江阴市无偿献血者RhD阴性血型调查

王芳，龚宏伟

（江阴市红十字血站，江苏214400）

江阴市无偿献血者RhD阴性血型调查

王芳，龚宏伟

（江阴市红十字血站，江苏214400）

目的了解江苏省江阴市RhD阴性无偿献血者ABO血型、血清学表型和不规则抗体分布情况，建立并完善RhD阴性献血者电子数据库。方法应用血清学方法对无偿献血者血标本进行RhD阴性筛查和确认、血清学表型鉴定、不规则抗体筛选。结果江阴市无偿献血者18 059份标本中共确认RhD阴性82份，阴性率为0.45%，在ABO血型中的分布为A＞O＞B＞AB，其中检出不规则抗体1份（1.22%）；RhD阴性表型以ccdee和Ccdee为主，依次为ccdee［51（62.20%）］、Ccdee［22（26.83%）］、CCdee［4（4.88%）］、ccdEe［3（3.66%）］、CcdEe［2（2.44%）］。结论掌握RhD阴性献血者的ABO血型、血清学表型、不规则抗体分布规律，对稀有血型患者的紧急用血及降低免疫性输血反应，提高输血安全具有重要意义。

ABO血型系统；Rh-Hr血型系统；表型；供血者；血型抗原；普查；不规则抗体；江苏

1　资料与方法

1.1资料

1.1.1标本来源江苏省江阴市2015年1～12月18 059份无偿献血者乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血液标本。

1.1.2试剂与仪器抗-A、抗-B血型定型试剂（河北医科大学生物医学工程中心）；（IgM+IgG）抗-D［Millipore（UK）Limited］；（IgG）抗-D、（IgM）抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、多特异性抗人球蛋白（上海血液生物医药有限责任公司）；改良凝聚胺试剂（中山生科试剂仪器有限公司）；抗体筛选红细胞（上海血液生物医药有限责任公司）；血型血清学专用离心机（日本KUBOTA KA-2200型）。

1.2方法（IgM+IgG或IgM）抗-D试剂采用微板法对无偿献血者标本进行初筛。初筛阴性者取其献血标本红细胞50 μL加生理盐水洗涤3次，配成2%～5%的红细胞悬液，用不同厂家或不同批次的（IgM+IgG或IgG）抗-D试剂3～5种做间接抗球蛋白试验（IAT）确认，排除变异型D和不完全D的可能，同时必须做试剂对照试验或直接抗球蛋白试验（DAT）。确认为RhD阴性者进一步用（IgM）抗-C、抗-c、抗-E、抗-e试剂进行表型分型。最后使用抗体筛选细胞，采用凝聚胺法对RhD阴性标本血清进行不规则抗体筛选。所有操作过程严格按照试剂说明书、标准操作规程操作。

2　结果

2.1江阴市RhD阴性无偿献血者ABO血型分布

18059份EDTA-K2抗凝血液标本共确认RhD阴性82份，阴性率为0.45%，在ABO血型中的分布为A＞O＞B＞AB，检出不规则抗体1份（1.22%）。见表1。

表1　江阴市RhD阴性无偿献血者ABO血型分布

2.2江阴市RhD阴性无偿献血者血清学表型分布

在确认的82份RhD阴性无偿献血者中，其血清学表型依次为ccdee、Ccdee、CCdee、ccdEe、CcdEe。见表2。

表2　江阴市RhD阴性无偿献血者血清学表型分布

3　讨论

江阴市献血人群RhD阴性比例为0.45%（82/1 8059），RhD阴性血型占人群中的比例符合我国汉族人群RhD阴性为0.2%～0.5%［4］的比例，其中表型依次为ccdee（62.20%）、Ccdee（26.83%）、CCdee（4.88%）、ccdEe（3.66%）、CcdEe（2.44%），以ccdee和Ccdee为主，与朱海峰等［5］和潘海平等［6］的报道一致。本次调查未检出ccdEE、CcdEE、CCdEe表型。82份RhD阴性献血者的ABO血型分布为：A型26份（31.71%），B型19份（23.17%），O型21份（25.61%），AB型16份（19.51%），基本符合江浙、皖、闽（华东型）地区普通人群中ABO血型（A型占30.0%，B型占25.3%，O型占38.1%，AB型占6.6%）的分布规律，AB型RhD阴性血所占比例相对较高。

Rh血型是因最初在恒河猴和多数人体内的红细胞上发现存在的抗原物质而得名，国际输血协会将其命名为RH，004。其基因位于第1对染色体，包括RHD和RHCE 2个结构基因，RHD和RHCE基因紧密连锁，结构基本一致，均主要由10个外显子和10个内含子组成，第1～7个外显子各自编码50～60个氨基酸，而第8～10个外显子编码余下的58个氨基酸。目前，Rh血型系统发现的等位基因已有280多个，主要具有临床意义的抗原有D、C、E、c、e。Rh抗原有很强的免疫原性，其抗原强弱顺序依次为D＞E＞C＞c＞e［7］，均显示剂量效应。Rh血型抗原只存在于红细胞膜上，不存在于其他组织细胞膜及体液、分泌液中。随着基因分子技术的不断发展，其越来越多的运用到Rh血型表型分子中，但血清学分型技术具有简便、快速、不需要特殊仪器设备等特点，目前仍起着举足轻重、不可替代的作用。

