凋亡细胞及过氧化物酶体增殖物激活受体γ在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义

邹　娜，刘远远，裘　娟，姜　丹，于　水，蒋　奇

(大连市妇女儿童医疗中心 病理科，辽宁 大连 116037)



凋亡细胞及过氧化物酶体增殖物激活受体γ在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义

邹娜，刘远远，裘娟，姜丹，于水，蒋奇

(大连市妇女儿童医疗中心 病理科，辽宁 大连 116037)

目的研究中间型滋养细胞的凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义。方法收集2014-2016年间大连市妇女儿童医疗中心住院分娩的正常妊娠晚期(正常组)、轻度子痫前期(轻度子痫前期组)及重度子痫前期(重度子痫前期组)产妇胎盘组织，各30例。采用 TUNEL法检测3组胎盘底板中间型滋养细胞的凋亡并计算凋亡指数(AI)，采用免疫组化S-P法检测PPARγ的表达情况。结果正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组胎盘滋养细胞的AI分别为1.5860±0.2541、5.2609±2.8643及9.0000±6.2763，呈增高趋势，各组间差异有显著性意义(P<0.05)。PPARγ在正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组的表达阳性率分别为46.7%，93.3%，100%，呈增强趋势，各组间差异有显著性意义(P<0.05)。子痫前期胎盘组织中PPARγ与凋亡细胞的表达呈正相关(r=0.591,P<0.05)。结论PPARγ可能通过诱导胎盘滋养细胞的凋亡参与子痫前期的发病。

中间型滋养细胞；子痫前期；细胞凋亡；PPARγ

[引用本文]邹娜，刘远远，裘娟，等.凋亡细胞及过氧化物酶体增殖物激活受体γ在子痫前期患者胎盘中的表达及临床意义[J].大连医科大学学报，2016,38(5)：432-435.

妊娠期高血压疾病是妊娠期特发性疾病，子痫前期是该疾病的常见类型，其发病原因及机制尚不明确。目前认为滋养细胞浸润能力下降导致“胎盘浅着床”，少数子宫螺旋动脉不发生“血管重铸”，是引起子痫前期发病的重要原因[1]。有学者提出胎盘植入过浅可能与滋养细胞过度凋亡密切相关[2]，胎盘滋养层细胞凋亡失调可能是导致子痫前期发生的重要病因[3]。近年来有研究发现过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)不仅对滋养细胞的浸润、分化是必须的，而且对滋养细胞的成熟、母胎转运的建立也是不可或缺的[4]，其表达异常可能参与了子痫前期的发病，并与病情的严重程度相关[5]。在肝癌与胰腺癌肿瘤中的研究表明，激活PPARγ，能通过下调促凋亡基因Bcl-2及上调凋亡基因Bax，而抑制肿瘤细胞的生长增殖，促进肿瘤细胞凋亡[6]。目前有关胎盘滋养细胞凋亡与PPARγ在子痫前期发病中的相关性研究甚少。本研究通过TUNEL法及免疫组化S-P法检测正常妊娠晚期、轻度子痫前期及重度子痫前期患者胎盘底板中间型滋养细胞的凋亡指数及PPARγ的表达，探讨它们与子痫前期的发病关系。

1　材料和方法

1.1材料来源

收集2014-2016年间大连市妇女儿童医疗中心住院分娩的正常妊娠晚期(正常组)、轻度子痫前期(轻度子痫前期组)及重度子痫前期(重度子痫前期组)产妇的胎盘组织，各30例。3组间产妇年龄、孕周均无统计学差异(P>0.05)。子痫前期的诊断及分类标准参照第八版《妇产科学》[7]。各组产妇均无烟、酒等特殊嗜好，既往无特殊病史、无其他妊娠合并症及并发症。3组产妇均为单胎，为避免顺产过程中产道对胎盘组织挤压的影响，本实验所选用的胎盘均于剖宫产术中采集，均经产妇知情同意。胎盘娩出后立即剪取胎盘母体中央1 cm×1 cm×1 cm大小胎盘组织，避开出血、钙化及机化灶。生理盐水漂洗后置于10%中性甲醛溶液24～48 h，常规石蜡包埋，连续4 μm切片。

