接骨丹对大鼠骨缺损愈合疗效的影像学研究

接骨丹对大鼠骨缺损愈合疗效的影像学研究

骨缺损指骨的结构完整性被破坏，是临床常见病。其典型的缺损局部临床表现结合X线检查即可明确诊断［1］。较小的骨缺损（通常指8 mm以下），有可能自行愈合；但骨缺损过大，或者是较小骨头上的骨缺损很难完全愈合。骨损伤模型一般采用开放性骨折模型制作方法进行制作［2］。

甘肃民间中药接骨丹［3］由西藏山溪鲵组成，可促进细胞增殖、成骨性分化，提高碱性磷酸酶活性、钙盐沉积量、Ⅰ型胶原含量、骨钙素含量和钙化结节数，口服后的代谢产物可刺激大鼠骨髓间充质干细胞增殖，并能促进其成骨性分化［4］。本研究通过大鼠开放型骨折模型制作方法制作骨损伤模型，同时通过此模型考察接骨丹对于骨折愈合及骨形成的促进作用。

1　材料与方法

1.1材料SD大鼠40只，雌雄各半，体质量（230±50）g，购自甘肃中医药大学SPF级动物实验中心，动物质量合格证号：0001112；德国莱佧LEICA RM-2015生物组织切片机；O1ympus BX41显微摄影系统；四川大学Mias病理图像分析系统。实验所用BMP-2兔抗鼠多克隆抗体（北京博奥森生物工程有限公司提供），即用型SABC免疫组化试剂盒（福州迈新生物公司提供）。接骨丹（西藏山溪鲵）购自甘肃省渭源县黄香沟罗家磨民间，经定西市药检所鉴定；盐酸氯胺酮注射液（福建吉田药业有限公司，批号：110530）；药物溶液配制：称取晒干研磨均匀的西藏山溪鲵适量，取生理盐水适量溶解，配制成0.025 g/mL的接骨丹混悬液。

1.2实验方法

1.2.1骨折模型［5］的制造各组大鼠腹腔注射氯胺酮（20 mg/kg），待麻醉后，仰卧固定，对左后肢胫骨处进行脱毛处理、消毒，于左后肢胫骨下端切开1.5～2 cm切口，分离肌肉，避免血管神经损伤，暴露胫骨，用专用电钻于胫骨中端磨出宽4 mm深达髓腔骨缺损，逐层缝合，伤口不包扎不固定［6-7］，每天消毒，7天后分笼饲养。

1.2.2分组将造模成功大鼠随机分为给药组和空白对照组，每组20只。给药组大鼠经灌胃给予治疗量接骨丹（0.25 g/kg），2次/d，连续给药28天，空白对照组灌服2 mL生理盐水。

1.2.3影像学检查于术后第4、7、14、21、28天各组随机选取4只大鼠（雌雄各半）进行影像学检查。

1.2.4影像学检查条件影像学检查在63 kv、374 mA、22 mses、8.1 mAs的条件下进行X线扫描拍片。

1.2.5骨损伤X片评分骨损伤的愈合情况根据影像学检查结果，按下述标准进行评分［8-10］：1）错位：已缺损胫骨无错位包括错位＜0.1 cm者得1分；有错位包括骨折断端错位未超过其断端的1/2或骨折端轻度成角者得0分。2）骨缺损：已缺损胫骨缺损部位部分模糊或消失者得1分；未有明显变化者得0分。3）连接：已缺损胫骨骨折端连接成一整体者得1分；未连接者得0分。4）腓骨：腓骨未断裂或断裂后连接者得1分；腓骨断裂者得0分。5）愈合：已缺损胫骨未愈合包括无内外骨痂或骨折缝依旧者得0分；骨折愈合包括有内外轻度骨痂改变，同时骨折缝变浅或模糊者得1分。

2　结果

药物治疗第4、7天后骨缺损清晰可见，同时空白对照组骨缺损亦未有任何变化，2组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；给药14天给药组骨折断端有大量骨痂生成，骨缺损开始明显变小，空白对照组虽然也有骨痂生成但骨缺损变化不大，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）；给药21天后骨缺损进一步变小甚至消失，与空白对照组比较骨缺损变化不明显；给药28天后骨缺损胫骨基本连接成一个整体，骨愈合显著，空白对照组骨缺损变小，但骨愈合较给药组显著，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1，图1。

