胸腔积液细胞块联合免疫组化在肺腺癌与间皮细胞增生鉴别诊断中的应用*

林　静，李美琼，农林琳（.桂林医学院附属医院病理科，广西桂林5400；.桂林医学院基础医学院形态实验中心，广西桂林5400）

·论著·

胸腔积液细胞块联合免疫组化在肺腺癌与间皮细胞增生鉴别诊断中的应用*

林静1，李美琼1，农林琳2（1.桂林医学院附属医院病理科，广西桂林541001；2.桂林医学院基础医学院形态实验中心，广西桂林541001）

目的探讨细胞块联合免疫组化方法在鉴别诊断腺癌性胸腔积液和间皮细胞中的作用。方法应用涂片、细胞块、免疫组化方法对80例胸腔积液进行良恶性诊断。结果E-cadherin、TTF-1、CK7在肺腺癌中100%阳性或灶状阳性，Vim及CR阴性。“涂片”检测80例样本中腺癌33例，阴性24例，不能明确诊断23例。“涂片+细胞块+免疫组化“检测80例样本中腺癌48例，阴性31例，不能明确诊断1例。“涂片”与“涂片+细胞块+免疫组化”在诊断腺癌性胸腔积液的灵敏度上比较，差异有统计学意义（χ2=5.63，P＜0.05）。在诊断阴性胸腔积液的灵敏度上比较，差异无统计学意义（χ2= 0.24，P＞0.05）。80例样本中，通过“涂片”方法有23例不能明确诊断，通过“涂片+细胞块+免疫组化”方法有1例不能明确诊断，二者比较，差异有统计学意义（χ2=21.62，P＜0.01）。结论采用“涂片+细胞块+免疫组化”联合检测能够提高胸腔积液中腺癌诊断的灵敏度。

胸腔积液；染色与标记；免疫组织化学；腺癌；增生；上皮细胞

胸腔积液是临床中最为常见的一种体征，炎症、肺腺癌是引起积液的2个常见原因。积液性质的诊断在大多数基层单位主要通过涂片进行，但是由于常规涂片法存在涂片厚，细胞重叠，结构不清，细胞量少、阳性检出率低等缺点，使得诊断的敏感性仅为50%～78%［1］，特别是对细胞形态不典型的间皮细胞、癌细胞的鉴别仅用直接离心涂片法时常难以胜任。文献报道有高达12%的病例会遇到间皮细胞与癌细胞难以鉴别的状况［2］。这种诊断的不明确甚至可以延误治疗。本研究通过采用细胞块技术［3］及相关免疫组化指标选择，对80例胸腔积液样本进行回顾性分析总结，旨在寻找一种高效、经济、适合在基层医院推广的鉴别良恶性胸腔积液的方法。

1　资料与方法

1.1一般资料标本选取2010～2012年80例桂林医学院附属医院住院患者的胸腔积液，均以胸腔积液为主要症状入院。其中36例胸腔积液引流后发现肺部或胸腔占位，19例由于胸腔积液多，无法判断是否具有占位，25例胸腔积液引流后未发现明确占位。

1.2方法

1.2.1涂片及细胞块制作胸腔积液均在120 min内采集、送检、处理。送检积液均沉淀30 min，弃上清，留取底部液体沉渣50 mL，用一次性离心管分管置于低速离心机中2 000转/分，离心5 min，弃上清，混匀，吸取少量沉淀采用涂抹法涂片2张，立即放入95%乙醇中固定30 min后采用HE染色封片。同时，其余沉淀物再次相同条件离心后，将试管上端剪去，仅留取带有沉渣的试管底部，一同放入包埋盒内，先用95%乙醇固定2 h，再转入中性甲醛中固定，常规脱水包埋形成细胞块。细胞块连续切片，一张采用HE染色观察形态，其余供做免疫组化染色。

1.2.2免疫组化染色研究选取如下免疫组化指标E-cadherin、TTF-1、CK7、Vim、CR。鼠抗人单克隆抗体E-cadherin、TTF-1、CK7、Vim，多克隆抗体CR以及二抗试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司，采用免疫组化二步法，采用各抗体已知阳性部位组织块做阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.3结果判断E-cadherin阳性细胞为胞膜/胞浆着色，CK7、CR、Vim阳性细胞为胞浆着色，TTF-1阳性细胞为胞核着色。

1.3统计学处理应用SPSS15.0统计软件进行处理，各组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1细胞块制作效果评估理想的细胞块其细胞聚集紧密成块，可以连续切片、进行各种染色而不脱片或是破碎，切片皱褶较少。镜下观察组织细胞结构清晰，偶有局部细胞脱落情况但并不影响观察诊断及计数。

2.2涂片结果结合涂片形态特点，80例样本中腺癌33例，阴性24例，不能明确诊断23例。

2.3各种免疫组化指标在胸腔积液细胞块中的表达情况E-cadherin、TTF-1、CK7在涂片诊断腺癌的33例胸腔积液病例中，癌细胞100%阳性或灶状阳性表达，Vim 及CR阴性。在涂片诊断阴性的24例胸腔积液病例中，E-cadherin、TTF-1、CK7阳性者1例，对应Vim及CR阴性；E-cadherin、TTF-1、CK7阴性者23例，Vim阳性，CR灶状阳性。涂片不能明确诊断的23例胸腔积液中，E-cadherin、TTF-1、CK7阳性者14例，对应Vim及CR阴性；E-cadherin、TTF-1、CK7阴性者8例，Vim阳性，CR灶状阳性；免疫组化结果不理想无法判断者1例。根据免疫组化结果，80例胸腔积液中，腺癌性胸腔积液48例，良性胸腔积液31例，不能明确诊断1例。

