霉变药材的微性状鉴定

杨青山，张倩倩，周建理

(1.安徽中医药大学中药资源中心，安徽 合肥　230012；2.安徽省中医药科学院中药资源保护与开发研究所，安徽 合肥　230012；3.北京同仁堂股份有限公司科学研究所，北京　100079；4.国家中药材产品质量监督检验中心，安徽 亳州　236800)



霉变药材的微性状鉴定

杨青山1,2，张倩倩3，周建理4

(1.安徽中医药大学中药资源中心，安徽 合肥230012；2.安徽省中医药科学院中药资源保护与开发研究所，安徽 合肥230012；3.北京同仁堂股份有限公司科学研究所，北京100079；4.国家中药材产品质量监督检验中心，安徽 亳州236800)

目的建立一种可快速检测霉变中药材和饮片的方法。方法选择甘草、三七、菊花、金银花、金钱草、番泻叶、黄芩、党参和白果9种中药材，以洒水和温室放置的方法使药材霉变，用水洗法、刷霉法、颠簸法除去药材表面霉菌后，在普通生物显微镜下观察药材的微性状特征。结果在8种药材的裂隙或凹陷处等不易洗刷部位可观察到菌丝和孢子囊，残留的菌丝和孢子数量因药材表面粗糙程度和裂隙大小而异，只有1种表面光滑的白果药材不易观察到霉变特征。结论微性状鉴定法可以快速检测一些经过水洗、刷霉、颠簸等方法处理过的霉变药材。

中药材；霉变；微性状鉴定

霉变是引起中药材质变的常见现象之一。药材霉变后会造成有效成分的降解，产生的霉菌毒素也会给患者带来危险[1]，再次进入市场又将给中药的临床应用带来安全隐患。然而目前一些地方或是商家对霉变中药材的处理方法不妥当，如晒干后抖去或刷去菌丝，甚至把霉变药材浸在水中，通过反复的摩擦碰撞洗去霉变中药材表面的霉，再曝晒至干[2]。这样处理后的药材往往因霉变被掩盖又再次混入市场[3]，而按要求对于霉变严重的药材只能作废品处理，决不能重新进入药材市场[4-5]。但目前对这种霉变药材的检验和鉴定仍无有效的方法，而中药微性状鉴定法是借助光学显微镜等仪器观察中药材表面肉眼不易察觉的细微性状特征，并以此作为鉴定依据的一种鉴别方法，它能够观察到许多传统的性状鉴定看不到、显微鉴定又看不清的药材特征信息[6]。本研究应用微性状鉴定法观察霉变药材表面残存的菌丝和孢子囊，以鉴别药材是否发生霉变，为霉变药材的鉴定提供参考。

1　仪器与材料

1.1仪器普通生物显微镜(XSZ-G)； DCM-500型500万像素电子目镜；Photoshop软件(CS4官方中文正式版)。

1.2材料本实验所需药材取自安徽中医药大学中药资源中心，见表1。

2　方法

2.1霉变药材模型复制将所选药材分别装入小塑料袋中，滴入或喷洒适量的水以增加湿度，密封至室温(15～30 ℃)下放置。数日后可观察到部分药材表面有白色或绿色霉菌出现。

2.2洗霉刷霉将发霉药材取出，放入水中洗去药材表面的霉后，或晒干后刷去药材表面霉(金银花仅用颠簸法碰撞除去菌丝)，留待观察。

2.3微性状鉴定

2.3.1前准备工作打开计算机，将电子目镜的USB接口与计算机相连接，打开光源，打开电子目镜的应用软件。

2.3.2微性状观察将上述标本固定于载玻片上，置于显微镜视野中，调节载物台及粗、微调旋钮，观察菌丝存在的部位(一般在缝隙和褶皱处菌丝较多)。

2.3.3图片的拍摄转动微调，用Phmias 2008 Cs Ver 3.0 Demo软件由上至下或者由下至上在不同焦距下连续拍摄，可得到一组不同景深条件下的图片。

2.3.4图片的合成使用景深合成技术[7]，将一组图片用Photoshop CS4软件进行合成，可得到清晰的图片。

3　结果

通过对上述实验材料进行微性状观察，可以看出多数药材虽经过水洗、刷霉或是颠簸，仍然可以在药材裂隙或凹陷处等不容易洗刷到的部位看到菌丝和孢子囊；但不同种类的药材由于表面粗糙程度和裂隙大小不一，残留的菌丝数量不同，但结果均可以通过微性状鉴定法观察到。在甘草(图1A)、番泻叶(图1E)和黄芩(图1G)表面观察到较少菌丝；在三七(图1B)、菊花(图1C)、金银花(图1D)、金钱草(图1F)和党参(图1H)表面观察到较多菌丝。菊花、金银花、番泻叶和金钱草表面不但有残留的菌丝，还有大量的霉菌孢子，而其他4种根类药材表面较少。

表1　实验材料及观察部位

此外，金银花表面有密集的毛茸，且与菌丝相似，不易区别，但经仔细观察，可以看出菌丝明显较毛茸细长，网状分枝并互相缠绕，色泽也较亮白透明。

图1水洗后的霉变甘草(A)、刷霉后的霉变三七(B)、颠簸后的霉变菊花(C)、颠簸后的霉变金银花(D)、水洗后的

霉变番泻叶(E)、水洗后的霉变金钱草(F)、刷霉后的霉变黄芩(G)和水洗后的霉变党参(H)的微性状特征

(红色箭头示菌丝，白色箭头示霉菌孢子，黑色箭头示金银花非腺毛，标尺示0.2 mm)

