HPLC法测定黄龙咳喘胶囊中淫羊藿苷的含量

常　润，夏传涛，方　宇

(1．西安交通大学药学院，西安　710061；2．陕西东科制药有限责任公司，西安　710043)



HPLC法测定黄龙咳喘胶囊中淫羊藿苷的含量

常润1，2，夏传涛2，方宇1*

(1．西安交通大学药学院，西安710061；2．陕西东科制药有限责任公司，西安710043)

目的建立黄龙咳喘胶囊中淫羊藿苷的HPLC含量测定方法。方法采用HPLC法。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺调pH值约为4.5)(25∶75)；流速：1mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：270nm。结果淫羊藿苷在0.008 1～0.081 0mg·mL-1范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.7%，RSD值为1.62%(n=6)。结论该方法简便，结果准确可靠，可作为该胶囊的质量控制方法。

黄龙咳喘胶囊；淫羊藿苷；高效液相色谱法；含量测定

黄龙咳喘胶囊是由黄芪、地龙、淫羊藿、山楂、桔梗、鱼腥草、射干、麻黄和葶苈子9味中药材制成的胶囊，主要功能为益气补肾、清肺化痰、止咳平喘，用于肺肾气虚、痰热郁肺之咳喘以及急慢性支气管炎、支气管哮喘等。淫羊藿为此方中君药之一，有补肾助阳之效，主要成分为淫羊藿苷。为控制该产品质量，需对其君药药材质量有效控制，故采用HPLC法测定黄龙咳喘胶囊中的淫羊藿苷。

1　仪器与试药

1.1仪器SHIMADZU10A型高效液相色谱仪，紫外检测器。

1.2试药淫羊藿苷对照品，来源于中国药品生物制品检定研究院(供含量测定用)，批号110737-200415；黄龙咳喘胶囊(批准文号：国药准字Z20025060)，杨凌东科麦迪森制药有限公司生产，批号：140701，140702，140703；水：纯化水；色谱纯：乙腈，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色谱柱[1]，流动相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺调pH值约为4.5)(25∶75)；柱温：30 ℃；检测波长：270nm；流速：1mL·min-1；进样体积：10μL[2]。理论板数按照淫羊藿苷峰计算应不低于3 000。

2.2供试品溶液的制备精密称取供试品约0.5g，置于50mL具塞锥形瓶中，精密加入25mL体积分数为50%的乙醇，称定质量后在功率250W、频率40kHz条件下超声处理30min，放冷后用体积分数为50%的乙醇补足失质量，摇匀，滤过，取续滤液后制成。

2.3对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品，加甲醇制成0.03mg·mL-1的溶液。

2.4阴性空白对照品溶液的制备取除去淫羊藿的模拟处方，制成不含淫羊藿的空白样品，按照供试品溶液制法制成阴性空白对照品溶液。

2.5空白干扰实验见图1。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白对照溶液各10μL，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，观察比较。实验结果表明，在阴性空白对照溶液的HPLC色谱图中，与对照品峰相应的保留时间位置上无相应的峰出现，表明阴性空白对照溶液无干扰。

2.6线性关系考察精密称取淫羊藿苷对照品4.0和8.1mg，分别置于100和50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，其质量浓度分别为40.0和162.0μg·mL-1；再精密吸取质量浓度为162.0μg·mL-1的对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分别置于6个2mL的量瓶中，加甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，质量浓度分别为8.1，16.2，32.4，48.6，64.8和81.0μg·mL-1。精密吸取各溶液10μL，分别注入液相色谱仪，按照含量测定方法进行测定，以对照品质量浓度为横坐标、峰面积积分均值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=16 643.96X-3 957.33，r=0.999 9，实验结果表明，淫羊藿苷质量浓度在8.1～81.0μg·mL-1范围内呈良好线性关系。

图1HPLC图

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照品；1.淫羊藿苷

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；C.negativesamplewithouticariin；1.icariin

2.7精密度实验精密吸取同一对照品溶液(40.0μg·mL-1)和供试品溶液(批号140701)，各进样6次，每次进样10μL，测定峰面积积分值，计算得对照品溶液的RSD值为0.83%，供试品溶液的RSD值为2.49%。

2.8稳定性实验取批号为140701的供试品溶液，分别在0，2，4，6和8h测定，淫羊藿苷供试品溶液在8h内峰面积积分值均变化不大，RSD值为1.48%，表明该方法制备供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.9重复性实验取批号为140701的黄龙咳喘胶囊样品6份，按照2.2 项下方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪进行测定，计算得淫羊藿苷的含量分别为1.979 4，1.943 5，1.943 6，2.004 7，1.932 2和1.962 0mg·g-1，平均含量为1.960 9mg·g-1，RSD值为1.39%(n=6)。

