《中国药典》2010年版二部注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠含量测定方法探讨

雷成康,杨范莉

(1.西安市食品药品检验所，西安　710054；2.西安交通大学药学院，西安　710061)



《中国药典》2010年版二部注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠含量测定方法探讨

雷成康1,杨范莉2

(1.西安市食品药品检验所，西安710054；2.西安交通大学药学院，西安710061)

目的 研究磷酸盐缓冲液的用量对舒巴坦对照品色谱峰的影响。方法以半峰宽、拖尾因子、理论板数及质量/面积等参数为指标，研究不同用量的磷酸盐缓冲液对舒巴坦对照品色谱峰的影响程度，从而确定合适的磷酸盐缓冲液用量。结果随着磷酸盐缓冲液用量的增加，各指标均有不同程度的下降。结论磷酸盐缓冲液的用量必须控制在合适的范围内。

舒巴坦；高效液相色谱法；色谱峰评价

注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠收载于《中国药典》2010年版，为头孢哌酮钠及舒巴坦钠不同配比的复方制剂，实验证实，2种成分配伍后增强了抗菌活性[1-2]，应用于临床抗感染效果较佳[3]。其含量测定方法为高效液相色谱法，采用头孢哌酮对照品及舒巴坦对照品分别测量[4-6]。在溶解对照品时，《中国药典》规定：将对照品先以少量磷酸盐缓冲液[0.2mol·L-1的磷酸二氢钠溶液-0.2mol·L-1的磷酸氢二钠溶液(39∶61)]溶解，再用流动相稀释制成1mL各含0.5mg的溶液，磷酸盐缓冲液起助溶作用。《中国药典》规定在溶解对照品时所用磷酸盐缓冲液的用量为“适量”，即能完全溶解对照品的最少溶剂量。笔者在实际检验中发现，磷酸盐缓冲液的用量对舒巴坦峰有明显的影响，进而会影响含量测定的结果。为了研究磷酸盐缓冲液的用量对舒巴坦峰的影响程度，笔者以对照品的峰形、半峰宽、理论板数、拖尾因子及舒巴坦含量测定结果等参数作为评价指标，对磷酸盐缓冲液的用量进行了研究。

1　仪器与试药

1.1仪器Agilent1260型高效液相色谱仪、AgilentChemStation色谱工作站;SHIMADZULC-2010HT型高效液相色谱仪、SHIMADZULC-Solution色谱工作站(日本岛津公司)；SartoriusPB-10型酸度计，SartoriusBT25S型十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)；KQ-300V型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药头孢哌酮对照品(批号130420-201105，质量分数96.5%)、舒巴坦对照品(批号130430-201408，质量分数90.5%)均购于中国食品药品检定研究院。注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(1∶1)3批，分别为：规格2.0g，产地黑龙江；规格1.5g，产地山东；规格1.0g，产地北京。均为西安市食品药品检验所抽验样品留样。其余试剂均为分析纯，水为自制实验用水。

2　方法与结果

2.1色谱条件C18柱(Kromasil100-5C18和PhenomenexLunaC182种，250mm×4.6mm，5μm)；以0.005mol·L-1的氢氧化四丁基铵溶液(取400g·L-1的氢氧化四丁基铵溶液6.6mL，加水1 800mL后，用1mol·L-1的磷酸溶液调节pH值至4.0，再用水稀释至2 000mL)-乙腈(75∶25)为流动相；流速为1mL·min-1；柱温为室温。

2.2溶液的制备

2.2.1磷酸盐缓冲液0.2mol·L-1的磷酸二氢钠溶液-0.2mol·L-1的磷酸氢二钠溶液(39∶61)，测得该缓冲液的pH值为7.0。

2.2.2对照品溶液精密称取头孢哌酮对照品及舒巴坦对照品各10mg，置于同一20mL量瓶中，共称量5份，分别精密加入2.2.1项下磷酸盐缓冲液0.5，1.0，2.0，3.0和5.0mL，振摇使对照品溶解，再用流动相稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液系列1，2，3，4和5号，其质量浓度均为0.5g·L-1左右。

2.2.3样品溶液分别取3批样品各5瓶，按照《中国药典》2010年版二部相关要求分别测定装量差异，求得每批样品的平均装量。分别将3批样品装量差异项下内容物混匀，精密称取相当于头孢哌酮0.1g的内容物，分别置于200mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.3测定方法及结果

2.3.1舒巴坦对照品溶液测定结果按照2.1项下色谱条件，精密吸取1～5号对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。实验条件下，各对照品溶液中舒巴坦峰保留时间约为15min，头孢哌酮峰保留时间约为40min，两峰之间分离度大于26。其中2号对照品溶液图谱见图1，5号对照品溶液中舒巴坦峰放大后的图谱见图2。