4　讨论

霉变对药材品质的影响很大，周华等[8]研究发现，葛根中总黄酮的含量为5.30%，严重霉变后仅为1.96%；葛根素含量也从4.9%降为1.15%。且霉变产生的真菌会产生真菌毒素等次级代谢产物，如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素[9]。这些真菌毒素的毒性较强，对肝、肾和机体免疫功能均表现出毒性，并具有致畸形、致癌变和致突变的“三致”作用，对使用者的身体健康和生命安全带来严重威胁[10]。因此，在中药材和中药饮片的验收过程中对霉变项的检查工作十分重要。虽然有报道药材霉变后的处理方法多种多样，有撞刷法、淘洗法、酒洗去霉法、醋洗法、油擦法等[11]。但不管哪一种方法去掉的也仅仅是药材表面的霉菌，而药材皱折及裂隙处的霉菌是不易洗掉的，这种隐形的霉变特征为微性状鉴别法检测提供了条件。但也由此可见霉变药材在临床上应用会存在一定的安全隐患。笔者后期还将根据药材霉变程度不同，进一步对霉变药材包括表层和深入到组织结构之中的细微变化进行观察研究，为霉变药材的深入检测提供研究基础。本研究仅就霉变药材的鉴定方法进行先行介绍，将对不同霉变程度药材外观性状特征及其内在物质基础的变化情况进行深入研究。

2015年版《中华人民共和国药典》针对霉变药材相关的文字描述仅有“药材和饮片外观不得有虫蛀、发霉、其他物质污染等异常现象”[12]一句话，没有收载可行的检测方法，导致对霉变药材的认定难以形成规范。实际检测、验收过程中对霉变药材的判定仅依赖于验收人员的经验，用眼观、鼻闻；主要检验是一看菌丝，二看菌斑，三闻霉味。而这些方法存在着一定的局限性，如果药材被洗刷，用肉眼很难看到菌丝；药材颜色稍深则不易看到菌斑；多数药材本身具有一些特殊气味，气味较重的药材也很难闻出霉味。本研究说明中药微性状鉴别法是目前检测霉变药材和饮片的有效方法。

[1]秦筱茂,郭顺星.药材霉菌及霉菌毒素污染现状分析[J].中国中药杂志,2011,36(24):3397-3400.

[2]李莉,杨青山,周建理.中药微性状鉴定法快速鉴别掺杂、霉变药材探讨[J].中外医疗,2012,31(3):191-192.

[3]周建理,王华,齐雪萍.对霉变中药材的处理方法探讨[J].安徽医药,2008,12(12)：1246-1247.

[4]田慧英,解玉梅.中药贮存过程中的致霉因素及预防措施[J].长春中医学院学报,1994,10(45):51.

[5]祝文娟.中药材霉变的防治[J].哈尔滨医药,2004,24(6):54.

[6]周建理,杨青山,曹海燕，等.景深合成技术在植物光学微形态研究上的应用[J].生物学通报,2011,46(9):57-58.

[7]周建理,杨青山.中药微性状鉴定法[J].安徽中医学院学报,2011,30(1):66-68.

[8]周华,乐巍.霉变对葛根药材品质的影响[J].山东中医杂志,2011,30(3)：197-198.

[9]Peraica M, Radic B, Lucic A, et al.Toxic effects of mycotoxins in humans[J].B World Health Organ, 1999,77(9):754-766.

[10]刘秋桃,孔维军,杨美华,等.储藏过程中易霉变中药材的科学养护技术评述[J].中国中药杂志,2015,40(7):1223-1229.

[11]张金香.中药霉变的预防与处理[J].内蒙古中医药，2009,28(10)：13.

[12]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015：附录18.

Identification of Microscopic Characteristics of Medicinal Materials with Mildew and Rot

YANGQing-shan1,2,ZHANGQian-qian3,ZHOUJian-li4

(1.ChineseMateriaMedicaResourceCenter,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 2.InstituteofTraditionalChineseMedicineResourcesProtectionandDevelopment,AnhuiAcademyofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China; 3.ScientificResearchInstituteofBeijingTongrentangPharmaceuticalCompany,Beijing100079,China; 4.NationalQualitySupervisionandInspectionCenterforChineseMedicinalMaterialsProducts,AnhuiBozhou236800,China)

ObjectiveTo establish a method for rapid detection of mildew and rot in Chinese medicinal materials and decoction pieces. MethodsA total of nine Chinese medicinal materials were selected, i.e., Radix Glycyrrhizae, Radix Notoginseng,Chrysanthemummorifolium,Lonicerajaponica,Lysimachiachristinae, senna,Scutellariabaicalensis, Codonopsis Radix, and Ginkgo Semen. Watering and placement in the greenhouse were applied to cause mildew and rot, and the water washing method, mildew brushing method, and turbulence method were used to remove the moulds on the surface of medicinal materials. A biological microscope was used to observe the microscopic characteristics of medicinal materials. ResultsHyphae and sporangia were observed in the cracks and folds of eight medicinal materials, and the numbers of hyphae and sporangia varied with the roughness of the surface of medicinal materials and the size of cracks. Mildew characteristics were not observed in only 1 medicinal material, Ginkgo Semen. ConclusionIdentification of microscopic characteristics helps with the rapid detection of medicinal materials with mildew and rot which have been treated by water washing, mildew brushing, and turbulence methods.

Chinese medicinal material; Mildew; Identification of microscopic characteristics

国家自然科学基金项目(81303177)

杨青山(1985-)，男，硕士，讲师

周建理，jlzhou55@sina.com

R282.5[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2016.05.025

2016-06-20；编辑：姚实林)