常轻胶囊增强免疫力功能实验研究

朱久新 刘 影 杜智敏

（哈尔滨医科大学·150081）

·方药研究·

常轻胶囊增强免疫力功能实验研究

朱久新 刘 影 杜智敏

（哈尔滨医科大学·150081）

目的： 研究常轻胶囊增强免疫力功能的作用。方法：采用雌性ICR小鼠，设定0.34,0.67，2.01g/kg三个剂量，每日灌胃给予相应样品，连续给予30天，检测动物体重、胸腺、脾脏、ConA诱导的脾淋巴细胞转化、DNFB诱导的DTH、溶血空斑数、血清半数溶血值、碳廓清指数、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、NK细胞活性的影响。结果：与空白对照组比较，常轻胶囊0.67，2.01g/kg可明显增强小鼠的迟发型变态反应及增强小鼠的碳廓清吞噬指数，0.67，2.01g/kg可提高小鼠的半数溶血值和高剂量能增加小鼠的抗体生成细胞, 2.01g/kg可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结论：根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中的判定标准，认为某品牌常轻胶囊具有增强免疫力的功能。

当今自然环境日趋恶化，社会结构和工作节奏发生了巨大的变化，疾病谱也发生了改变，一些恶性疾病（肿瘤等）发病率呈明显上升趋势，促使人们更加关注身体健康与饮食的相互关系，具有保健功能的食品越来越受到重视。保健食品在我国历史悠久，这是祖国医学中有“药食同源”的理论为指导所致，通过对已报道具有免疫调节作用“药食同源”的传统中药进行筛选，我们在传统中医理论指导下，开发出具有免疫调节功能的常轻胶囊，处方组成为黄芪、山楂、大枣、枸杞子和蚂蚁。本文研究了常轻胶囊对小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性的影响，为其作为保健品应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康 SPF 级雌性ICR小鼠200 只，体重(20±2) g，购于辽宁长生生物技术有限公司。

药品与试剂：绵羊红细胞（SRBC）、鸡红细胞、生理盐水、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、都氏试剂（碳酸氢钠 1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000ml）、印度墨汁、Na2CO3、Hank’s液(pH7.2～7.4)、RPMI 1640完全培养液、小牛血清、青链霉素、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH8.2)、YAC-1细胞、1% NP40、2-巯基乙醇(2-ME)、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、盐酸、异丙醇、MTT、PBS缓冲液(pH7.2～7.4)、丙酮、甲醇、Giemsa染液等。

1.1.2 仪器与设备 动物天平、分析天平、冰箱、离心机、722分光光度计、显微镜、洁净工作台、二氧化碳培养箱、酶标仪、无菌手术器械、游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(25μl)、细胞计数器、纱布、试管、计时器、血色素吸管、24孔培养板等。

1.2 方法

1.2.1 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验和NK细胞活性测定 末次给药后，无菌取脾脏，制备脾细胞悬液，MTT法测定细胞增殖反应。

1.2.2 NK细胞活性测定(测定法) 末次给药后，无菌取脾脏，制备脾细胞悬液，LDH法测定NK细胞活性。

NK%=(反应孔OD－自然释放孔OD)/(最大释放孔OD－自然释放孔OD)×100%

1.2.3 迟发型变态反应（足跖增厚法） 每只鼠经腹腔注射2%（V／V，用生理盐水配制）压积SRBC（2000rpm，10分钟）0.2ml，致敏后4天，测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。然后在测量部位皮下注射20%（V／V，用生理盐水配制）压积SRBC 20μl，于注射后24小时测量左后足跖部厚度，以攻击前后足跖厚度的差值（足跖肿胀度）来表示DTH的程度。

1.2.4 半数溶血值的测定 在实验结束前4～5天2%(v/v)的绵羊红细胞悬液进行动物免疫。免疫4～5天后，摘除眼球取血于离心管内，放收集血清。用SA缓冲液将血清稀释250倍，取1ml置试管内，依次加入10%（V／V，用SA缓冲液配制）压积SRBC 0.5ml，补体1ml（用SA缓冲液按1:10稀释）。另设不加血清的对照管（以SA缓冲液代替）。置37℃恒温水浴中保温30分钟后，冰浴终止反应。2000rpm离心10分钟，取上清液1ml、加都氏试剂3ml，同时取10%（V／V，用SA缓冲液配制）的压积SRBC 0.25ml、加都氏试剂至4ml于另一试管中，充分混匀，放置10分钟后，于540nm波长处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值（HC50）表示，按下式计算。

样品HC50＝样品光密度值／SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数

1.2.5 抗体生成细胞检测。制备脾细胞悬液，采用(Jerne改良玻片法)测定溶血空斑数。

1.2.6 小鼠碳廓清实验和脏/体比值的测定。小鼠按0.1ml/10g体重尾静脉注射1:3.5倍稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10分钟，分别从内眦静脉丛取血20μl，并将其加到2mL Na2CO3溶液中。将小鼠称重后颈椎脱臼处死，取肝脏、脾脏和胸腺去尽筋膜，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。用722分光光度计在600nm波长处测光密度值（OD），以Na2CO3溶液作空白对照。按下式计算吞噬指数α：