1.2检测方法

1.2.1原位末端标记法(TUNEL)检测3组胎盘底板中间型滋养细胞的凋亡

参照中杉金桥凋亡试剂盒说明，切片经脱蜡、水化、漂洗，滴加蛋白酶K孵育15 min，过氧化氢浸泡玻片5 min；滴加TUNEL反应液暗室中37 ℃下孵育60 min；滴加Converter-POD在37 ℃水浴箱中孵育30 min；DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。光学显微镜下进行滋养细胞凋亡指数的计算。

1.2.2免疫组化S-P法检测PPARγ蛋白在3组胎盘底板中间型滋养细胞中的表达

按照PPARγ免疫组化试剂盒说明，切片经脱蜡、水化、漂洗，滴入过氧化物酶阻断溶液孵育5 min；高压抗原修复后山羊血清封闭10 min，滴加一抗(兔抗人PPARγ多克隆抗体)室温放置40 min，用PBS代替一抗作为阴性对照；PBS冲洗后滴加生物素化二抗，室温下放置40 min；DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。镜下观察并拍照。兔抗人PPARγ多克隆抗体、SP型免疫组化试剂盒及DAB染色液(聚合物法)试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3结果判定

凋亡指数(AI)：高倍视野下计数1000个滋养细胞中核着黄色的凋亡细胞数所占百分比。免疫组化半定量标准：PPARγ表达于细胞核，以细胞核出现黄色或棕黄色染色为阳性细胞。每张切片随机选择10个高倍镜视野，计数阳性细胞数并计算阳性细胞率，阳性细胞率≤5%为(-)，5%～25%为(+)，26%～50%为(++)，>50%为(+++)。

1.4统计学方法

采用 SPSS17.0 统计软件进行数据处理，对凋亡指数比较采用均数的t检验；对PPARγ表达水平的比较采用卡方检验；并采用Pearson等级相关分析法对二者的相关性进行分析，P<0.05为有统计学意义。

2　结　果

2.1凋亡细胞在胎盘组织中的表达

凋亡细胞核着黄色或棕黄色，同时细胞核呈不同程度的固缩状态，形态各异，可呈圆形、分叶状和不规则形。正常组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组胎盘底板中间型滋养细胞的凋亡指数分别为1.5860±0.2541、5.2609±2.8643及9.0000±6.2763，呈增高趋势，各组间差异有显著性意义(P<0.05)。见图1。

图1　胎盘中间型滋养细胞中的凋亡细胞Fig 1 Apoptosis cells in the intermediate trophoblast of the placentalA：正常组；B：轻度子痫前期组；C：重度子痫前期组

2.2 PPARγ在胎盘组织中的表达

PPARγ主要表达于中间型滋养细胞的胞核中，核着黄色或棕黄色，在正常组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组的阳性率分别为46.7%、93.3%及100%，3组间的表达强度呈增强趋势，各组间差异有显著性意义，P<0.05。见表1，图2。

表1　PPARγ在各组产妇胎盘组织中的阳性表达

图2　胎盘中间型滋养细胞中PPARγ的表达Fig 2 PPARγ expression in the intermediate trophoblast of the placental A：正常组；B：轻度子痫前期组；C：重度子痫前期组