表1　免疫组化结果（n）

2.4不同方法检测胸腔积液灵敏度比较“涂片”检测80例样本中腺癌 33例，阴性 24例，不能明确诊断23例。“涂片+细胞块+免疫组化“检测80例样本中腺癌48例，阴性31例，不能明确诊断1例。“涂片”与“涂片+细胞块+免疫组化”在诊断腺癌性胸腔积液的灵敏度方面比较，差异有统计学意义（χ2=5.63，P＜0.05）。在诊断阴性胸腔积液的灵敏度方面比较，差异无统计学意义（χ2= 0.24，P＞0.05）。80例样本中，通过“涂片”方法有23例不能明确诊断，通过“涂片+细胞块+免疫组化”方法有1例不能明确诊断，二者比较差异有统计学意义（χ2=21.62，P＜0.01）。

表2　不同方法诊断80例胸腔积液灵敏度的区别（n=80）

3　讨　论

胸腔积液的良恶性判断对于临床的治疗有明确的指导意义，提高胸腔积液的阳性检出率一直是病理工作者所追求的。本研究发现80例样本中，通过“涂片”方法有23例不能明确诊断，通过“涂片+细胞块+免疫组化”方法仅有1例不能明确诊断，阳性检出灵敏度比较，差异有统计学意义（χ2=21.62，P＜0.01），即采用联合方法能够诊断更多的病例。另外，涂片诊断腺癌组和涂片诊断阴性组中各有1例免疫表型与“涂片+细胞块+免疫组化”诊断不符，提示光凭涂片的形态诊断可能存在偏差，通过增加细胞块免疫组化的方法，可以提高诊断的准确性。

常规的离心涂片技术，能较准确诊断出典型病例，但实际工作中常受到细胞数量和细胞形态不典型的限制，诊断时常会出现困难［4-5］。细胞学免疫组化在很多单位未常规开展，究其可能的原因包括涂片标本制片重复性差，面积大而耗费试剂多、涂片薄厚不均影响染色，且因染色时脱片导致标本丢失等原因使得操作较为困难。即使染色成功也常会出现背景深、非特异性着色、阳性不可靠等缺点。而细胞块技术的应用则可以很好地解决以上问题。免疫组化对于肿瘤的鉴别诊断、功能分类和指导临床诊断与治疗有重要意义［6］。用细胞块做免疫组化染色，可连续切片，有利于多种抗体组合运用或对某一特定细胞的比较观察，阳性颗粒为棕黄色，定位准确可靠、背景清晰、可重复性高，提高了疑难病例诊断的准确率［7-8］。

本研究采用E-cadherin、TTF-1、CK7、Vim及CR免疫组化指标对胸腔积液进行辅助诊断。

E-cadherin是一类介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，在多种恶性肿瘤中高表达［9］。TTF-1在成人Ⅱ型肺泡上皮中存在，常用于肺腺癌与间皮瘤的鉴别，且TTF-1阳性部位在细胞核，定位准确，易于观察。CK7在腺上皮中有较高的表达，联合TTF-1、E-cadherin能够较好的标记肺腺癌细胞。Vim、CR在正常和肿瘤性间皮细胞表达［10］，E-cadherin、TTF-1、CK7在间皮细胞及其肿瘤中不表达，5种指标联合检测，能够较好地区别肺腺癌及反应性间皮细胞。

胸腔积液采用“涂片+细胞块+免疫组化”联合检查的方法，能够有效提高诊断的阳性率和准确性，方法简单，易于操作，适合在广大基层单位推广。

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［3］魏谨，朱有珍.胸腔积液的细胞块技术应用体会［J］.临床肺科杂志，2012，17（2）：352.

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本刊编辑部

Application of pleural effusion cell block combined with immunohistochemistry in differentiation diagnosis of lung adenocarcinoma and mesothelial cell hyperplasia

Lin Jing1，Li Meiqiong1，Nong Linlin2（1.Department of Pathology，Affiliated Hospital of Guilin Medical University，Guilin，Guangxi 541001，China；2.Morphology the Experiment Center，Guilin Medical University，Guilin，Guangxi 541001，China）

ObjectiveTo investigate the role of cell block combined with immunohistochemical method in the differential diagnosis of lung adenocarcinoma pleural effusion and mesothelial cell hyperplasia.MethodsThe benign and malignant diagnosis in 80 cases of pleural effusion was carried out by using the smear，cell block and immunohistochemical method.Results E-cadherin，TTF-1 and CK7 had 100%positive or focal positive in lung adenocarcinoma，vim and CR were negative.In the smear detection，there were 33 cases of adenocarcinoma among 80 samples，24 cases were negative，23 cases were undetermined diagnosis.In the smear+cell block+immunohistochemistry detection，there were 48 cases of adenocarcinoma among 80 samples，31 cases were negative and 1 case was undetermined diagnosis.The sensitivity for diagnosing adenocarcinoma pleural effusion had statistical difference between the smear and the smear+cell block+s immunohistochemistry（χ2=5.63，P＜0.05）.The sensitivity for diagnosing the negative pleural effusion had no statistical difference（χ2=0.24，P＞0.05）.Among 80 samples，23 cases could not be clearly diagnosed by the smear method，while 1case was not diagnosed by the mear+cellblock+immunhistochemistry method，the difference was statistically significant（χ2=21.62，P＜0.01）.ConclusionAdopting the smear+cell block+immunohistochemistry method can increase the sensitivity for diagnosing lung adenocarcinoma in pleural effusion.

Pleural effusion；Staining and labeling；Immunohistochemistry；Adenocarcinoma；Hyperplasia；Epithelial cells

·论著·

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.03.006

A

1009-5519（2016）03-0338-02

广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题（Z2011183）。

林静（1980-），硕士研究生，副主任医师，主要从事细胞病理学诊断及研究工作。

（2015-11-03）