本次调查主要针对健康RhD阴性献血者，血清中检测出不规则抗体1例。随着现代输血技术的发展，由ABO血型不相容引起的急性溶血性输血反应已显著减少。近年研究表明，不规则抗体是引起迟发性溶血性输血反应的主要原因［8］，且不规则抗体以Rh血型系统产生的居多。Rh血型抗体最初是从一名发生严重新生儿溶血病和溶血性输血反应的产妇血液中发现的。天然产生Rh抗体者极少，即IgM类抗体少见，有时也可见到IgM类抗-E等抗体。Rh抗体主要通过免疫途径产生，如妊娠、输血等产生，绝大多数是IgG类，Rh抗体在体内可持续存在数年，如果再次接触该抗原，再次免疫应答可使抗体迅速产生并在短时间内达到高峰，该抗体最适反应温度是37℃。虽然D抗原免疫原性最强，但抗-D抗体检出频率并不高，这是因为现已对Rh阴性个体输注Rh阴性血液。目前临床上抗-E抗体是最常见的抗体，其次为抗-c抗体［9］，有些Rh抗体常一起发生，如抗-D和抗-C、抗-C和抗-e、抗-E和抗-c等常共存于同一血清内。Rh血型不合可引起严重的溶血性输血反应和新生儿溶血病［10］，甚至威胁患者生命。所以，对RhD阴性献血者进行不规则抗体检测对安全输血有着极其重要的意义。

冰冻红细胞又称冰冻解冻去甘油红细胞，是采用甘油作为冰冻保护剂深低温保存，红细胞代谢速度取决于保存温度，把保存温度降至使红细胞代谢率达到几乎停止时，红细胞代谢消耗少，从而可避免代谢毒性产物的积累，达到延长红细胞保存期的目的［11］。但血液在零度以下会结冰，在细胞内外形成冰晶，破坏细胞内结构，使细胞外渗透压升高，促进细胞脱水，最终引起细胞的解体死亡。所以，必须在冰冻过程中加甘油等防冻剂，冰冻后根据临床需要再进行解冻、洗涤去甘油处理，是长期保存红细胞的一种理想方法。采供血机构主要运用于RhD阴性红细胞的保存，保存期可长达10年。本血站主张采集之日起7 d内的RhD阴性红细胞加甘油保护剂-65℃以下冰冻保存，调节了江阴地区RhD阴性稀有血型血液供求的不平衡，为需要RhD阴性稀有血型输血的患者提供了方便，保证了紧急状况下RhD阴性稀有血液的供应。

本血站对RhD阴性献血者开展了C、c、E、e抗原检测，并通过计算机系统给每位RhD阴性献血者建立了一个完整的Rh血型电子档案。每年召开稀有血型座谈会，节假日和生日通过平台自动发送祝福，随时更新RhD阴性志愿者名单库，很好地保留了RhD阴性献血者。国外许多国家开展了为长期输血者进行Rh配型服务。作者认为，配型Rh输血在目前经验积累阶段，最好筛选CcEe完全同型的供者血液［12］。当前，国家并未要求对献血者和患者进行Rh血型分型，在《血站技术操作规程（2012版）》和2000年卫生部《临床输血技术规范》中，均仅要求检查RhD血型，判为RhD阳性或阴性，未规定检测RhCcEe抗原。在临床输血时，这使供血者和受血者RhCcEe抗原不合发生免疫反应而产生同种抗体，导致患者日后输血面临更大的风险。所以，对需要长期、反复多次输血的患者，如各种白血病、自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血等患者，有必要进行Rh血型分型，选择Rh表型同型输注。Rh配型输血还可以结合其他血型抗原，预防不规则抗体的产生，减少输血风险，保证临床输血安全。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.20.034［1］。Rh血型系统非常复杂，且所含有的抗原数目最多，共50个［2］，但临床上最主要、最常见的是C、c、D、E、e 5种抗原，其中免疫原性最强的是D抗原。医学上通常将红细胞膜上含有D抗原者称为RhD阳性，而红细胞膜上缺乏D抗原者则称为RhD阴性［3］。RhD阴性血型通常被称为稀有血型，Rh抗原一般都显示剂量效应，纯合子的抗原性要强于杂合子。为进一步完善RhD阴性献血者档案，作者就江阴地区RhD阴性无偿献血者ABO血型、血清学表型和不规则抗体情况进行了调查分析，现将结果报道如下。

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1009-5519（2016）20-3190-02 Rh血型系统是人类红细胞血型系统中最为复杂且最具多态性的系统，在临床输血中其重要性仅次于ABO血型系统

（2016-06-23）