表1　接骨丹对大鼠胫骨骨折X线片评分的影响（±s）

表1　接骨丹对大鼠胫骨骨折X线片评分的影响（±s）

注：*表示与空白对照组，P＜0.05。

组别只数剂量/（g · k g-1）X线片评分/分4天7天1 4天2 1天2 8天给药组4 0 . 2 5 2 . 5 0 ± 0 . 5 8 2 . 7 5 ± 0 . 5 0*3 . 5 0 ± 0 . 5 8*3 . 7 5 ± 0 . 5 0*4 . 7 5 ± 0 . 5 0*空白对照组4 0 . 2 5 2 . 0 5 ± 0 . 5 0 2 . 5 0 ± 0 . 5 0 2 . 5 0 ± 0 . 5 8 2 . 7 5 ± 0 . 5 0 3 . 2 5 ± 0 . 5 0

图1　各时期大鼠胫骨X线片比较

3　讨论

中药治疗骨折已在临床实践中证明有一定的优势［11］，中医认为“跌打损伤皆瘀血在内而不散也，血不活则瘀不能去，瘀不去则折不能续”，肝失血养则骨折愈合较为缓慢。甘肃民间中药接骨丹作为接骨续筋的药物，可用来养肝血，去瘀血。X线检查可以较好地反应骨折愈合情况。

本研究采用X线检查方法对各组大鼠骨损伤愈合及治疗效果进行评分。结果表明接骨丹能明显改善骨折愈合情况，提高影像学检查评分，缩短骨折愈合时间，促进骨折愈合。同时，随着给药时间的增加，骨损伤的改善尤为明显。但在治疗骨损伤中接骨丹中哪种主要成分发挥作用，以及作用的部位、靶点、通路，是今后研究的方向和重点。

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［3］《中国药用动物志》协作组.中国药用动物志［M］.天津:天津科学技术出版社，1979：166.

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［6］王华松，黄琼霞，许申明.骨碎补对骨折愈合中血生化指标及TG F-β1表达的影响［J］.中医正骨，2001，13（5）:6-8.

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牛恒立1，赵国彪2，马中兴3，陈晓东4△，白雪红5
1兰州大学第二医院，甘肃兰州730030；2兰州大学药学院；3秦安县人民医院；4甘肃药业信息研究所；5甘肃省人民医院

目的：探讨接骨丹对骨缺损愈合及骨形成的影响。方法：采用开放性骨折模型制作方法制作大鼠骨缺损模型，通过拍摄胫骨X光片，并根据骨折肢X片评分标准，对各组大鼠不同时间段骨折肢进行相应评分，考察接骨丹对骨折愈合及骨形成的影响。结果：给药组较空白组骨缺损部位骨痂生成良好、骨缺损明显减小、骨折肢X线片评分明显高于空白对照组（P＜0.05）。结论：接骨丹对骨缺损愈合及骨形成有促进作用。

骨损伤；骨缺损；接骨丹；X线片

Imaging Study on Curative Effects of JieGu Pills in Healing the Rats with Bone Defect

NIU Hengli1，ZHAO Guobiao2，MA Zhongxing3，CHEN Xiaodong4△，BAI Xuehong5
1 Lanzhou University Second Hospital，Lanzhou 730030，China；2 Pharmacy School of Lanzhou University；3 Qin′an County People′s Hospital；4 Gansu Institute for Pharmaceutical Information；5 Gansu Provincial Hospital

Objective:To explore the influence of JieGu pills on the healing of bone defect and bone formation.Methods:Rat model with bone defect was prepared by adopting open bone fracture model establishment method，the fracture limb of the rats in different groups were scored at different times by filming tibial X-ray according to fractured limb X-ray scaling standard，and the influence of JieGu pills on the healing of bone fracture and bone formation was discussed.Results:Callus formation grew well，and bone defects reduced obviously when the medication group was compared with the blank group，it was higher than blank control group in X-ray scales of fractured limbs obviously（P＜0.05）.Conclusion:JieGu pills could promote the healing of bone defect and bone formation.

bone injury；bone defect；JieGu pills；X-ray

R32

B

1004-6852（2016）05-0124-03

2015-02-27

牛恒立（1972—），男，副主任药师。研究方向：中药药理及制剂。