2.3胎盘组织中PPARγ与凋亡细胞的表达相关性分析

子痫前期组患者胎盘组织中PPARγ与凋亡细胞的表达呈正相关(r=0.591,P<0.05)。

3　讨　论

PPARγ是一种配体启动的核转录因子，属II型核受体超家族成员。Barak等基于鼠的遗传学研究表明PPARγ不仅对滋养细胞的浸润、分化是必须的，而且对滋养细胞的成熟、母胎转运的建立也是不可或缺的[4]。Rodie等的研究显示PPARγ在正常妊娠胎盘组织滋养细胞中表达，随孕周的增加而表达增强，并参与滋养细胞浸润能力的调节[8]。本实验结果显示，PPARγ在正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组的表达强度呈增强趋势，各组间差异有显著性(P<0.05)，提示PPARγ表达异常可能参与了子痫前期的发病，并且随着子痫前期病情的加重而表达增强，这与Holdsworth等[5]的报道相一致。PPARγ在胎盘中表达增强可能抑制了胎盘滋养细胞的浸润能力，导致“胎盘浅着床”，胎盘血流灌注减少、胎盘缺血缺氧，造成子痫前期、胎儿宫内生长受限等一系列临床病理表现。

细胞凋亡是组织细胞接受并识别某些生理、病理刺激后，在特有的基因群调控下发生的程序性死亡，是机体维持组织器官自身稳态及正常形态、功能的一种手段和对环境中不良刺激的一种反应。大量的细胞凋亡是机体清除病理性受损组织的重要现象，也是病理过程发生发展的重要标志。有学者发现子痫前期患者的胎盘滋养细胞存在着明显的凋亡现象，从而导致滋养细胞分化异常、植入过浅[2]，胎盘无法从母体获得丰富的血供，使得母胎转运界面难以有效地建立，提示胎盘滋养细胞的凋亡异常可能构成子痫前期发生发展的核心环节[9-10]。本研究结果显示，正常妊娠晚期组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组的凋亡指数呈增高趋势，各组间差异有显著性(P<0.05)，提示细胞凋亡可能导致了子痫前期的病理过程，并与病情的严重程度相关，这与Alexander等[11]的报道相一致。

研究表明PPARγ的激活可通过调控细胞增殖及凋亡因子的表达发挥抗增殖及促凋亡的功能，本实验中PPARγ与凋亡细胞的表达呈正相关，提示PPARγ可能通过调控胎盘滋养细胞的凋亡进而抑制滋养细胞浸润能力，导致“胎盘浅着床”，滋养细胞侵袭性降低，部分子宫螺旋动脉不发生“血管重铸”，在子痫前期的发生发展中有着非常重要的作用。

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Clinical significance of apoptosis cells and PPARγ expression in the placenta of patients with preeclampsia

ZOU Na，LIU Yuan-yuan，QIU Juan，JIANG Dan，YU Shui，JIANG Qi

(DepartmentofPathology，DalianMunicipalWomenandChildren'sMedicalCenter，Dalian116037，China)

Objective To investigate the clinical significance of apoptosis index (AI) and PPARγ expression in the placenta of patients with preeclampsia. Methods The placenta tissues from normal-term pregnancy, light preeclampsia and severe preeclampsia patients (30 cases in each group) were collected from 2014-2016 years in Dalian Municipal Women and Children，s Medical Center. TUNEL was performed to measure AI and immunohistochemistry (S-P method) was used to detect PPARγ expression in intermediate trophoblast of placental floor. Results AI was 1.5860±0.2541, 5.2609±2.8643 and 9.0000±6.2763 in normal-term pregnancy group, the light preeclampsia group and the severe preeclampsia group, respectively (P<0.05). The PPARγ expression frequency was 46.7%, 93.3% and 100% in normal-term pregnancy group, the light preeclampsia group and the severe preeclampsia group, respectively (P<0.05). The AI was positively correlated with PPARγ expression in placenta of patients with preeclampsia (P<0.05). Conclusion PPARγ could involve in the pathogenesis of preeclampsia by inducing apoptosis of placental trophoblast cells.

intermediate trophoblast；preeclampsia; apoptosis; PPARγ

大连市医学卫生科学研究计划项目(2013)

邹 娜(1977-)，女，辽宁大连人，副主任医师。E-mail：408363000@qq.com

��著

10.11724/jdmu.2016.05.04

R615

A

1671-7295(2016)05-0432-04

2016-07-19；

2016-09-14)