2.10加样回收率实验见表1。精密称取已知平均含量为1.960 9mg·g-1的样品6份，每份约0.25g，分别精密加入162.0μg·mL-1的淫羊藿苷对照品溶液各3mL，按照2.2项下方法制备溶液，测定其峰面积，计算回收率。实验结果表明，淫羊藿苷加样平均回收率为98.7%，回收率良好，测定相对标准偏差RSD值为1.62%(n=6)。

表1淫羊藿苷加样回收率实验结果

Tab.1Resultsofrecoverytestforicariin(n=6)

2.11样品测定按照2.2项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件测定3批样品中淫羊藿苷的含量，结果供试品中淫羊藿苷的含量分别为1.668 0，1.908 4和2.520 1mg·g-1。

2.12限度的确定根据以上3批样品的测定结果，淫羊藿苷的含量在1.66～2.52mg·g-1之间，平均值为2.00mg·g-1，根据《中国药典》2010年版一部淫羊藿中淫羊藿苷的含量[3]，考虑到药材的品质差异性和提取率，故初步确定本品1g含淫羊藿以淫羊藿苷计，不得少于1.40mg·g-1。

3　讨论

在供试品溶液的制备方法中，首先对检测波长进行选择，在200～400nm波长范围内进行扫描，最大吸收波长出现在 270nm处，故将270nm确定为检测波长。其次，分别以甲醇、乙醇、体积分数为70%的乙醇和体积分数为50%的乙醇为提取溶剂，超声40min，对提取溶剂进行考察。结果表明，以体积分数为50%的乙醇为提取溶剂，制剂中淫羊藿苷的含量最高，初步拟定供试品采用体积分数为50%的乙醇提取。再次，以体积分数为50%的乙醇为提取溶剂，考察超声提取时间。结果显示，在30min后完成超声提取，制剂中淫羊藿苷的含量不再增加。文献[4-6]中多采用乙腈-水作为流动相，本实验在对流动相考察中分别用甲醇-水体系和乙腈-水体系进行实验，结果表明，流动相为乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺调节pH值约为4.5)(25∶75)时即可达到较好基线分离，且阴性样品无干扰。结果表明，本方法稳定准确，可作为黄龙咳喘胶囊的质量控制方法。参考文献：

[1]李维凤，牛晓峰，李延.HPLC法测定健宝胶囊中淫羊藿苷含量[J].西安交通大学学报：医学版，2002，23(5)：504-505.

[2]张林松.HPLC法测定复方益肾颗粒中淫羊藿苷的含量[J].中草药，2005，36(2)：221-222.

[3]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：306.

[4]温幼敏，潘维民，谭小敏.HPLC法测定温补气血口服液中淫羊藿苷的含量[J].广西中医学院学报，2010，13(1)：58-59.

[5]黎旸，李瑾翡，彭学东.HPLC法测定补肾强身胶囊中淫羊藿苷的含量[J].西北药学杂志，2009，24(4)：266-267.

[6]岐琳，牛晓峰.RP-HPLC法测定前列舒乐片中淫羊藿苷的含量[J].西北药学杂志，2012，27(5)：413-415.

Determination of icariin in Huanglongkechuan Capsules by HPLC

CHANG Run1，2，XIA Chuantao2，FANG Yu1*

(1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Shaanxi Dongke Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710043，China)

ObjectiveTodetermineicariininHuanglongkechuanCapsulesbyHPLC.MethodsHPLCcolumn:TIANHEKromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)；mobilephase：acetonitrile-0.075mol·L-1phosphoricacidsolution(adjustedpHofabout4.5withtriethylamine)(25∶75)；flowrate：1mL·min-1；columntemperature：30 ℃；detectionwavelength：270nm.ResultsIcariinwithin0.008 1-0.081 0mg·mL-1showedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.7%，withRSD1.62%(n=6).ConclusionThismethodissimple，accurateandreliable，andcanbeusedforthequalitycontrolofHuanglongkechuanCapsules.

HuanglongkechuanCapsules；icariin；HPLC；determination

常润，女，硕士研究生，主管药师

方宇，男，教授，博士生导师

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.009

R927.2

A

1004-2407(2016)05-0469-03

2015-10-14)