1.2.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。半体内法按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。

吞噬率%=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞*100

吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/ 100个巨噬细胞

1.3 数据处理及结果判定

采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。如方差齐，计算F值。F值＜F0.05，结论为各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05，再用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计。

2 结果

2.1 常轻胶囊对小鼠脾脏及胸腺系数的影响

表1 常轻胶囊对小鼠脾脏及胸腺系数的影响

由表1可见，常轻胶囊对小鼠脾脏及胸腺脏器系数无影响（p＞0.05）。

2.2 常轻胶囊对小鼠细胞免疫功能的影响

表2 常轻胶囊对小鼠迟发型变态反应（DTH）、淋巴细胞转化能力的影响

表2 常轻胶囊对小鼠迟发型变态反应（DTH）、淋巴细胞转化能力的影响

注：与阴性对照组比较有显著性差异*P＜0.05。

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由表2可见，常轻胶囊中、高剂量组显著增加小鼠迟发性变态反应（p＞0.05）。

2.3 常轻胶囊对小鼠体液免疫功能的影响

表3 常轻胶囊对小鼠半数溶血值（HC50）、抗体生成细胞的影响

表3 常轻胶囊对小鼠半数溶血值（HC50）、抗体生成细胞的影响

注：与阴性对照组比较有显著性差异*P＜0.05,**P＜0.01。

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由表3可见，常轻胶囊中、高剂量可显著提高小鼠的半数溶血值（p＜0.05及p＜0.01），常轻胶囊高剂量可显著提高小鼠的抗体生成细胞能力（p＜0.05）。

2.4 常轻胶囊对小鼠单核巨噬细胞功能的影响

表4 常轻胶囊对小鼠碳廓清、鸡红细胞吞噬功能的影响

表4 常轻胶囊对小鼠碳廓清、鸡红细胞吞噬功能的影响

注：与阴性对照组比较有显著性差异*P＜0.05,**P＜0.01。

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由表4可见，常轻胶囊中、高剂量可显著提高小鼠的碳廓清指数（p＜0.05），常轻胶囊高剂量可显著提高小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力（p＜0.01）。

2.5 常轻胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

表5 常轻胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

表5 常轻胶囊对小鼠NK细胞活性的影响

由表5可见，常轻胶囊对小鼠NK细胞活性无影响（p＞0.05）。

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3 讨论

在本实验条件下，我们发现常轻胶囊0.67，2.01g/ kg·BW可明显增强小鼠的迟发型变态反应及增强小鼠的碳廓清吞噬指数，0.67，2.01g/kg·BW可提高小鼠的半数溶血值和高剂量能增加小鼠的抗体生成细胞, 2.01g/kg·BW可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中的判定标准，认为某品牌常轻胶囊具有增强免疫力的功能。

黄芪多糖可诱导机体细胞产生相关的体液因子，具有增强腹腔巨噬细胞、淋巴细胞的活性，促进免疫因子的产生[1]；大枣多糖可作为免疫促进剂，能够控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长与衰老；抑制抗体激活促进小鼠脾细胞增殖作用[2,3]。枸杞多糖能够明显的提高吞噬细胞的功能，提高T淋巴细胞的增殖能力，增加血清IgG含量，增强补体活性等作用[4，5]。山楂水提取物能够显著增强体液免疫及细胞免疫的作用，具有增强补体活性，促进T淋巴细胞转化的活性[6,7]。食用蚂蚁含有多种药用成分。据广西中医学院等检测到，鼎突多刺蚁含有多种氨基酸，再加上蛋白质水解的蛋氨酸，共种27氨基酸，其中多数为人体必需的氨基酸。

本研究评价了常轻胶囊增强免疫力的功能，结果表明其有一定的增强免疫力功能，适合免疫力低下人群食用以增强体质，为其作为保健食品开发提供了理论依据。

[1] 黄小英,刘端勇,赵海梅.黄芪多糖调节免疫作用研究进展[J].江西中医学院学报,2008年04期.

[2] 吴海霞,李娜,孙元琳.大枣多糖的研究进展[J].农产品加工(学刊),2009年06期.

[3] 张庆雷，林生、林勤保等.大枣多糖体外抗补体活性剂促进小鼠脾细胞的增殖作用[J].中药药理与临床,1998，14(5)：19-22.

[4] 董进文,胡庆和,高天顺,赵迅霞.枸杞多糖的药理学研究进展[J].中国中医基础医学杂志,1998年05期.

[5] 王琦,张晓丹,张静蕾.枸杞多糖研究进展[J].食品研究与开发,2009年10期.

[6] 翁毅力.山楂的药理作用[J].中国药业,2005年12期.

[7] 江爱龙,刘荣华,陈兰英等.山楂药理与临床研究进展[J].武警医学院学报,2009,18(2): 154-158.

（2017-04-11 收稿）