HPLC测定桂附理中丸中6-姜辣素的含量

戴玮，常新全，肖苏萍，周海燕，郭凯，张斯杰

(中国中药公司，北京 100195)

HPLC测定桂附理中丸中6-姜辣素的含量

戴玮，常新全*，肖苏萍，周海燕，郭凯，张斯杰

(中国中药公司，北京 100195)

目的：建立桂附理中丸中6-姜辣素的HPLC测定方法。方法：采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)为流动相；检测波长为280 nm；流速为1.0 mL·min-1。结果：6-姜辣素在0.001 142～0.022 84 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)，平均加样回收率为101.67%，RSD=0.72%。结论：6-姜辣素的含量测定方法可用于桂附理中丸的质量控制。

桂附理中丸；6-姜辣素；高效液相色谱；含量测定

桂附理中丸由肉桂、附片、党参、炒白术、炮姜、炙甘草六味中药组成，是具有一定应用基础、疗效显著的温阳健脾类中药，有43个厂家拥有该品种的批准文号。由于桂附理中丸含量测定指标成分桂皮醛在方中极不稳定，半年即下降50%以上，无法满足《中华人民共和国药典》(2010年版)[1]的要求，目前已不见该品种在市场上销售。本研究采用高效液相色谱法建立了桂附理中丸中6-姜辣素的含量测定方法，为该制剂的质量标准修订提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters2695高效液相色谱仪；DENVER电子分析天平(1/10，北京赛多利斯仪器系列有限公司)；KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海飞越实验仪器有限公司)。

1.2 试药

6-姜辣素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111833-201102)；甲醇、乙腈为色谱纯；其余试机均为分析纯；水为纯化水。

桂附理中丸(广东佛山冯了性药业有限公司，批号分别为110016，110017，110018，130001，130002，130003)；肉桂、附片、党参、炒白术、炮姜、炙甘草均购自北京华邈中药工程技术开发中心。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

2.2 对照品溶液的制备

取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇配制成质量浓度为0.012 mg·mL-1的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取桂附理中丸，剪碎，取0.5 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加水1 mL，超声处理10 min，并时时振摇使其溶散，甲醇定容至刻度，超声处理45 min，放置至室温，补充甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

取按处方比例及工艺制备的缺炮姜的阴性样品，按2.3项下方法制成阴性样品溶液。

2.5 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液注入液相色谱仪，按2.1方法测定，阴性样品溶液在与对照品色谱峰相应保留时间无吸收峰。结果表明，其他组分对测定无干扰。对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液色谱图见图1。

注：A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性样品溶液。图1 对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液高效液相色谱图

2.6 线性关系考察

取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇分别稀释成质量浓度为0.001 142、0.004 567、0.009 134、0.011 42、0.022 84 mg·mL-1的溶液，摇匀。分别精密吸取上述溶液，按2.1色谱条件进行分析，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=11 501 458.063 4X+1 595.749 5(r=0.999 9)。结果表明，6-姜辣素在0.001 142～0.022 84 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。

2.7 精密度试验

取6-姜辣素对照品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，记录峰面积，经计算RSD=0.3%，表明本方法精密度良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、16 h进样，测定6-姜辣素峰面积，结果RSD=0.6%，表明供试品溶液中6-姜辣素含量在16 h内基本稳定。

2.9 重复性试验

取同一批次桂附理中丸样品6份，按供试品溶液的制备方法制备，按照上述色谱条件测定，结果样品中6-姜辣素平均含量为0.22%，RSD=1.0%，说明本法重复性良好。

2.10 回收率试验

取已知6-姜辣素含量的桂附理中丸6份，每份0.25 g，精密称定，分别加入已知量对照品(0.054 8 mg)，按供试品溶液制备方法操作，按上述色谱条件进行分析，计算平均回收率，结果见表1。

表1 6-姜辣素加样回收率试验(n=6)

2.11 样品含量测定

取不同批次桂附理中丸样品，按供试品制备方法处理，按上述色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 不同批次桂附理中丸含量测定结果(n=2)

3 结论与讨论

由于含有活跃的醛基，桂皮醛光、热稳定性较差。肉桂以粉末入药，其中桂皮醛容易发生降解导致含量降低[2]。

桂附理中丸由肉桂、附片、党参、炒白术、炮姜、炙甘草六味中药组成，其中肉桂具有补火助阳、散寒止痛、温通经脉的功能，附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功能，二者合用补火助阳，共为方中君药。党参健脾益肺、养血生津，白术健脾益气、燥湿利水，二者合用补气健脾，为方中臣药。炮姜温中止痛为方中佐药，炙甘草补脾和胃、调和诸药为方中使药。肉桂和附子虽为方中君药，但在方中用量较少，指标成分含量偏低。党参中的有效成分苍术内酯Ⅲ、党参炔苷和白术中白术内酯Ⅰ、Ⅲ因产地、品种不同含量差异较大[3-5]，不适合作为含量测定指标成分。炮姜虽为方中佐药，但其有效成分6-姜辣素具有抗胃溃疡、止呕的药理作用[6-7]，这与桂附理中丸治疗脾胃虚寒、呕吐的功能相对应，可以在一定程度上反映该药的功能，因此选择6-姜辣素作为桂附理中丸含量测定的新指标。

由于桂附理中丸含有大量炼蜜，加入有机溶剂后形成团块，不利于成分提取，故先加适量水超声分散后再加入有机溶剂提取。通过对不同比例提取溶剂、不同超声提取时间进行考察，确定采用2.3中供试品制备方法。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京，中国医药科技出版社，2010.

[2] 强皎，叶炳皇，林丽，等.丁香酚、桂皮醛不同存在状态下的稳定性影响因素研究[J].中药新药与临床药理，2014，25(1)：89-92.

[3] 杨静，苏强，刘恩荔，等.不同产地党参苍术内酯Ⅲ和党参炔苷含量测定[J].山西医科大学学报，2010，41(8)：698-702.

[4] 黄健,车晓平,陈志峰,等.不同产地党参中党参炔苷的含量测定[J].北京中医药,2011,30(6):467-468.

[5] 许祥君，陈敏，宗露，等.不同品规白术中白术内酯Ⅰ、Ⅲ的含量测定[J].中国医院药学杂志，2011，31(17)：421-1424.

[6] 徐静华,陈雪梅,赵余庆,等.姜辣素对动物实验性胃溃疡的影响[J].沈阳药科大学学报,2011,28(3):221-225.

[7] 王耀霞,杨志宏,岳旺,等.姜辣素在2种呕吐动物模型中止呕作用机制的探讨[J].沈阳药科大学学报,2009,26(2):134-164.

Determinationof6-GingerolinGuifulizhongPills

DAI Wei，CHANGXinquan*，XIAOSuping，ZHOUHaiyan，GUOKai，ZHANGSijie

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China)

Objective：To establish an HPLC method for determination of 6-Gingerol in Guifulizhong Pills.Methods：HPLC was adopted with Waters Symmetry C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was a mixture of acetonitrile-methanol -water(40∶5∶55)，the detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results：The calibration curve of 6-gingerol was linear in the range of 0.001 142～0.022 84 mg·mL-1(r=0.999 9)，and the average recovery of was 101.67%(RSD=0.72%).Conclusion：The method of 6-gingerol determination could be used for the quality control of Guifulizhong Pills.

Guifulizhong Pills；6-gingerol；HPLC；determination

2016-05-13)

*

常新全，高级工程师，研究方向：中药制剂工艺与质量控制，E-mail：13911273610@139.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.12.025