婴幼儿食品和乳品中VA与VE的测定

吴 坤，刘娟娟，李 晓，邹 力

（陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

婴幼儿食品和乳品中VA与VE的测定

吴 坤，刘娟娟，李 晓，邹 力

（陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

建立反相高效液相色谱法，同时测定食品中VA和VE（α-生育酚）的方法。取一定量乳粉加入水、VC的乙醇溶液、氢氧化钾，于53℃条件下皂化30 min，立刻冷却，乙腈提取，提取液调至中性，进样20 μL分析。选择色谱条件为C18柱色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm，流动相为甲醇，流速1.0 mL/min，柱温35℃，检测波长325 nm。结果表明，VA在0.1～1.0 μg/mL质量浓度范围内线性良好，相关系数R2=0.999 8；VE在1.0～5.0 μg/mL质量浓度范围内相关系数R2=0.999 0；VA和VE的平均回收率在95%以上。该法前处理简单快捷、分离度高、灵敏度高且准确可靠，大大提高了实验室的工作效率。

高效液相色谱；VA；VE

VA，又名视黄醇，是最早被发现的维生素。患VA缺乏病常有营养不良、慢性腹泻、慢性痢疾、麻疹后长期忌嘴、畏光、不明眨眼等合并症，人体摄入过量的VA而引起中毒综合征［1］。VE（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一［2-3］。多溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感，由于这2种维生素在外界环境中不稳定，易受光、氧等影响而被氧化破坏，影响因素较多，因此寻找合适的测定方法同时测定VA和VE仍然是目前检验技术的难点。

1 试验方法

α-淀粉酶，酶活力≥1.5 U/mg；甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；乙醇，色谱纯；甲酸，优级纯；氢氧化钾水溶液，称取固体氢氧化钾250 g，加入200 mL水溶解；VC的乙醇溶液（15 g/L）。

VA标准储备液（视黄醇） （100 μg/mL）：准确称取10 mg的VA标准品，用乙醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

VE标准储备液（α-生育酚） （500 μg/mL）：准确称取50 mg的VE标准品，用乙醇溶解并定容于100 mL棕色容量瓶中。

注：VA，VE标准储备液均须-10℃以下避光储存。

高效液相色谱仪（配有二极管检测器）、漩涡混匀器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司产品；SHA-C型恒温振荡器，常州国华有限公司产品；超纯水机，成都超纯科技有限公司产品；离心机，北京医用离心机厂产品；天平，赛多利斯科学仪器有限公司产品。

（1）称取混合均匀的固体试样约1 g或者液体试样约10 g（精确到0.001 g）于50 mL离心管中，固体试样用45～50℃的水2 mL使其溶解，混合均匀。加入5 mL VC的乙醇溶液，充分混匀后加入4 mL氢氧化钾水溶液混匀，放入恒温振荡器，温度控制在53±2℃，水浴振荡30 min后，取出立刻冷却至室温。于离心管中加入20 mL乙腈，剧烈振荡10 min，以转速3 000 r/min离心3 min，取出上清液于另一刻度试管中，加入15 mL乙腈重复提取1次，合并上清液。用甲酸调至中性，定容至40 mL。过0.45 μm有机滤膜，上机测定。

（2）称取混合均匀的固体试样约1 g或者液体试样约10 g（精确到0.001 g）于150 mL三角烧瓶中，加入α-淀粉酶0.5 g，固体试样需用10 mL 45～50℃的水使其溶解，混合均匀后充氮，盖上瓶塞，置于60±2℃培养箱内培养30 min。取出后按上述“加入5 mL VC的乙醇溶液……”步骤处理。

色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm；柱温35℃；流速1.0 mL/min；检测波长325 nm；进样量20 μL；流动相：甲醇。

分别吸取一定量VA标准储备液，用乙醇定容配置成质量浓度分别为0.1，0.2，0.4，0.8，1.0 μg/mL。

分别吸取一定量VE标准储备液，用乙醇定容配置成质量浓度分别为1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μg/mL。

2 结果与讨论

方法验证数据见表1。

表1 方法验证数据

自动进样20 μL标液进行分析，记录各待测组分色谱峰面积，以质量浓度为横坐标X、峰面积为纵坐标Y，进行回归分析。由表1可知，VA和VE在0.1～5.0 μg/mL范围内线性关系良好。

3 实际样品结果

VA结果见表2，VE结果见表3。

表2 VA结果

表3 VE结果

4 结论

本方法同时测定乳粉中VA和VE，该方法样品预处理简单、分离度高，相比国标，结果更稳定，明显提高了检测效率，且其准确性和重复性好，具有推广应用的实际意义。

［1］GB 5413.9—2010婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定 ［S］.北京：中国标准出版社，2010.

［2］GB/T 5009.82—2003食品中维生素A和维生素E的测定 ［S］.北京：中国标准出版社，2003.

［3］ 唐静，苗延霞.液相色谱仪最小检测浓度测量结果不确定度评定 ［J］.中国计量，2010（10）：100-101.◇

Establish A reversed phase high performance liquid chromatography and determination of vitamin A and vitamin E in foods（alpha tocopherol） method.Powder add certain amount of water and ethanol solution of vitamin C and potassium hydroxide，53℃ saponification for 30 min，cooling immediately，acetonitrile extraction，extract to neutral and sample analysis of 20 μL.Chromatographic conditions：chromatographic column C18column，250 mm×4.6 mm，size 5 μm，mobile phase：methanol flow，rate 1.0 mL/min，column temperature 35℃，detection wavelength of 325 nm.The vitamin A has good linear concentration range at 0.1～1.0 μg/mL，correlation coefficient R2=0.999 8，vitamin E has concentration range correlation as 1.0～5.0 g/mL coefficient R2=0.999 0.Vitamin A and vitamin E，the average recovery is above 95%.Before the deal with simple and quick，high degree of separation，high sensitivity and accurate and reliable，greatly improving the efficiency of the laboratory.

high pressure liquid chromatography（HPLC）；VA；VE.

1671-9646（2016）09a-0041-02

TS207.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.09.014

2016-06-27

吴 坤（1985— ），女，本科，助理工程师，研究方向为食品农副产品的检验。