图12号对照品溶液色谱图

a.舒巴坦；b.头孢哌酮

Fig.1ChromatogramoftheNo.2referencesolution

a.sulbactam；b.cefoperazone

由图2可知，5号对照品溶液中舒巴坦峰出现了严重的拖尾现象，但如果不将色谱图局部放大，该拖尾现象较难发现。

图25号对照品溶液中舒巴坦色谱图

Fig.2ChromatogramofsulbactaminNo.5referencesolution

通过AgilentChemStation色谱工作站计算出各对照品溶液中舒巴坦峰的峰形、半峰宽、拖尾因子及理论板数等参数，同时计算出舒巴坦峰的质量/面积值，结果见表1。

由表1可知，磷酸盐缓冲液用量大于2mL时，舒巴坦峰出现拖尾，且随着磷酸盐缓冲液用量的增加，色谱峰的半峰宽、拖尾因子及理论板数等参数值变化较为明显。同时，质量/面积值逐渐变小，这种变化将会影响到含量测定结果。当磷酸盐缓冲液用量为0.5mL时，峰参数虽较为理想，质量/面积值也与磷酸盐缓冲液用量为1.0mL时差异无统计学意义，但实际操作较为困难。

表1系列对照品溶液中舒巴坦峰评价

Tab.1Peakevaluationofsulbactaminaseriesofreferencesolutions

对照品溶液序号缓冲盐用量/mL峰形半峰宽/min拖尾因子理论板数质量/面积×100010.5好0.3211.899127874.41121.0好0.3241.905127054.41532.0出现拖尾0.3622.336101784.39343.0拖尾较明显0.4083.25480124.37155.0严重拖尾0.5534.36643614.362

注：半峰宽、拖尾因子与理论板数为平行两针样品的平均值。

2.3.2样品中舒巴坦含量测定结果按照2.2.3项下方法制备供试品溶液，以1～5号对照品溶液峰面积计算样品中的舒巴坦含量(按平均装量计)，色谱图见图3，测定结果见表2。

图3样品溶液色谱图

a.舒巴坦；b.头孢哌酮

Fig.3Chromatogramofthesamplesolution

a.sulbactam；b.cefoperazone

表2舒巴坦含量测定结果

Tab.2Resultsofthecontentdeterminationofsulbactam(%,n=2)

由表2可知，随着磷酸盐缓冲液用量的增大，样品中的舒巴坦含量呈逐渐下降趋势，其中5号对照品测定的含量结果比2号对照品约低1.2%；1号对照品定量结果与2号对照品基本无差异；2号对照品与3号对照品结果虽在允许范围内，但结合峰参数结果证明,磷酸盐缓冲液的用量必须控制在合理范围内。实验结果表明，若舒巴坦对照品称量在10mg左右，磷酸盐缓冲液的用量为1mL左右即可。

3　讨论

为了排除偶然性，将该套实验方案在另一单位不同品牌的高效液相色谱仪上以不同色谱柱、不同实验人员进行了重复性实验，结果证实，磷酸盐缓冲液的用量确实对舒巴坦峰的峰参数及含量测定有影响，该现象并非偶然。

理论上通过测定舒巴坦对照品在磷酸盐缓冲液中的溶解度便可较好地确定磷酸盐缓冲液的用量。但因无法得到足够量的舒巴坦对照品进行该项实验，故本文仅选取了几个有代表性的溶剂用量关键点，根据实验结果来初步判断其大致的溶解情况。

实验结果证实，磷酸盐缓冲液用量的多少对头孢哌酮峰基本无影响，故本文未涉及对其峰的评价及含量测定。

[1]赵岗，康侠明，张小彬，等.不同配比头孢哌酮钠舒巴坦钠体内抗菌作用研究[J].西北药学杂志，2006，21(5)：212-214.

[2]陈吉生，陈碧珊，沈健铟.不同配比的头孢哌酮钠舒巴坦钠体外抗菌活性评价[J].中国现代药物应用，2007，1(2)：6-8.

[3]钟津.头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗60例患者的临床应用效果探讨[J].当代医学，2015，21(24)：137-138.

[4]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].二部.北京：中国医药科技出版社，2010:1042-1043.

[5]王蕙.注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠含量测定方法的改进[J].西北药学杂志，2008，23(1)：46.

[6]黄琦，季晓娟.HPLC法测定注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠(2∶1)的含量[J].浙江科技学院学报，2012，24(1)：44-47.

Discussion about the assay method of cefoperazone sodium and sulbactam sodium for injection in Chinese Pharmacopoeia (2010) volume Ⅱ

LEIChengkang1，YANGFanli2

(1.Xi′an Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710054，China；2.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China)

ObjectiveTostudytheeffectoftheconcentrationofphosphatebufferonthechromatographicpeakofcontrolsubstancesulbactam.MethodThesuitableconcentrationwasdeterminedbyinvestigatingtheeffectoftheconcentrationofphosphatebufferonthechromatographicpeakonthebasisoftheseparametresincludinghalfpeakwidth，trailingfactor，thetheoreticalplatenumberandtheratioofmass/area，etc.ResultWithincreasingtheconcentrationofphosphatebuffer，alltheparametresdecreasedindifferentdegree.ConclusionTheconcentrationofphosphatebuffershouldbecontrolledinasuitablerange.

sulbactam；HPLC；peakevaluation

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.010

R927.2

A

1004-2407(2016)05-0471-03

2015-12-03)