔与对照孔的结果进行比较，判读并记录检测结果。

1.4结果判定阳性结果：指示红细胞平铺在反应孔底部表面，若指示红细胞只结合到部分孔底，并且结合区域比阴性对照大为弱阳性，表明患者血清中含有血小板血型抗体。阴性结果：指示红细胞在反应孔底部中央形成红细胞聚集，表明患者血清不含血小板血型抗体。

1.5统计学分析采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。计数资料相关性分析采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

初产妇、经产妇及复发性流产孕妇血清中分别检测出血小板血型抗体阳性例数、血小板血型抗体阳性率的具体结果见表1。初产妇与经产妇血小板血型抗体阳性率差异有统计学意义（χ2= 4.711，P=0.030）；初产妇与复发性流产孕妇血小板血型抗体阳性率差异有统计学意义（χ2= 16.835，P＜0.01）。经产妇与复发性流产孕妇血小板血型抗体阳性率差异有统计学意义（χ2=4.500，P=0.034），见表1。

表1　3组孕妇血小板血型抗体阳性率比较

3　讨论

妊娠是一个复杂而又协调的过程，从免疫学角度看，正常妊娠过程中母体对胚胎半同种异体抗原表现为妊娠免疫耐受状态。而自然流产则是多种原因导致母胎界面免疫耐受失衡的结果。目前认为复发性流产与母胎界面免疫耐受失衡导致的母胎免疫排斥密切相关，除此之外母胎界面过强的炎症反应也是导致复发性流产的始动因素。CD4+T细胞在母胎界面免疫耐受中发挥着巨大的作用。既往研究认为妊娠期母体对胎儿的半同种异体抗原的免疫耐受有赖于Th1/Th2细胞的免疫平衡，正常妊娠时Th1/Th2平衡偏向Th2，Th1处于抑制状态，从而保护胎儿免受Th1细胞的攻击。若Th1/Th2平衡偏向Th1，则将导致复发性流产的发生。近年来，越来越多的研究表明血小板血型抗体与复发性流产密切相关，其可能的机制为胎儿与母亲血小板血型不合，当胎盘破裂时，胎儿的血小板进入母体血液，使母体产生血小板血型抗体，进而导致流产。本研究与既往文献相符，初产妇血清中血小板血型抗体阳性率为5%左右［3］；且经产妇血清中血小板血型抗体的阳性率较初产妇显著增高［2，4］。既往文献显示，血小板血型抗体主要成分为IgG抗体，其在妊娠第14周即可通过母胎免疫屏障，使胎儿体内血小板破坏，进而导致胎儿或新生儿血小板减少，引起早期流产和复发性流产［5］。因此，在早期流产和复发性流产患者孕14周后筛查血小板血型抗体就显得尤为重要［6-7］。

本研究利用固相凝集法检测了100例初产妇、100例经产妇和100例复发性流产孕妇血清标本中血小板血型抗体的表达情况，结果显示，复发性流产孕妇血清标本中的血小板血型抗体阳性率显著高于初产妇和（或）经产妇，提示血小板血型抗体在复发性流产孕妇血清中阳性表达率的升高可能与复发性流产的发生、发展密切相关。值得注意的是，与既往文献相似，本研究显示经产妇血清标本中的血小板血型抗体阳性表达率亦显著高于初产妇，提示血小板血型抗体与妊娠次数密切相关［2］。

综上所述，本研究检测了初产妇、经产妇和复发性流产孕妇血清标本中血小板血型抗体的表达，并进一步卡方检验分析了各组间差异的统计学意义。结果显示，血小板血型抗体与妊娠次数和复发性流产密切相关。孕期筛查血小板血型抗体，对防治复发性流产有着重要的意义。

［1］Tang AW，Quenby S.Recent thoughts on management and prevention of recurrent early pregnancy loss［J］.Curt Opin Obstet Gynecol，2010，22（6）：446-451.

［2］杜振军.妊娠对女性血小板抗体的影响［J］.国际输血及血液学杂志，2012，35（5）：402-405.

［3］刘凌，帅虎，李流娇，等.固相凝集法在产前血小板抗体检测中的临床意义［J］.检验医学及临床，2012，9（11）：1360-1361.

［4］辛文龙，薛阳，厉勇.3947例孕妇产前血清免疫学检查结果分析［C］.中国医师协会输血分会2013年第七届输血学术年会论文集.

［5］李勇，马学严.实用血液免疫学血型理论和实验技术［M］.北京：科学出版社，2006：283-303．

［6］付涌水，夏文杰，叶欣，等.广州地区汉族人群人类血小板同种抗原及HLA-I抗原基因分型库的建立［J］.中国输血杂志，2009，22（4）：274-277．

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（杨秀梅编辑）

Relationship between Platelet-specific Alloantibody and Gravidity or Recurrent Spontaneous Abortion

TANG Jie，ZHAO Yingying，WEI Wei，YAN Suwen，ZHANG Ning
（Department ofAristogenesis，No.202 Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

Objective：To investigate the expression of platelet-specific alloantibody in the sera of primipara，pluripara，and recurrent spontaneous abortion（RSA）patients，and analyze the relationship between platelet-specific alloantibody and gravidity or RSA.Methods：A total of 100 primipara，100 pluripara（gravidity≥2）and 100 RSA patients who

prenatal examination in department of aristogenesis，No.202 Hospital of PLA from Apr 2015 to Dec 2015 were recruited.The blood samples were collected during 16-28 weeks of pregnancy，and the expression of platelet-specific alloantibody was detected by solid-phase red cell adherence assay.Results：There were 5 positive platelet-specific alloantibody in primipara group，14 in red all pluripara group，and 26 in RSA group.Platelet-specific alloantibody was significantly associated with gravidity and the incidence of RSA（P＜0.05）by chi-square analysis.Conclusion：Screening the expression of platelet-specific alloantibody during pregnancy can provide evidence for the diagnosis and treatment of RSA.

platelet-specific alloantibody；recurrent spontaneous abortion；solid-phase red cell adherence assay；prenatal screen

R714.21

A

1008-2344（2016）06-0445-02

10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.06.008

军队临床高新技术重大项目（No.2010gxjs003）

汤洁（1964—），女（汉），副主任技师.研究方向：复发性流产免疫失衡的分子机制.E-mail:yicongtang@hotmail.com

2016-05-16